單鏈構象多態性的實驗步驟
利用PCR從提取出的DNA中擴增16S rRNA基因。利用λ-外切核酸酶消化掉一條鏈(其中一個PCR引物被磷酸化,這條鏈將被去除)。非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。......閱讀全文
單鏈構象多態性的實驗步驟
利用PCR從提取出的DNA中擴增16S rRNA基因。利用λ-外切核酸酶消化掉一條鏈(其中一個PCR引物被磷酸化,這條鏈將被去除)。非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。
單鏈構象多態性的實驗步驟
利用PCR從提取出的DNA中擴增16S rRNA基因。利用λ-外切核酸酶消化掉一條鏈(其中一個PCR引物被磷酸化,這條鏈將被去除)。非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。
單鏈構象多態性
單鏈構象多態性(signle strand conformation polymorphism,SSCP)是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構象差異,這種差異將造成相同或相近長度的單鏈DNA電泳遷移率不同,從而可用于DNA中單個堿基的替代、微小的缺失或手稿的檢測。用SSCP法檢查基因突變時,通常
單鏈構象多態性簡介
單鏈構象多態性,在一定條件下, 單鏈DNA可形成特有的二級結構。不同 DNA鏈上單個堿基的改變可引起其二級結 構的改變,從而改變DNA鏈在非變性膠中 的電泳遷移率形成的多態性稱作單鏈構象多 態性。單鏈DNA片段呈復雜的空間折疊構 象。這種立體結構主要是由其內部堿基配對 等分子內相互作用力來維持的
單鏈構象多態性的原理
單鏈構象多態性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以檢測DNA序列之間的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群體的多樣性。在低溫條件下,單鏈DNA呈現一種由內部分子相互作用形成的三維構象,它影響了DNA在非變性凝膠中的遷
單鏈構象多態性的應用
單鏈構象多態性可用于預篩選克隆文庫。可對其中的某一個條帶進行測序,并與數據庫中已知序列比對。
單鏈構象多態性的原理
單鏈構象多態性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以檢測DNA序列之間的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群體的多樣性。在低溫條件下,單鏈DNA呈現一種由內部分子相互作用形成的三維構象,它影響了DNA在非變性凝膠中的遷
PCR單鏈構象多態性分析
PCR -單鏈構象多態性分析(PCR -single strand conformation analysis,PCR -SSCP) 是近年來在基因突變檢測中運用最廣泛的方法之一。PCR -SSCP 技術憑借突變可引起單鏈DNA三級構象改變,通過觀察單鏈DNA在非變性聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率漂移
單鏈構象多態性的應用介紹
單鏈構象多態性可用于預篩選克隆文庫。可對其中的某一個條帶進行測序,并與數據庫中已知序列比對。
單鏈構象多態性的原理簡介
單鏈構象多態性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以檢測DNA序列之間的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群體的多樣性。在低溫條件下,單鏈DNA呈現一種由內部分子相互作用形成的三維構象,它影響了DNA在非變性凝膠中
單鏈構象多態性分析(SSCP)技術
SSCP是一種簡便快速的檢測DNA或cDNA突變的技術。??????? 其技術原理和過程是:將PCR擴增到的待測DNA或cDNA片段變性,成為單鏈DNA,在一定條件下,通過聚丙烯酰胺凝膠電泳將單鏈DNA變性。??????? 由于單鏈DNA的空間構象與分子內堿基組成密切相關,一個堿基的差異即可形成不同
單鏈構象多態性的結構及應用
單鏈構象多態性,在一定條件下, 單鏈DNA可形成特有的二級結構。不同 DNA鏈上單個堿基的改變可引起其二級結 構的改變,從而改變DNA鏈在非變性膠中 的電泳遷移率形成的多態性稱作單鏈構象多 態性。單鏈DNA片段呈復雜的空間折疊構 象。這種立體結構主要是由其內部堿基配對 等分子內相互作用力來維持的,當
關于單鏈構象多態性的基本介紹
單鏈構象多態性,在一定條件下, 單鏈DNA可形成特有的二級結構。不同 DNA鏈上單個堿基的改變可引起其二級結 構的改變,從而改變DNA鏈在非變性膠中 的電泳遷移率形成的多態性稱作單鏈構象多 態性。單鏈DNA片段呈復雜的空間折疊構 象。這種立體結構主要是由其內部堿基配對 等分子內相互作用力來維持的
關于單鏈構象多態性的原理介紹
單鏈構象多態性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以檢測DNA序列之間的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群體的多樣性。在低溫條件下,單鏈DNA呈現一種由內部分子相互作用形成的三維構象,它影響了DNA在非變性凝膠中
單鏈構象多態性的原理及應用
單鏈構象多態性(single-strand conformation polymorphism, SSCP)是一種分離核酸的技術,可以分離相同長度但序列不同的核酸(性質類似于DGGE和TGGE,但方法不同)。原理單鏈構象多態性(Single-strand conformation polymorph
分子生態學單鏈構象多態性
單鏈構象多態性,在一定條件下, 單鏈DNA可形成特有的二級結構。不同 DNA鏈上單個堿基的改變可引起其二級結 構的改變,從而改變DNA鏈在非變性膠中 的電泳遷移率形成的多態性稱作單鏈構象多 態性。單鏈DNA片段呈復雜的空間折疊構 象。這種立體結構主要是由其內部堿基配對 等分子內相互作用力來維持的,當
通過單鏈構象多態性分析檢測基因突變實驗
實驗材料人類基因組 DNA試劑、試劑盒礦物油PCR引物A和B多核苷酸激酶和10 X 緩沖液4dNTP 混合液Tag DNA 聚合酶10 X PCR 擴增緩沖液低膠凝 溶點瓊脂糖二甲基二氯硅烷丙烯酰胺原溶液10 X TBE 緩沖液過硫酸銨EDTA2 X 甲酰胺加載緩沖液儀器、耗材水浴鍋循環變溫加熱器D
單鏈構象多態性的結構特點和作用
單鏈構象多態性,在一定條件下, 單鏈DNA可形成特有的二級結構。不同 DNA鏈上單個堿基的改變可引起其二級結 構的改變,從而改變DNA鏈在非變性膠中 的電泳遷移率形成的多態性稱作單鏈構象多 態性。單鏈DNA片段呈復雜的空間折疊構 象。這種立體結構主要是由其內部堿基配對 等分子內相互作用力來維持的,當
單鏈構象多態性診斷法相關介紹
單鏈構象多態性(signlestrand conformation polymorphism,SSCP)是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構象差異,這種差異將造成相同或相近長度的單鏈DNA電泳遷移率不同,從而可用于DNA中單個堿基的替代、微小的缺失或手稿的檢測。用SSCP法檢查基因突變時,通
毛細管電泳法分析單鏈構象多態性實驗
基本方案1 毛細管電泳的樣品準備 基本方案2 應用 ABI 310基因分析儀的自動化毛細管電泳 基本方案3 應用ABI PRISM 3100基因分析儀的自動化毛細管芯片電泳 ? ? ? ? ? ?
毛細管電泳法分析單鏈構象多態性實驗
單鏈構象多態性(SSCP) 是最常用的突變檢測方法之一。應用毛細管電泳法,通過 DNA 在非變性聚合物中被分離,可以區分野生型和突變型 DNA 片段。通過給每條鏈貼上不同的標簽可以區分兩條鏈。構象是蕰度決定的,因此,凝膠電泳時要在不同的溫度下以實現一個高敏感性。毛細管電泳的樣品準備實驗材料5'
毛細管電泳法分析單鏈構象多態性實驗(三)
應用ABI PRISM 3100基因分析儀的自動化毛細管芯片電泳 實驗材料 PCR 產物5% 非變性引物 試劑、試劑盒 10 X 基因分析儀緩沖劑Milli-Q 級別的超純水 儀器、耗材 ABI PRISM 3100 基因分析儀基因掃描毛細管芯片 實
毛細管電泳法分析單鏈構象多態性實驗(二)
應用 ABI 310基因分析儀的自動化毛細管電泳實驗材料PCR 產物5% 非變性引物試劑、試劑盒10 X 基因分析儀緩沖劑Milli-Q 級別的超純水儀器、耗材ABI PRISM 310 基因分析儀基因分析儀毛細管基因掃描分析軟件實驗步驟1.將 PCR 管放在樣品槽上。參照制造商的說明書將 ABIP
單鏈構象多態性和異源雙鏈分析方法檢測突變實驗
試劑、試劑盒 擴增緩沖液dNTP 混合溶液甲酰胺上樣緩沖液蔗糖凝膠緩沖液TBE 電泳緩沖液限制性內切酶熱穩定 DNA 聚合酶人類基因組 DNA正向引物和反向引物[a-32P]dCTP丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸胺甘油TEMED儀器、耗材 帶屏障裝置的自動移液器吸頭 沸水浴電泳板、破璃和 0.4 mm 隔
單鏈構象多態性和異源雙鏈分析方法檢測突變實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 擴增緩沖液 dNTP 混合溶液 甲酰胺上樣緩沖液 蔗糖凝膠緩沖液 TBE 電泳緩沖液 限制性內切酶 熱穩定 D
單鏈構象多態性和異源雙鏈分析方法檢測突變實驗
險測突變的目的主要是為弄懂人類遺傳性疾病的分子機制,以便有效的針對這些疾病進行預防、診斷和治療,但更多的是用于分析不同生物體基因型與表型之間的關聯。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒擴增緩沖液dNTP 混合溶液甲酰胺上樣緩沖液蔗糖
單鏈構象多態性和異源雙鏈分析方法檢測突變實驗
試劑、試劑盒 擴增緩沖液dNTP 混合溶液甲酰胺上樣緩沖液蔗糖凝膠緩沖液TBE 電泳緩沖液限制性內切酶熱穩定 DNA 聚合酶人類基因組 DNA正向引物和反向引物[a-32P]dCTP丙烯酰胺雙丙烯酰胺過硫酸胺甘油TEMED 儀器、耗材 帶屏障裝置的自動移液器吸頭 沸水浴電泳板、
PCRSSCP(聚合酶鏈反應單鏈構象多態)實驗步驟
一. 樣品的制備1. 設計引物。用Oliga6.0對目的基因進行分析,設定引物,引物長度18-21個堿基,擴增片段以200-300bp最為合適。2. PCR擴增并檢測。根據不同的引物挑選適合的退火溫度進行PCR擴增。擴增產物用2-2.5%的瓊脂糖膠跑水平電泳檢測,上樣量3-5ul。PCR產物為 10
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析-(PCRSSCP)-實驗方法
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析 (PCR-SSCP)? ?? 聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年來
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析-(PCRSSCP)
聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年來發展起來的一種基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序為: