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用雙鏈探針雜交檢測另一個遠緣DNA時,探針序列與被檢測序列間有很多錯配。而兩條探針互補鏈之間的配對卻十分穩定,即形成自身的無效雜交,結果使檢測效率下降。采用單鏈探針則可解決這一問題。單鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:(1) 以M13載體衍生序列為模板,用Klenow片段合成單鏈探針; (2) 以RNA為模板, 用反轉錄酶合成單鏈cDNA探針。1. 從M13載體衍生序列合成單鏈DNA探針 合成單鏈DNA探針可將模板序列克隆到噬粒或M13噬菌體載體中,以此為模板,以特定的通用引物或以人工合成的寡合苷酸為引物, 在[a-32P]-dNTP的存在下,由Klenow片段作用合成放射標記探針，反應完畢后得到部分雙鏈分子。在克隆序列內或下游用限制性內切酶切割這些長短不一的產物,然后通過變性凝膠電泳(如變性聚丙烯酰胺凝膠電泳)將探針與模板分離開。雙鏈RF型M13 DNA也可用于單鏈DNA的制備,選用適當的引物即可制備正鏈或負鏈單鏈探針。材......閱讀全文
用雙鏈探針雜交檢測另一個遠緣DNA時,探針序列與被檢測序列間有很多錯配。而兩條探針互補鏈之間的配對卻十分穩定,即形成自身的無效雜交,結果使檢測效率下降。采用單鏈探針則可解決這一問題。單鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:(1) 以M13載體衍生序列為模板,用Klenow片段合成單鏈探針; (2)
分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。 雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連
合成生物學作為迅速發展的交叉學科，已在生物醫藥、新材料、診斷、能源和數據儲存等領域展現越來越廣泛的應用潛力。合成基因組學作為合成生物學的重要研究方向，著重于新生命體系的從頭設計與合成，其以Oligo（寡核苷酸鏈）合成、拼裝和轉移等核心技術為支撐。新生命體系的從頭設計與合成不僅需要合成組成基因組的小片
2.2 Golden Gate組裝Golden Gate組裝技術是基于非同源重組的代表性技術，其利用Ⅱ型限制性酶 BsaⅠ在識別位點外部切割的特性，設計特異的突出序列同時組裝多個片段，且酶切和酶連可以同時進行，原理如圖3所示。首先，擴增目的片段，在兩端加上BsaⅠ識別序列，同時在識別序列內側
中文名稱：單鏈DNA外文名稱：single－stranded DNA術語含義：單鏈DNA就是指以這種狀態存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學性質、吸收光譜、堿基反應性質等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內含有單鏈環狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細胞內增殖時則形成雙鏈DNA。
當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動,用放射性核苷酸代替原先無放射性的核苷酸
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分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于基因的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。1.?切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的
當雙鏈DNA 分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA 聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA
中文名稱：單鏈互補DNA英文名稱：single-strand cDNA;sscDNA定 義：在逆轉錄酶催化下，以信使核糖核酸(mRNA)為模板合成與mRNA序列互補的單鏈DNA。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）?