iPS細胞的制備方法
最初由山中伸彌團隊發現的iPS細胞制備(誘導)方法是以通過慢病毒載體轉入數個轉錄因子為核心,在導入四種轉錄因子后,小鼠的成纖維細胞經過一定時間就會轉變為狀態類似于胚胎干細胞的iPS細胞。使用這種方法制備iPS細胞,首先需要一個特殊的轉基因小鼠品系。這種轉基因小鼠的Fbx15基因下游轉入了一個βgeo元件。該元件由β-半乳糖苷酶基因和新霉素抗性基因(NeoR)融合而成。如果基因表達環境與胚胎干細胞相似,Fbx15基因就會表達。而在一般的成體細胞中,Fbx15基因表達處于關閉狀態。對這種品系的轉基因小鼠來說,細胞如果處于一種與胚胎干細胞相似的狀態,Fbx15基因下游的βgeo元件也隨Fbx15基因會一同表達,βgeo元件中的NeoR基因會使這種細胞獲得對藥物G-418的抗性,而一般的體細胞仍然對G-418敏感。加入G-418后,對G-418敏感的成體細胞會死亡,而與胚胎干細胞狀態相似的細胞因具有G-418抗性,會在篩選中存活[1][......閱讀全文
iPS細胞的制備方法
最初由山中伸彌團隊發現的iPS細胞制備(誘導)方法是以通過慢病毒載體轉入數個轉錄因子為核心,在導入四種轉錄因子后,小鼠的成纖維細胞經過一定時間就會轉變為狀態類似于胚胎干細胞的iPS細胞。使用這種方法制備iPS細胞,首先需要一個特殊的轉基因小鼠品系。這種轉基因小鼠的Fbx15基因下游轉入了一個βgeo
日本開發出iPS細胞大量制備新方法
據日本媒體4月25日報道,京都大學中遷憲夫教授等與日產化學工業組成的研究小組開發成功利用功能性聚合物大批量制備iPS細胞和ES細胞的新方法。 目前,iPS細胞制備主要有粘結培養法和懸浮培養法。粘結培養法不適合大量制備;利用懸浮培養法制備時,因細胞塊的大小不均,易導致細胞壞死和自我分化。新方
iPS細胞操作方法
操作規程一、復蘇1、事先用Matrix進行培養皿/板的包被處理。平時Matrix保存在-20℃,使用之前放在4℃冰箱或冰上進行解凍。待Matrix解凍后,按1:100的比例迅速用PBS液體稀釋。按6孔板每孔加1ml,150px皿加2ml,250px皿加3ml的量加入,加入后迅速搖動皿/板,使加入的M
iPS細胞的性質介紹
iPS細胞性質與胚胎干細胞相似,但在一些方面又存在差異。培養iPS細胞的環境與胚胎干細胞相似。傳統的培養方法是將iPS細胞培養在經絲裂霉素或射線滅活的小鼠胚層成纖維細胞(MEF)組成的飼養層(feeder)上,并使用含有血清及白血病抑制因子(LIF)的培養基中。目前亦已有方法可以將iPS細胞培養在化
iPS細胞面臨的問題
iPS細胞技術已經取得了舉世矚目的進展。一個個突破性的成果既給我們帶來了喜悅,也帶來了新的挑戰,細胞重編程有望迎來一個新的研究浪潮。盡管iPS細胞有著誘人的應用前景,然而,未來iPS細胞的研究也面臨著許多亟需解決的問題:第1,效率問題。目前,誘導產生iPS細胞的率仍然很低,這與基因導人的方式整合位點
iPS細胞建立的過程
(1)分離和培養宿主細胞;(2)通過病毒介導或者其他的方式將若干多個多能性相關的基因導入宿主細胞;(3)將病毒感染后的細胞種植于飼養層細胞上,并于ES細胞專用培養體系中培養,同時在培養中根據需要加入相應的小分子物質以促進重編程;(4)出現ES樣克隆后進行iPS細胞的鑒定(細胞形態、表觀遺傳學、體外分
新方法或可鑒別iPS細胞質量
誘導多功能干細胞(iPS細胞)能夠發育成各種組織和器官,在醫療領域有廣泛應用前景。但部分iPS細胞存在癌變風險,日本一項新研究說,有種新方法能鑒定iPS細胞的質量,有助選出適用的iPS細胞。 京都大學iPS細胞研究所教授山中伸彌率領的研究小組在新一期美國《國家科學院學報》網絡版上報告說,他
Nature:iPS細胞的活體生成
Manuel Serrano 及同事首次發現,體細胞被經典“Yamanaka因子”Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc重新編程為具有多能性的過程可以在活體中實現。對從小鼠的胃、小腸、胰腺和腎臟細胞在活體中誘導生成的“誘導多能干”(iPS) 細胞所做分析顯示,它們比在體外生成的iPS細
日開發出用iPS細胞進行安全治療的方法
誘導多功能干細胞(iPS細胞)擁有發育成各種細胞的能力,但也存在發育成癌細胞的危險,而日本研究人員日前開發的一種新方法解決了這個難題。 日本慶應義塾大學和京都大學研究人員在新一期美國《國家科學院學報》上發表報告說,他們先調查iPS細胞發育成癌細胞的風險,發現了一種安全性很高
日本擬建iPS細胞庫
日本京都大學教授山中伸彌5月11日在京都舉行的誘導多功能干細胞(iPS細胞)國際研討會上透露了日本建iPS細胞庫的計劃。?據日本《每日新聞》5月12日報道,日本規劃中的細胞庫將儲存iPS細胞以及由其分化出來的各種臟器細胞。據山中伸彌介紹,培養iPS細胞相當耗費時日。比如,用于治療脊髓損傷時,在患者受