體細胞重組定位法介紹
原理相同于基因純合化的定位方法。由于體細胞交換發生得較少,所以常用 X射線處理雜合體使之發生更多的體細胞交換。......閱讀全文
體細胞重組定位法介紹
原理相同于基因純合化的定位方法。由于體細胞交換發生得較少,所以常用?X射線處理雜合體使之發生更多的體細胞交換。
重組頻率定位法介紹
原理和在高等動植物中用雜交子代中重組頻率的高低來計算兩個基因間的距離沒有不同。不過在微生物中一個菌落或一個噬菌斑代表一個個體,因而便于通過大量的雜交子代的觀察來進行精細結構分析;而且往往采用選擇性培養方法淘汰沒有發生重組的親本,使分析的效率和精密度進一步提高。不過精細結構的重組頻率容易受到突變位置本
體細胞重組定位法對基因結構進行分析的方法原理
原理相同于基因純合化的定位方法。由于體細胞交換發生得較少,所以常用?X射線處理雜合體使之發生更多的體細胞交換。
重組頻率定位法對基因結構進行分析的方法介紹
原理和在高等動植物中用雜交子代中重組頻率的高低來計算兩個基因間的距離沒有不同。不過在微生物中一個菌落或一個噬菌斑代表一個個體,因而便于通過大量的雜交子代的觀察來進行精細結構分析;而且往往采用選擇性培養方法淘汰沒有發生重組的親本,使分析的效率和精密度進一步提高。不過精細結構的重組頻率容易受到突變位置本
體細胞重組的概念
淋巴細胞在發育,成熟的過程中,抗原受體基因首先在DNA水平上進行重排,形成可表達BCR和TCR的功能性基因,然后才能得以表達TCR和BCR,這一過程稱為體細胞重組。
體細胞重組的概念
淋巴細胞在發育,成熟的過程中,抗原受體基因首先在DNA水平上進行重排,形成可表達BCR和TCR的功能性基因,然后才能得以表達TCR和BCR,這一過程稱為體細胞重組。
缺失定位法介紹
原理和基因的缺失定位相同,不過需要具備種類更多而差別更為細微的缺失菌株。在大腸桿菌的?T4噬菌體中曾經獲得一系列快速溶菌突變型rⅡ基因部分缺失突變型,利用這些突變型可以迅速測定任何一個 rⅡ點突變在rⅡ基因中的位置。圖5中的每一編號標明的橫線表示一個缺失突變型的缺失范圍。定位分兩步進行,首先測定大的
基因定位方法介紹單元化定位法
在構窠曲霉這一類真菌的準性生殖過程中,雜合二倍體細胞在有絲分裂時常隨機地丟失它的染色體。染色體在多次有絲分裂過程中逐條丟失而使二倍體細胞終于轉變為單倍體細胞的過程稱為單元化。如果一對染色體中帶有顯性的野生型基因的染色體丟失了,那么同源染色體上隱性基因的性狀便得以表現。此外,通過體細胞交換也可以從雜合
缺失定位法進行基因定位的方法介紹
一個細胞中的兩個同源染色體中的一個上有一個突變基因,另一染色體上有一小段已知范圍的缺失,如果這一突變基因的位置在缺失范圍內,便不可能通過重組而得到野生型重組體;如果突變基因不在缺失范圍內,那么就可以得到野生型重組體。利用一系列已知缺失位置和范圍的缺失突變型,便能測定突變型基因的位置。
轉錄定位法進行基因定位的方法介紹
許多?RNA病毒的整個基因組往往作為一個單位轉錄。隨著轉錄的進行,由基因組上各個基因所編碼的蛋白質也依序在寄主細胞中出現。當寄主細胞被紫外線照射使本身的蛋白質合成受到抑制時,病毒蛋白的出現更為明顯。紫外線照射也起著抑制病毒基因組的轉錄的作用。紫外線在 RNA分子的某一部位造成損傷后,損傷的部位和它后
體細胞交換法進行基因定位的方法介紹
三點測驗和著絲粒距離法中所測定的都是發生在減數分裂中的染色體交換。1936年美國遺傳學家C.斯特恩在果蠅中發現體細胞在有絲分裂過程中也可以發生染色體交換(見連鎖和交換)。50年代中G.蓬泰科爾沃等在研究構窠曲霉時發展起來一種利用體細胞交換的系統的基因定位方法。在進行有絲分裂的雜合二倍體細胞中,體細胞
同源重組法技術介紹
同源重組法:同源重組(homologous recombination)是將外源基因定位導入受體細胞的染色體上,在該座位因有同源序列,通過單一或雙交換,新基因片段替換有缺陷的片段,達到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁組裝一Neo基因,則在同源重組后,因有Neo基因,可在含有新霉素(neomyci
基因定位方法介紹同線法
如果一個細胞得到或丟失一條染色體則將同時得到或失去這條染色體上的全部基因。如果其中某些基因是已知的,而另一連鎖關系未知的基因恰恰和上述基因同時得到或失去,便可以判定后一基因和前一基因屬于同一連鎖群(表2)。這一原理曾廣泛應用于人的基因定位。仙臺病毒或聚乙二醇能促使人的體細胞和嚙齒類動物的體細胞相融合
用體細胞交換法進行基因定位
體細胞交換法基因定位三點測驗和著絲粒距離法中所測定的都是發生在減數分裂中的染色體交換。1936年美國遺傳學家C.斯特恩在果蠅中發現體細胞在有絲分裂過程中也可以發生染色體交換(見連鎖和交換)。50年代中G.蓬泰科爾沃等在研究構窠曲霉時發展起來一種利用體細胞交換的系統的基因定位方法。在進行有絲分裂的雜合
基因定位方法介紹連鎖群法
利用近著絲粒距離基因的定位法? 如果某一染色體上有一個離著絲粒距離較近的已知基因,另外有一個基因同樣離著絲粒很近,可是不知道它是否屬于同一染色體。把這樣兩個突變型品系進行雜交,如果這兩個基因屬于同一染色體,它們之間的重組頻率不應超過兩者的著絲粒距離之和;如果它們不屬于同一染色體,那么它們的重組頻率應
基因轉變的梯度定位法介紹
一個基因內部的各個點突變的基因轉變常呈梯度現象,即在這基因的一端發生基因轉變的頻率最高,在另一端則最低,在兩端之間存在著一個轉變頻率的梯度。對于任何一個未知位置的點突變,可以通過基因轉變頻率的測定進行精細結構定位。這一方法的應用限于一次減數分裂產物包被在一個囊里面的子囊菌,而且限于影響子囊孢子顏色和
基因定位方法介紹假連鎖法
相互易位雜合體只有在減數分裂過程中通過交互離開所形成的平衡配子才能夠存活,并使非同源染色體上的基因顯示假連鎖現象(見染色體畸變)。所以把帶有屬于已知染色體的標記基因的相互易位品系作為測交品系和一個突變型品系雜交,如果發現這一突變基因經常和標記基因的野生型等位基因相連鎖,就可以判定突變基因一定在相互易
用缺失定位法進行基因定位
缺失定位法一個細胞中的兩個同源染色體中的一個上有一個突變基因,另一染色體上有一小段已知范圍的缺失,如果這一突變基因的位置在缺失范圍內,便不可能通過重組而得到野生型重組體;如果突變基因不在缺失范圍內,那么就可以得到野生型重組體。利用一系列已知缺失位置和范圍的缺失突變型,便能測定突變型基因的位置。
使用轉錄定位法進行基因定位
許多?RNA病毒的整個基因組往往作為一個單位轉錄。隨著轉錄的進行,由基因組上各個基因所編碼的蛋白質也依序在寄主細胞中出現。當寄主細胞被紫外線照射使本身的蛋白質合成受到抑制時,病毒蛋白的出現更為明顯。紫外線照射也起著抑制病毒基因組的轉錄的作用。紫外線在 RNA分子的某一部位造成損傷后,損傷的部位和它后
微載體細胞培養法介紹
(1)微載體選擇:先用利用三種小量微載體做培養實驗,觀察細胞在一定時間內細胞的吸著率和計算細胞數,以得到最大量細胞為佳。(2)水化:稱一定量的微載體放入容器中,按每克微載體加50~100ml的比例,加入無Ca2+和Mg2+的磷酸緩沖液(PBS),室溫下放置應不少于3小時,并不時輕微攪動,然后再用新鮮
基因定位方法介紹直接觀察法
易位(見染色體畸變)使染色體上的基因改變連鎖關系,所以易位可以用來進行基因定位。如果易位所涉及的染色體是可以被識別的,那就更有利于定位工作。如果在遺傳學分析中發現某兩個連鎖群的連鎖關系都發生了改變,同時在顯微鏡下又可以辨認出有兩個染色體發生了相互易位,那么就可以知道兩個連鎖群和兩個染色體的對應關系。
乳汁體細胞計數法
推薦使用體細胞計數儀進行乳汁體細胞計數。 體細胞計數法有直接計數法和間接計數法。直接計數法中簡便易行的方法是直接 注:本方法源自奶牛乳房炎防治技術指南(試行)(農醫發[20l0]29號) 推薦使用體細胞計數儀進行乳汁體細胞計數。 體細胞計數法有直接計數法和間接計數法。直接計數法中簡便易行的方法
乳汁體細胞計數法
推薦使用體細胞計數儀進行乳汁體細胞計數。 體細胞計數法有直接計數法和間接計數法。直接計數法中簡便易行的方法是直接用顯微鏡進行體細胞計數(SCC),間接計數法就是后面提到的CMT。法。 l主要試劑和材料 美藍染色液:美藍乙醇飽和溶液30mL.(美藍2g,95%乙醇100mL),10%氫氧化鈉
分子雜交法進行基因定位的方法介紹
分子雜交和體細胞遺傳學相結合的方法也可以用來測定人的基因的絕對位置。用體細胞遺傳學方法,可以得到只含有某一條人類染色體的人-倉鼠雜種細胞的克隆。然后可以進一步取得這一人類染色體發生各種缺失的克隆。把從這一系列缺失克隆中提取出來的 DNA吸附在硝酸纖維素濾膜上。再把人的基因文庫中的各個基因的 DNA片
基因定位方法介紹非整倍體測交法
非整倍體測交法非整倍體測交法可以用來測定基因屬于哪一個常染色體。用常染色體隱性突變型純合體(a/a)和野生型二倍體(+/+)雜交,再用子一代雜合體(a/+)和隱性親本回交,在它們的子代中表型是野生型的和表型是突變型的各占50%(見孟德爾定律)。雜交 a/a × +/+↓回交 a/+ × a/a↓
基因定位方法介紹系譜分析法
系譜分析法基因定位在早期的人類遺傳學研究中,基因所屬染色體的測定一般都通過系譜分析進行。由于女子有兩個X染色體,男子有一個X染色體和一個Y染色體,Y染色體上不存在和X染色體相應的等位基因(也就是說對于?X連鎖基因來講,男子是半合體)。因此男性患者的X連鎖致病基因必然來自母親,以后又必定傳給女兒。這種
二倍體細胞培養法介紹
二倍體細胞培養法與一般培養相同,關鍵在于傳代,其傳代程序為: (1)吸除舊培養液注入另瓶中。 (2)用溫BSS沖洗1次。 (3)用0.25%溫胰蛋白酶消化,加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可;作用1~5分鐘。 (4)待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大,便終止
亞細胞定位的免疫熒光法介紹
1、直接法 將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,經一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應的多余熒光抗體,室溫下干燥后封片、鏡檢。 2、間接法 如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異抗體(第一抗體)與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的抗體,再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應
著絲粒距離法進行基因定位的方法介紹
一個基因與它所屬染色體的著絲粒之間的距離稱為著絲粒距離。在不同的生物中,可用不同的方法測定著絲粒距離。在粗糙脈孢菌中,著絲粒和基因之間的距離可以根據子囊中子囊孢子的排列順序來測定,這是1932年美國微生物遺傳學家CC.林德格倫所首創的方法。在同一染色體上兩個基因的著絲粒距離都被測定后,這兩個基因之間
缺失定位法對基因結構進行分析的方法介紹
原理和基因的缺失定位相同,不過需要具備種類更多而差別更為細微的缺失菌株。在大腸桿菌的?T4噬菌體中曾經獲得一系列快速溶菌突變型rⅡ基因部分缺失突變型,利用這些突變型可以迅速測定任何一個 rⅡ點突變在rⅡ基因中的位置。圖5中的每一編號標明的橫線表示一個缺失突變型的缺失范圍。定位分兩步進行,首先測定大的