依賴核酸序列的擴增技術的定義和原理
1.概述：依賴核酸序列的擴增(Nucleic acid sequence-based amplification，NASBA)，又稱自主序列復制系統(self- sustainedsequence replication，3SR)或再生長序列復制技術。1990年Guatelli等首先報道了這一技術.NASBA 主要用于RNA的擴增、檢測及測序.該反應有賴于AMV 逆轉錄酶，T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNaseH)共同協作而完成。NASBA反應體系中除含有上述三種酶外，還含有核糖核苷，兩種特殊的引物和緩沖液。引物I 3‘末端與靶序列互補，5’端含T7RNA多聚酶的啟動子，這一引物是用于合成cDNA的.引物Ⅱ的堿基序列與cDNA的5‘ 未端互補。2.原理：在NASBA反應時，首先引物Ⅰ與RNA模板復性( 結合)，AMV逆轉錄酶催化合成cDNA，RNaseH水解cDNA上的RNA，形成一條單鏈的DNA;引物Ⅱ隨即與此cDNA的5&#......閱讀全文
依賴核酸序列的擴增技術的定義和原理
1.概述：依賴核酸序列的擴增(Nucleic acid sequence-based amplification，NASBA)，又稱自主序列復制系統(self- sustainedsequence replication，3SR)或再生長序列復制技術。1990年Guatelli等首先報道了這一技術.
依賴核酸序列的擴增技術相關
NASBA的簡要過程如下：1.RNA模板鏈進入反應混合物后，第一個引物首先與模板鏈的3'端結束。2. 反轉錄酶，合成反義的補償的DNA鏈。3. RNA 酶H（一種核糖核酸內切酶，能夠特異性地水解雜交到DNA鏈上的RNA磷酸二酯鍵，分解RNA/DNA雜交體系中的RNA鏈，但不能消化單鏈或雙
依賴核酸序列的擴增技術檢測
1 核酸提取 NASBA 方法的核酸提取可按照常規的RNA提取方法進行，根據實際需要可以采取不同的方法。 2 核酸擴增 將純化的RNA 加到標準的NASBA 反應體系中后，先在65 ℃條件下作用5 min 去除RNA 的二級結構，然后在恒溫的42 ℃條件下開始擴增反應。 3 產物的檢測
依賴核酸序列的擴增技術敘述
國內外的研究結果均表明，草莓組織中富含多糖等物質，分離優質核酸較困難，核酸巾的雜質影響taq DNA聚合酶的活性，從而影響PCR技術在草莓病毒檢測中的應用。為了提高利用PCR技術草莓病毒檢測的穩定性，國內外的學者在草莓核酸提取方法做了較多的研究，利用OIAGEN公司生產的植物RNA提取試劑盒(P
依賴核酸序列的擴增技術解析
1.概述：依賴核酸序列的擴增(Nucleic acid sequence-basedamplification，NASBA)，又稱自主序列復制系統(self-sustainedsequence replication，3SR)或再生長序列復制技術。1990年Guatelli等首先報道了這一技術.NA
依賴核酸序列的擴增技術簡述
該技術的檢測反應有賴于AMV逆轉錄酶、噬菌體T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、兩種特別設計的特異性寡核苷酸引物和分子信標探針共同協作而完成。 NASBA全稱是nucleic acid sequence-based amplification，即依賴核酸序列的擴增技術。 依賴核酸序列的擴增技術，是
核酸序列擴增法的定義和原理
中文名稱核酸序列擴增法英文名稱nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定 義一種在等溫系統中擴增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶僅在結合核酸上相應位點時才能起作用的特點，將結合位點序列與靶序列相連，然后產生靶分子的RNA拷貝，形成反轉錄和RN
依賴核酸序列的擴增的基本方法
基本方法為:將引物，標本加入擴增反應液，65℃1min使RNA分子二級結構打開，降溫至37℃加入逆轉錄酶，T7rna聚合酶和RNaseH，并在37℃反應1——1.5小時，其產物經瓊脂 糖電泳，溴乙錠染色即可在紫外儀下看到條帶.NASBA的特點為操作簡便，不需特殊儀器，不需溫度循環.整個反應過程由三種
核酸序列擴增法的定義
中文名稱核酸序列擴增法英文名稱nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定 義一種在等溫系統中擴增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶僅在結合核酸上相應位點時才能起作用的特點，將結合位點序列與靶序列相連，然后產生靶分子的RNA拷貝，形成反轉錄和RN
核酸序列擴增法的技術特點
中文名稱核酸序列擴增法英文名稱nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定 義一種在等溫系統中擴增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶僅在結合核酸上相應位點時才能起作用的特點，將結合位點序列與靶序列相連，然后產生靶分子的RNA拷貝，形成反轉錄和RN
核酸序列的擴增技術優勢
相對于免疫學方法或其他基因檢測法，NASBA在試驗的快速、敏感性、特異性方面有更多的優勢。 特異性強：NASBA是一種快速、等溫的RNA擴增技術，通過AMV逆轉錄酶和T7 RNA聚合酶進行的擴增反應，因為反應條件溫和以及比PCR短的反應時間，因此轉錄更加忠實于模板，錯配率很低，因而特異性更強。
轉錄依賴的擴增系統的定義方法
1.概述：轉錄依賴的擴增系統(Transcript-based amplification system，TAS)，是Kwen等人于1989年研究報道的，主要用于擴增RNA. 合成A、B引物，引物A的3‘末端與待擴增RNA互補，其5’端有T7RNA多聚酶的啟動子信息.逆轉錄酶以A引物為起點合成cDN
恒溫核酸擴增技術的擴增速度
由于恒溫核酸擴增只需要在一個溫度下進行，相比較于PCR不同溫度之間的循環，恒溫擴增不需要反復的升溫降溫過程，有些恒溫擴增的速度是快于PCR的擴增速度的。例如：環介導恒溫核酸擴增（LAMP），重組聚合酶擴增法（RPA）以及切刻內切酶恒溫擴增（NEAR）。目前英國公司optigene已經成功的改造了
核酸擴增—轉錄介導的擴增技術(TMA)
TMA是一種利用RNA聚合酶和逆轉錄酶在約42℃等溫條件下來擴增RNA或DNA的技術，其原理是帶有T7 RNA聚合酶識別的啟動子序列的啟動子引物與模板退火經反轉錄形成RNA-DNA雜交分子，被反轉錄酶的RNase H活性水解形成單鏈RNA，然后與引物2退火，通過反轉錄合成雙鏈DNA，在T7 RN
基因擴增技術的定義
又稱無細胞分子克隆系統或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法，是基因擴增技術的一次重大革新。可將極微量的靶DNA特異地擴增上百萬倍，從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力，能檢測單分子DNA或對每10萬個細胞中僅含1個靶DNA分子的樣品，因而此方法立即在分子生物學、微生物學、醫學及遺傳學等多領域
核酸擴增—鏈置換擴增技術(SDA)
SDA是一種基于酶促反應的DNA體外等溫擴增技術，采用標記的兩種不同熒光基團的探針。在SDA過程中，該探針被摻入到雙鏈擴增產物中，由限制內切酶的酶切使淬滅基團與熒光基團分開，從而釋放熒光，用熒光偏振檢測法定量檢測。SDA較之PCR有更高的擴增效率，耗時僅30min。其基本系統包括一種限制性核酸內
序列特異性引物的定義和技術特點
序列特異性引物指一種測定基因突變的方法。即利用針對點突變的2個等位特異性寡核苷酸(ASO)引物(A、B標記其中之一)與另一共同引物（C）組成引物系統；在引物延伸時，A與B同時競爭靶序列上同一復性位點，擴增反應后，經凝膠電泳及放射自顯影，膠片上的顯帶是標記同位素的引物所擴增的產物。
恒溫核酸擴增技術通量
在實際的產業化中，分子診斷儀器的通量往往至關重要。對于qPCR而言，由于引物設計的成熟和熒光通道的多樣性，往往可以比較好的實現高通量檢測。由于恒溫核酸擴增技術引物設計較為困難，單一的反應溫度會造成引物和模板，引物與引物之間的非特異性鏈接和擴增，使得恒溫擴增的檢測通量受到限制。但同時也得益于反應溫
恒溫核酸擴增技術概述
恒溫核酸擴增技術是利用各種酶，引物，脫氧核苷三磷酸（dNTP），模板DNA以及緩沖液的混合物在同一溫度下溫浴一定時間，讓不同的酶與DNA進行反應，從而達到特定DNA片段的擴增。與傳統的PCR核酸擴增相比，恒溫核酸擴增不需要在不同溫度之間的轉換，只要保持酶反應的最佳溫度，37℃、42℃、56℃或6
標準核酸序列的使用和維護
標準核酸序列的使用 將按DNA測序技術指導原則測定得到的供試品DNA序列與標準核酸序列進行計算比對，進而結合判定標準進行種屬鑒別或鑒定。判定標準的制定應考慮不同物種的變異范圍，并在相應通則或品種項下予以明確。核酸序列比對方法一般建議根據樣品特點從以下三種方法中選擇采用。 1.BLAST法
基因擴增的定義和原因
基因擴增（gene amplification）是指某一個特定基因的拷貝數選擇性地增加而其它基因的拷貝數并未按比例增加的過程?[1]??。基因擴增產生的可能原因：1）由錯誤的DNA復制和修復導致的基因復制；2）自私遺傳元件偶然捕獲而導致的DNA重復；3）人工聚合酶鏈式反應（PCR）擴增。
基因擴增技術原理和過程
PCR擴增DNA的原理是:先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈,然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物,即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段,一般需20-30個堿基對,過少則難保持與DNA
停止轉移序列的定義和功能
停止轉移序列（stop transfer sequence），肽鏈上的一段特殊序列，與內質網膜的親合力很高，能阻止肽鏈繼續進入內質網腔，使其成為跨膜蛋白質。
cDNA末端快速擴增技術的定義
定義：cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA ends, RACE)是一種基于PCR從低豐度的轉錄本中快速擴增cDNA的5'和3’末端的有效方法。
cDNA末端快速擴增技術的定義
⑴.5’ RACE-PCR：利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點，以連有SMART寡核營酸序列通 用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準第一鏈cDNA。然后用一個基因特異引物GSP2 (gene specific primer,GSP)作為上游引物
核酸等溫擴增技術及其應用
據微生物學家的估計，采用培養技術，僅有約1%的細菌可以培養。在過去的一個世紀里，以聚合酶鏈反應（PCR）為代表的基于核酸的檢測技術發展迅速，為其他病原體的精確檢測診斷提供了可能。毋庸置疑，Kary Mtlllis發明的PCR技術是20世紀80年代分子生物學領域的一項革命性突破。也許他本人當時也沒有想
核酸等溫擴增技術有什么
環介導等溫擴增技術（LAMP）。依賴于核酸序列的擴增技術（NASBA）。滾環擴增技術（RCA）。單引物等溫擴增技術（SPIA）。依賴于解旋酶的等溫擴增技術（HAD）。鏈接代擴增技術（SDA）。快速等溫檢測放大技術（RIDA）。切刻內切酶核酸恒溫擴增技術（NEMA）。核酸等溫擴增技術，無論是在實際操作
EMA－常溫核酸擴增技術介紹
基于分子仿生學的原理，把生物體內(如大腸桿菌，酵母或人體等)多酶介導的核酸復制機理在體外再現，使痕量的核酸靶標在普通生物耐受的條件下(常溫下)進行快速的擴增，同時利用特異性熒光探針結合擴增產物，通過熒光檢測儀實時監測熒光信號，實現核酸靶標的快速擴增和檢測。?常溫核酸擴增技（簡稱EMA技術），是由點晶
恒溫核酸擴增技術的特異性
由于恒溫核酸擴增的整個反應是沒有溫度的變化，模板DNA雙鏈的打開，引物與互補片段的鏈接以及新片段的合成都是在同一溫度下進行的。這就造成某些情況下的反應體系里引物之間形成非特異性互補，擴增，最后造成假陽性的結果。與PCR相比，恒溫核酸擴增更易出現假陽性的結果。
基因擴增技術的原理
PCR擴增DNA的原理是：先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈，然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物，即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段，一般需20-30個堿基對，過少則難保持與DNA