基因組印跡的分子機理
從目前研究結果來看，基因印跡的發生主要有以下兩種機理： 一方面，研究發現，基因組印跡的分子機理與印跡基因DNA中胞嘧啶甲基化尤其是CpG島的甲基化密切相關，胞嘧啶甲基化是DNA的一種共價修飾。另外還有特殊的染色質結構和反義轉錄產物等可能都是基因印跡產生和維持的重要因素。 基因印跡中，卵子和精子中對同一基因的不同程度的甲基化，幾乎所有的印跡基因都有一些序列成份在兩個不同親本來源的等位基因中僅有一方是甲基化。這些序列被稱為“差異甲基化區域“（Differentially Methylated Regions）。 它指基因組在傳遞信息的過程中，對基因或DNA片段打下標記或烙印的過程。 另一方面，組蛋白的修飾也被證實參與了基因組印跡（“Genomic imprinting beyond DNA methylation: a role formaternal histones”這篇文章中有詳細的闡述）。......閱讀全文
outhern印跡及基因組DNA雜交技術實驗——Southern－印跡
實驗方法原理硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強，當電泳后凝膠經過DNA變性處理，覆以上述濾膜，再于其上方壓上多層干燥的吸水紙，借助它對深鹽溶液的上吸作用，凝膠上的單鏈DNA將轉移到濾膜上。轉移是原位的，即DNA片段的位置保持不變。轉移結束后，經過80℃烘烤的DNA，將原位地固定于膜上。實
基因組印跡的分子機理
從目前研究結果來看，基因印跡的發生主要有以下兩種機理： 一方面，研究發現，基因組印跡的分子機理與印跡基因DNA中胞嘧啶甲基化尤其是CpG島的甲基化密切相關，胞嘧啶甲基化是DNA的一種共價修飾。另外還有特殊的染色質結構和反義轉錄產物等可能都是基因印跡產生和維持的重要因素。 基因印跡中，卵子和精
Southern印跡及基因組DNA雜交技術實驗
Southern 印跡 放射性標記的探針與固定化核酸進行雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強，當電泳后凝膠經過DNA變
Southern印跡及基因組DNA雜交技術實驗
實驗材料 基因組 DNA試劑、試劑盒 限制性緩沖液儀器、耗材 瓊脂糖凝膠實驗步驟 1. 7~20 μg 基因組 DNA 稀釋到 500 μl 合適的限制性緩沖液中。4℃ 過夜。2. 每管加 10~20 單位限制性酶。孵育 4~6 小時。10 μl 消化液在小瓊脂糖凝膠上電泳檢測消化的程度。如果需要，
Southern印跡及基因組DNA雜交技術實驗
放射性標記的探針與固定化核酸進行雜交試劑、試劑盒預雜交液SSCSDS儀器、耗材硝酸纖維素濾膜實驗步驟1. 準備適合即將進行的工作的雜交溶液。每平方厘米硝酸纖維素濾膜或尼龍膜大約需要 0.2 ml 預雜交液。預雜交液：用于檢測低豐度序列：或者6x SSC ( 或 6x SSPE)5 x Denhard
昆明植物所在植物基因組印跡研究中取得進展
蓖麻基因組印跡以及其甲基化分析 基因組印記 (genetic imprinting)是一種非常重要的表觀遺傳學現象之一。在配子或合子發育過程中，來自親本的等位基因或染色體發生了差異的表觀修飾，導致了親本等位基因的差異表達（即印跡基因）。在植物中基因組印跡主要發生在被子植物的三倍體胚乳組織
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
Northern印跡的制備和Northern印跡
Northern印跡的制備 預備： 1.按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA進行甲醛/ 瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。 a. 總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：
如何選擇蛋白印跡實驗中的印跡膜
硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白和核酸雜交zui常用的印跡膜，是蛋白印跡實驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環境下，大多數帶負電荷的蛋白質會與硝酸纖維素膜發生疏水作用而高親和力的結合在一起，雖然這其中的機制還不是十分清楚，但由于硝酸纖維素膜的這個特性，而且易于封閉非特異性結合，從而得到了廣泛的
如何選擇蛋白印跡實驗中的印跡膜？
硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白和核酸雜交最常用的印跡膜，是蛋白印跡實驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環境下，大多數帶負電荷的蛋白質會與硝酸纖維素膜發生疏水作用而高親和力的結合在一起，雖然這其中的機制還不是十分清楚，但由于硝酸纖維素膜的這個特性，而且易于封閉非特異性結合，從而得到了廣泛的應用。目
印跡轉移電泳
生物化學與分子生物學的研究工作經常需要對電泳分離后的DNA進行分子雜交，但瓊脂糖不適合于進行雜交操作，1975年，Southren創造了將DNA區帶原位轉移到硝酸基纖維素膜（NC膜）上，再進行雜交的方法，被稱為Southren印跡法。隨后，Alwine等將類似方法用于RNA印跡，被戲稱為Northe
Southern－印跡實驗
印跡法 堿性緩沖液法 向下毛細管轉移法 電轉印法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設
Southern－印跡實驗
實驗方法原理?本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙錠儀器、耗材?電泳儀紫外透射儀實驗步驟 一、向上毛細管轉移法的轉移疊層系統：：圖一、向上毛細管轉移法的轉移
Southern印跡技術
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
Western印跡法
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。Western使用的探針是抗體，它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。儀器：高壓鍋、玻璃勻漿
Northern印跡和總RNA雜交實驗——Northern印跡分析
試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml? ???Milli-Q 或用玻璃器皿蒸餾過的
印跡膜的用途
中文名稱印跡膜英文名稱blotting membrane定 義在印跡時接受被轉移樣品的膜介質。如硝酸纖維素膜、尼龍膜等。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
免疫印跡優點
免疫印跡法是一項分析抗原、抗體的技術。它具有下列優點： 1、 濕的固定化基質膜柔韌, 易于操作； 2 、固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近, 不會象凝膠那樣受孔徑阻隔； 3、 免疫印跡分析只需少量試劑； 4、 孵育、洗滌的時間明顯減短； 5、可同時制作多個拷貝, 用于多種分析
Western免疫印跡
?Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理????與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝
Northern－印跡分析實驗
為了確認所選擇 cDNA 確實是差異表達的，建議使用 Northern 印跡分析，而不要用其他的確認技術，比如反向 Northern 雜交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲
RNA印跡雜交
RNA印跡雜交1）???????Northern印跡的制備預備：1．按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或0.5～1μg poly(A)+RNA進行甲醛/瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。a.?總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：總RNA（1
免疫印跡法
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
Western－免疫印跡
實驗概要Western免疫印跡（Western ? Blotting）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western ? Blot采用的是聚丙烯
Northern－印跡分析實驗
試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲醛甲酰胺預雜交 雜交液HotPrime cDNA Labeling Kit礦物油MOPS 緩沖液MOPS乙酸鈉EDTAPCR 緩沖液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鮭魚精 DNATaq DNA
Southern印跡雜交
?實驗原理核酸分子雜交技術是分子生物學領域中zui常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為
Northern－印跡分析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠 菌落裂解緩沖液 蒸餾水 甲醛 甲酰胺預雜交 雜交液 HotPrime cDNA Labeling Kit
免疫印跡定義
免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏
RNA印跡(Northern－Blot)
【實驗原理】將RNA變性及電泳分離后，轉移到固相支持物上，用于與DNA探針雜交以鑒定其中特定 RNA分子的大小與含量。基本原理與Southern印跡相同，但RNA變性方法與DNA不同，不能用堿變性，因為堿會導致RNA的水解。Northern印跡主要用于組織細胞靶基因表達水平的研究以及對同一組織細胞的
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——Western印跡法
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG 250考馬斯亮藍溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學發光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操