PCR產物跑膠什么條帶都沒有是怎么回事
做PCR時，最抑悶的一件事就是花了三個多小時，一點兒結果都沒有。以前做的時候，我也遇到這增的問題！所有的反應液和底物加好了，機器設好了，跑吧，跑完PCR了，好的，再來跑電泳檢測，結果，白花花一大片，什么都沒有，那一刻，覺得自己好失敗，別人的什么有，自己的什么都見不到，真想把機器給砸了。 后來不斷的調整Taq酶的濃度，當然是增加了，有了一點兒效果，但是，還是不理想，再調整（降低）底物（DNA）的濃度，還是不行，再調整（稀釋到50倍），再做一次，有了，很是漂亮而又清晰的PCR產物的條帶！ 那一刻，真是太高興了！緊接著，又做了一次，所有的樣品都有PCR產物了。 總結一下，就是DNA的問題，它的濃度太高，而且在提取DNA時如果不純，那么里的雜質就會太多，只有通過稀釋DNA（同時也是稀釋雜質），才能使DNA在樣品里的濃度和雜質濃度的比值無......閱讀全文
PCR產物的直接純化
實驗概要本實驗介紹了PCR產物直接純化的原理及操作步驟。實驗原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq ? DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中
PCR產物電泳嚴重拖帶
有可能是你的膠點樣孔不整齊，就是你做膠的時候膠沒有凝固好，你可以試試重新做塊膠。PCR拖帶產生原因有很多，不知道樓主屬于哪一種：1、退火溫度較低，可以提高2到3度2、Mg離子濃度一般的PCR在1.5mM就可以了，不知樓主用的多少3、模板濃度較高或者含有其他PCR抑制劑，建議稀釋下模板4、延伸時間一般
PCR產物的電泳檢測
PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。常見問題如下：????一、假陰性，不出現擴增條帶????PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及，?④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。????模板
PCR產物電泳結果分析
第一步我們先來看看第二泳道，我們能看見兩條電泳帶，一般的質粒在跑完電泳之后都會出現這種情況，因為質粒是很容易開的接著會變成線性或者是半線性和半環狀的，環狀的會比線性的跑的快。2第二步我們再看下電泳帶上面那條淺的也就是開鏈的質粒，再它的下面就是環狀的質粒，不過這也不打緊，一般情況都是這樣的。3接著我們
PCR產物的檢測PCRELISA法
在一個引物的5’端標記上生物素以便使其能與包被板上的親合素結合而固定PCR產物，而在另一引物的5’端標記FITC，用HRP標記的抗FITC抗體與之結合顯色，即可進行常規ELISA檢測。如設立標準對照，此技術還可用于定量分析。 【試劑與配置】 包被液：4.3mmol/L Na2HPO4,
酶切后產物可以做pcr產物回收么
如果沒有其他雜帶就可以。單一條帶的PCR產物，如果酶切后也只有一條帶，就可以用產物回收試劑盒回收。但如果酶切后有雜帶或多條帶，就只能做膠回收。
PCR擴增產物的鑒定
實驗原理生物大分子如蛋白質、核酸、多糖等常以顆粒分散在溶液中．它們的凈電荷取決于介質的H 濃度或與其他大分子的相互作用。在電場中，帶電顆粒向陰極或陽極遷移．遷移的方向取決于它們帶電的符號．這種遷移現象即謂電泳。遷移的方式目前可以根據分子尺寸大小、分子所帶的電荷或分子的生物學與化學特性分為三類。如
克隆PCR產物的最優條件
最佳插入片段： 載體比需實驗確定，4：1(插入片段：載體)常為最佳比，摩爾數比1：8 或8：1也行。應測定比值范圍。連接用5μL2X連接液，50ng質粒DNA，1Weiss單位的T4連接酶，插入片段共10μL。室溫保溫1h，或4℃過夜。在這2種溫度下，缺T-凸出端的載體會自連，產生藍斑。室溫
PCR擴增產物的克隆
實驗方法原理 平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR產物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用該酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求不高，PCR產物也可不加處理。如果使用Str
PCR－產物電泳銀染實驗
常用的核酸電泳法有兩種。①水平電泳：瓊脂糖凝膠，紫外光下判斷條帶。此法經濟省時，但分辨率較低。②垂直電泳：聚丙烯酰胺凝膠，可見光下判斷條帶。此法相對費力，但分辨率較高。分辨率高是聚丙烯酰胺電泳法被優先用于克隆性基因重排條帶判斷的關鍵。在聚丙烯酰胺凝膠上較寬彌散被判斷為假陽性（陰性）的條帶，在瓊脂糖膠
PCR產物的平末端克隆
靶基因經 PCR 擴增，樣品進行必要的純化回收后，接下來用平末端進行連接克隆也是分子生物學實驗中常規采用的技術路線，實驗一般利用噬菌體 T4 DNA 聚合酶等補平擴增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯
PCR產物的平末端克隆
常規采用的技術路線，實驗一般利用噬菌體 T4 DNA 聚合酶等補平擴增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。Liu 與 Schwartz (1992) 發現在連接反應的溫育過程中，當反應液中存在過量的限制性內切核酸酶能顯著地增加重組質粒的產率
PCR－產物電泳銀染實驗
實驗方法原理 聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性較差，通常 2 個月內用完為好。
PCR－產物電泳銀染實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性
PCR擴增產物的克隆
?PCR擴增產物的克隆可以：（1）獲得目的DNA片段；（2）用于原核表達的研究；（3）廣泛應用于分子生物學相關研究。平端連接法實驗方法原理平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR產物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30
PCR擴增產物的鑒定
PCR擴增產物的鑒定實驗原理生物大分子如蛋白質、核酸、多糖等常以顆粒分散在溶液中．它們的凈電荷取決于介質的H 濃度或與其他大分子的相互作用。在電場中，帶電顆粒向陰極或陽極遷移．遷移的方向取決于它們帶電的符號．這種遷移現象即謂電泳。遷移的方式目前可以根據分子尺寸大小、分子所帶的電荷或分子的生物學與化學
詳細介紹PCR產物克隆方法
克隆方法： 1. 平端連接 通常情況下，PCR產物可直接與平端載體DNA進行連接，但其連接效率效低。因為TaqDNA聚合酶具有非模板依賴性末端轉移酶活性，能在兩6條DNA鏈的3''末端加上一個多余的堿基，使合成的PCR產物成為3''突出一個堿基的DNA分子。這
PCR擴增產物的鑒定
實驗原理生物大分子如蛋白質、核酸、多糖等常以顆粒分散在溶液中．它們的凈電荷取決于介質的H 濃度或與其他大分子的相互作用。在電場中，帶電顆粒向陰極或陽極遷移．遷移的方向取決于它們帶電的符號．這種遷移現象即謂電泳。遷移的方式目前可以根據分子尺寸大小、分子所帶的電荷或分子的生物學與化學特性分為三類
如何知道PCR產物的大小
電泳，加Marker對照著估計
PCR產物的T載體克隆
（一）重組T質粒的構建一．原理外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的 DNA分子是在DNA連接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中，將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌
PCR擴增產物的鑒定
實驗概要PCR擴增產物可以通過酶切分析、凝膠電泳（瓊脂糖電泳、聚丙烯酰胺電泳、毛細管電泳等）、Southern雜交、克隆、測序等方法分析，電泳前還可以應用紫外分光光度計定量DNA。當采用凝膠電泳時也有溴化乙錠顯色、銀染法、熒光顯色等不同的顯色方法。本實驗室采用的是非變性連續緩沖系統聚丙烯酰胺凝膠垂直
PCR產物的平末端克隆
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 靶基因經 PCR 擴增，樣品進行必要的純化回收后，接下來用平末端進行連接克隆也是分子生物學實驗中常規采用的技術路線，實驗一般利用噬菌體 T4 DNA 聚合酶等補平擴增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuan
PCR擴增產物的克隆
平端連接法 TA克隆法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；P
如何知道PCR產物的大小
如果你的模板序列已知的話，直接將引物序列和模板進行匹配，兩條引物之間的DNA片段長度即為目的PCR產物的大小；如果你是想知道PCR儀反應后的產物大小，可以跑瓊脂糖凝聚電泳，照膠儀下根據Marker的指示條帶讀取產物的大小，或者可以用照膠儀自帶的軟件直接讀出所有pcr產物條帶的大小
免疫PCR(ImmunoPCR)概念、組成和免疫PCR產物的檢測
（一） 免疫PCR技術的概念免疫PCR是一種抗原檢測系統，將一段已知序列的DNA片段標記到抗原抗體復合物上，再用PCR方法將這段DNA擴增，然后用常規方法檢測PCR產物。免疫PCR集PCR的高靈敏度與抗體和抗原反應的特異性于一體。其突出的特點是指數級的擴增效率帶來了極高的敏感度，能檢出濃度低至2ｎｇ
制備克隆用PCR產物的純化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的
PCR產物的電泳檢測時間
一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及，?④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DN
制備克隆用PCR產物的純化
PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存在，常常妨礙有待進一步克隆
制備克隆用PCR產物的純化
實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存