聚合酶鏈反應的引物設計原則
PCR反應中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條DNA單鏈為基準（常以信息鏈為基準），5′端引物與位于待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位于待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。（1）引物設計的基本原則引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。引物內部不應出現互補序列。兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續8個堿基在待擴增區以外不能有完全互補序列，否則易導致非特異性擴增。引物3‘端的堿基，特別是最末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，最佳選擇是G和C。引物的5′端可以修飾。如附加限制酶位點，引入突變位點，用生物素、熒光物質、地高辛標記，加入其它短......閱讀全文
聚合酶鏈反應的引物設計原則
PCR反應中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條DNA單鏈為基準（常以信息鏈為基準），5′端引物與位于待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位于待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。（1）引物設計的基本原則引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。引物堿基：G+
影響聚合酶鏈反應的引物設計相關介紹
要擴增模板DNA，首先要設計兩條寡核苷酸引物，所謂引物，實際上就是兩段與待擴增靶DNA序列互補的寡核苷酸片段，兩引物間距離決定擴增片段的長度，兩引物的5’端決定擴增產物的兩個5’末端位置。由此可見，引物是決定PCR擴增片段長度、位置和結果的關鍵，引物設計也就更為重要。 引物設計的必要條件是與引
引物設計的引物設計原則
1、引物長度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之間，Tm值曲線以選取72度附近為佳，5'到 3
引物設計的引物設計原則
1、引物長度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之間，Tm值曲線以選取72度附近為佳，5'到 3
引物設計的引物設計原則
1、引物長度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之間，Tm值曲線以選取72度附近為佳，5'到 3
引物設計的引物設計原則
1、長度：15—30bp，其有效長度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否則PCR的最適延伸溫度會超過Taq酶的最佳作用溫度(74度)，從而降低產物的特異性。2、G十C含量：應在40%一60%之間，PCR擴增中的復性溫度一般較Tm值低等于引物的Tm值減去5—10度。引物長度小于20時，
聚合酶鏈反應（PCR）－技術引物的設計以及初步篩選
①引物的長度一般為15-30 bp,最好在18~24 bp,因為太短易形成錯配(False priming) 降低特異性,而太長也會降低特異性,并且降低產量 。②引物在模板內最好具有單一性,也就是說在模板內部沒有錯配。特別是3’端,一定要避免連續4個以上的堿基互補錯配。③引物序列的GC 含量最好在4
聚合酶鏈反應（PCR）－技術引物設計的注意事項
擴增已知基因時經過初次篩選和二次篩選后得到的引物基本上能夠滿足要求,但是當運用比較基因組學分離新基因時,設計引物還應注意以下兩點:① 模板的選擇。如果以DNA為模板設計引物, 首先在Genebank中找到與待分離新基因同源的其它物種的該基因。利用工具把已檢索到的基因進行同源性比較,根據比較基因組定位
引物設計的原則
首先引物要跟模板緊密結合，其次引物與引物之間不能有穩定的二聚體或發夾結構存在，再次引物不能在別的非目的位點引起DNA聚合反應（即錯配）。圍繞這幾條基本原則，設計引物需要考慮諸多因素，如引物長度（primer length）、產物長度（product length）、序列Tm值（melting tem
引物的設計原則
引物設計原則1、長度：15—30bp，其有效長度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否則PCR的最適延伸溫度會超過Taq酶的最佳作用溫度(74度)，從而降低產物的特異性。2、G十C含量：應在40%一60%之間，PCR擴增中的復性溫度一般是較低Tm值引物的Tm值減去5—10度。引物長度小
引物的設計原則
引物設計原則1、長度：15—30bp，其有效長度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否則PCR的最適延伸溫度會超過Taq酶的最佳作用溫度(74度)，從而降低產物的特異性。2、G十C含量：應在40%一60%之間，PCR擴增中的復性溫度一般是較低Tm值引物的Tm值減去5—10度。引物長度小
PCR引物設計原則
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可以在
PCR引物設計原則
實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或發夾結構。引物設計應注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30 bp，常用的是18-27 bp。2．引物序列在模板內應當沒有相似性較高，尤其是3’端相似性
PCR引物設計原則
實驗概要PCR是目前研究DNA、RNA等核酸的非常有效和最主要的方法之一。本Protocol對于PCR引物設計中的一些基本原則給予闡述，希望能對廣大研究人員的研究工作帶來方便。實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避
PCR引物設計原則
? PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可
PCR引物設計原則
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。? 要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那
Primer－引物設計原則
概念 引物，是一小段單鏈DNA或RNA，作為DNA復制的起始點，在核酸合成反應時，作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發點而起作用的多核苷酸鏈，在引物的3′-OH上，核苷酸以二酯鏈形式進行合成，因此引物的3′-OH，必須是游離的。類型 存在有自然中生物的DNA復制引物（RNA引物）和聚合酶鏈式反應(
設計引物遵循原則、引物保存和各種PCR的引物設計
一 設計引物應遵循以下原則1 、引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。2 、引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。3 、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上
PCR引物設計原則
PCR-引物設計原則 ? 1.引物最好在模板cDNA的保守區內設計。 DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。 2.引物長度一般在15~30堿基之間。
PCR儀引物設計原則
引物長度要滿足特異性需要,一般可在18~25個堿基之間；擴增長片段時最好在24~30個堿基之間； · 當引入克隆位點時,引物末端應額外增加3個以上堿基； · (G+C)%含量應盡量控制在40~60%,兩條引物的(G+C)%含量應盡量接近； · 引物中GC堿基分布均勻； · 盡量避免相同堿
PCR引物設計原則
1.引物最好在模板cDNA的保守區內設計。DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。2.引物長度一般在15~30堿基之間。引物長度（primer leng
PCR引物設計原則簡介
實驗步驟首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物不能在模板的非目的位點引發DNA 聚合反應(即錯配) ，再次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或發夾結構。引物設計應注意如下要點：1．引物的長度一般為15-30 bp，常用的是18-27 bp。2．引物序列在模板內應當沒有相似性較高，尤其是3’端相似性
聚合酶鏈反應（PCR）－技術引物的最終評估
當我們經過初次篩選和二次篩選后得到的那對引物便可以用于合成,合成后我們經過 PCR擴增可以對引物進行最終的評估。一是PCR擴增的特異性和效率。經過PCR條件優化后能否獲得特異性條帶,即無目的條帶之外的多余條帶。另外,PCR產物的量是否足夠,即無不出帶和條帶很弱的現象。二是以DNA為模板設計引物時,P
引物設計（Primer－Design）的原則
首先引物要跟模板緊密結合，其次引物與引物之間不能有穩定的二聚體或發夾結構存在，再次引物不能在別的非目的位點引起DNA聚合反應（即錯配）。圍繞這幾條基本原則，設計引物需要考慮諸多因素，如引物長度（primer length）、產物長度（product length）、序列Tm值（melting t
聚合酶鏈式反應的引物設計的基本原則
①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。 ②引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。 ③引物內部不應出現互補序列。 ④兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3
聚合酶鏈式反應（PCR）引物設計的基本原則
引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。引物內部不應出現互補序列。兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。引物與
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑（Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物，操作時應穿實驗服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 處理的水
關于基因擴增技術—聚合酶鏈反應的引物介紹
基因擴增技術—聚合酶鏈反應結果的特異性取決于引物的特異性，擴增產物的大小也是由特異引物限定的。因此，引物的設計與合成對PCR的成功與否起著決定性的作用。合成的引物必須經聚丙烯酰胺凝膠電泳或反向高壓液相層析（HPLC）純化。因為合成的引物中會有相當數量的“錯誤序列”，其中包括不完整的序列和脫嘌呤產
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
差異顯示聚合酶鏈反應（PCR) 可促進在諸多物種中與污染暴露相關的新分子標志物的鑒定。至今，已有多種差異顯示方法被詳細描述。這里，我們描述了一種改良的RNA 隨機引物觸發的 PCR 方 法（RNAarbitrarily primed PCR， RAP-PCR) , 主要涉及通過 羅 丹 明（rhod
PCR技術要素引物設計原則
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物內