生物樣品分離技術凝膠色譜法
利用分子大小不同的物質在流過凝膠固定相時的保留時間不同,大分子首先流出,小分子最后流出,可將待測小分子化合物與大分子蛋白質分離。這時待測小分子化合物的濃度被流動相所稀釋,必要時還要進行濃縮后再用色譜分析。......閱讀全文
生物樣品分離技術凝膠色譜法
利用分子大小不同的物質在流過凝膠固定相時的保留時間不同,大分子首先流出,小分子最后流出,可將待測小分子化合物與大分子蛋白質分離。這時待測小分子化合物的濃度被流動相所稀釋,必要時還要進行濃縮后再用色譜分析。
生物樣品分離技術柱色譜法
用能吸附蛋白質的材料裝填成小柱,使欲除蛋白質的樣品流過小柱,樣品中的蛋白質被柱填料吸附,欲測組分不被吸附,從小柱中流出。現已有廠家將這種小柱做成商品出售,稱為預柱。這種預柱可以直接連在HPLC的進樣裝置上,含蛋白質的樣品通過預柱后可直接進入HPLC系統分析。如分析尿中的某些代謝產物時,可將樣品通過預
生物樣品分離技術膜分離法
膜分離技術包括超濾、反滲析、電滲析、微孔過濾等。利用膜分離技術可將樣品小分子化合物和大分子的蛋白質很好地分離。超濾是一種除去樣品中蛋白質和其他大分子的方法,是能用分子分離的薄膜分離技術,依靠薄膜兩側壓力差作為推動力來分離溶液中不同分子量的物質。與沉淀法相比,其優點是適用于小量樣品,不用稀釋樣品也不用
生物樣品分離技術鹽析法
鹽析法利用不同蛋白質在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質。在低鹽濃度下,蛋白質溶解度隨著鹽濃度的升高而增加,稱為鹽溶作用。當鹽濃度不斷升高時,不同蛋白質的溶解度又以不同程度下降,并先后析出沉淀,稱為鹽析作用。這是由蛋白質分子內及分子間電荷的極性基團的靜電引力造成的。由于水中加入了少
生物樣品分離技術加熱法
加熱法當待測組分熱穩定性好時,可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白質沉淀。加熱溫度視待測組分的熱穩定性而定,通常可加熱到90℃。蛋白質沉淀后可用離心或過濾除去,這種方法最簡單,但只能除去熱變性蛋白質。
凝膠色譜法實驗技術—樣品溶液處理的介紹
凝膠色譜法實驗技術—樣品溶液處理：樣品溶液如有沉淀應過濾或離心除去，如含脂類可高速離心或通過Sephadex G-15短柱除去。樣品的粘度不可大，含蛋白為超過4%，粘度高影響分離效果。上柱樣品液的體積根據凝膠床體積的分離要求確定。分離蛋白質樣品的體積為凝膠床的1-4%（一般約0.5-2ml），進
生物樣品蛋白質的常用分離技術
(1)加熱法當待測組分熱穩定性好時,可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白質沉淀。加熱溫度視待測組分的熱穩定性而定,通常可加熱到90℃。蛋白質沉淀后可用離心或過濾除去,這種方法最簡單,但只能除去熱變性蛋白質。(2)鹽析法利用不同蛋白質在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質。在低鹽濃度下,蛋
生物樣品分離技術等電點沉淀法
利用蛋白質在等電點時溶解度最低,用酸、堿調節pH值,可使蛋白質沉淀析出,但這時沉淀不完全,可與有機溶劑沉淀法、鹽析法聯合使用。
食品檢測技術凝膠滲透色譜法進行食品樣品預處理介紹
凝膠滲透色譜法動、植物中農藥殘留檢測分析具有基質復雜多樣,測定干擾嚴重,待測成分種類繁多,含量低,多為微量、痕量組分等特點,其中樣品預處理技術具有十分重要的作用,直接決定了分析結果的精確性。固相萃取和基質固相分散萃取技術常用于果蔬等農殘檢測。固相微萃取技術多用于分析環境樣品如水、土壤等。微波輔助萃取
凝膠色譜法實驗技術—凝膠的選擇介紹
凝膠色譜法實驗技術根據所需凝膠體積，估計所需干膠的量。 一般葡聚糖凝膠吸水后的凝膠體積約為其吸水量的2倍，例如Sephadex G-20的吸水量為20，1 克Sephadex G─200吸水后形成的凝膠體積約40ml。凝膠的粒度也可影響層析分離效果。粒度細胞分離效果好，但阻力大，流速慢。一般實驗
凝膠色譜法實驗技術—凝膠的制備介紹
凝膠色譜法實驗技術—凝膠的制備：商品凝膠是干燥的顆粒使用前需直接在欲使用的洗脫液中膨脹。為了加速膨脹，可用加熱法，即在沸水浴中將濕凝膠逐漸升溫至近沸，這樣可大大中速膨脹，通常在1-2小時內即可完成。特別是在使用軟膠時， 自然膨脹需24小時至數天，而用加熱法在幾小時內就可完成。這種方法不但節約時間
凝膠色譜法的實驗技術
層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外， 直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度，
凝膠滲透色譜法（GPC）分離原理是什么？
GPC的分離原理就是體積排阻理論。色譜柱中，所填裝的多孔性填料表面和內部有各種各樣、大小不一的空的通道，當高分子溶液試樣隨溶劑進入柱子后，由于存在濃度差（推動力），所有溶質分子都力圖向填料內部孔洞滲透。較小分子除了能進入較大的孔，停留時間適當短些；而最大的分子，只能從填料顆粒之間的空隙中通過，所
凝膠滲透色譜法進行樣品預處理方法介紹
動、植物中農藥殘留檢測分析具有基質復雜多樣,測定干擾嚴重,待測成分種類繁多,含量低,多為微量、痕量組分等特點,其中樣品預處理技術具有十分重要的作用,直接決定了分析結果的精確性。固相萃取和基質固相分散萃取技術常用于果蔬等農殘檢測。固相微萃取技術多用于分析環境樣品如水、土壤等。微波輔助萃取廣泛應用于分析
凝膠滲透色譜法進行樣品預處理方法原理
GPC 是基于體積排阻的分離機理,通過具有分子篩性質的固定相,用來分離分子量不同的物質,并可分析分子體積不同、化學性質相同的高分子同系物。GPC 的柱填料為凝膠,是一種表面惰性物質,具有三維網狀結構,含有許多不同尺寸的孔穴,不具有吸附、分配和離子交換作用。當含有多種分子的樣品溶液緩慢流經凝膠色譜柱時
電泳分離技術樣品處理方法
根據樣品分離目的不同,主要有三種處理方法:還原SDS處理、非還原SDS處理、帶有烷基化作用的還原SDS處理。?1)還原SDS處理:在上樣buffer中加入SDS和DTT(或Beta巰基乙醇)后,蛋白質構象被解離,電荷被中和,形成SDS與蛋白相結合的分子,在電泳中,只根據分子量來分離。一般電泳均按這種
凝膠滲透色譜法進行樣品預處理方法柱填料
柱填料是 GPC 分離的關鍵因素,其結構直接影響儀器性能及分離效果。因此,要求柱填料具有化學惰性良好、有一定的機械強度、不易變形、流動阻力小、不吸附待測物、分離范圍廣等性質。柱填料可分為有機凝膠和無機凝膠。一般來說,有機凝膠要求濕法裝柱,柱效較高,但其熱穩定性、機械強度和化學惰性差,凝膠易于老化,對
凝膠色譜法實驗技術—防止微生物污染的相關信息介紹
凝膠色譜法實驗技術—防止微生物污染：交聯葡聚糖和瓊脂糖都是多糖類物質，防止微生物的生長，在凝膠層析中十分重要，常用的抑菌劑有: ⑴疊氨鈉（NaN3） 在凝膠層析中只要用0.02%疊氮鈉已足夠防止微生物的生長，疊氮鈉易溶一水，在20℃時約為40%；它不與蛋白質或碳水化合物相互作用，因此疊氮鈉不
生物芯片技術樣品制備
RNA樣品通常需要首先逆轉錄成cDNA并進行標記后才可進行檢測。目前，由于檢測靈敏度所限，尚難以普通探針對極少量的核酸分子進行雜交和檢測，所以需要對樣品或后續測試信號進行適當的放大。多數方法需要在標記和分析前對樣品進行適當程度的擴增，例如通過PCR方法，以使樣品核酸的拷貝數有所提高達到檢測的靈敏度。
電泳分離技術－凝膠時間異常的原因
通常膠在30MIN-1H內凝。如果凝的太慢,可能是TEMED,APS劑量不夠或者失效。APS應該現配現用,TEMED不穩定,易被氧化成黃色。?如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量過多,此時膠太硬易裂,電泳時易燒膠。
凝膠色譜柱適用于分析分離蛋白和多肽類樣品
凝膠色譜柱專為合成高分子在高溫條件下的GPC分離而設計。該填料為高硬度且經過表面修飾的硅膠顆粒，可解決有機聚合填料如PS/DVB等在有機溶劑中遇高溫溶脹的難題。在有機溶劑中可在高溫度條件下保持高度穩定。此外，它還具有低的傳質阻力，從而可確保了分離中的高的分離效率。凝膠色譜柱的填料是親水而剛性，多孔球
氣相色譜法的樣品前處理技術
?為了擴大氣相色譜法的適用范圍，提高檢測靈敏度，有些樣品在注入色譜柱前需要作適當的前處理。常用的樣品前處理技術有頂空法、衍生化法、裂解法、吸附管法等，下面簡要介紹應用較多的頂空法和衍生化法。一、頂空分析法?? 對于有些固體或液體樣品中的揮發性成分，可采用頂空技術進行試樣的前處理。這種方法是將固體或液
生物芯片技術的生物樣品的制備
分離純化、壙增、獲取其中的蛋白質或DNA、RNA并用熒光標記， 才能與芯片進行反應。用DNA芯片做表達譜研究時，通常是將樣品先抽提MRNA，然后反轉錄成CDNA。同時摻入帶熒光標記的dCTP或dUTP。
凝膠色譜法介紹
?凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術，是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術，由于設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜法主要用于高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。根據分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可
凝膠色譜法原理
凝膠色譜法原理在凝膠色譜中會有三種情況，一是分子很小，能進入分子篩全部的內孔隙；二是分子很大，完全不能進入凝膠的任何內孔隙；三是分子大小適中，能進入凝膠的內孔隙中孔徑大小相應的部分。大、中、小三類分子彼此間較易分開，但每種凝膠分離范圍之外的分子，在不改變凝膠種類的情況下是很難分離的。對于分子大小不同
凝膠色譜法原理
?凝膠色譜法原理 ：凝膠色譜法的固定相為多孔性凝膠類物質，流動相為水溶液或有機溶劑，它是根據不同組分分子體積的大小進行分離的。小分子可以擴散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。全部在死體積前出峰；可對相對分
凝膠色譜法分類
凝膠過濾色譜： 凝膠過濾色譜一般用于分離水溶性的大分子，如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列，洗脫溶劑主要是水。 凝膠滲透色譜： 凝膠滲透色譜法主要用于有機溶劑中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相對分子質量分布分析及分離，常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠，洗脫溶
凝膠色譜法簡介
? 凝膠色譜技術是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分技術，由于設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛采用，不但應用于科學實驗研究，而且已經大規模地用于工業生產。??? 一、基本理論???
凝膠色譜法原理
凝膠色譜法又稱體積排阻色譜法，使用水溶液流動相的稱為凝膠過濾色譜，使用有機溶劑流動相的稱為凝膠滲透色譜。凝膠色譜的固定相是多孔物質，如多孔凝膠、交聯聚苯乙烯、多孔玻璃及多孔硅膠等。試樣是按照其中各組分分子大小的不同而分離的。大于填料微孔的分子，由于不能進入填料微孔，而直接通過柱子，Z先流出柱外，
壓力循環技術實現生物樣品制備
樣品制備在基因組學、蛋白質組學的研究中一直是一個瓶頸，主要是因為缺少高效、自動化的辦法。美國麻省理工大學的專家們發明了壓力循環（Pressure Cycling Technology）樣品制備技術，從而可以安全、有效、快速地從各種細胞、組織、尤其是從那些難溶細胞中（hard-to-ly