肝細胞癌中bcl2及bax基因的表達及臨床意義

作者：錢燕春，唐  平       作者單位：（永州職業技術學院醫學院，湖南永州   425000）

 [摘要] 目的：探討凋亡抑制基因和凋亡促進基因bax表達與肝細胞癌生物學行為的關系及對肝細胞癌預后的關系。方法：用免疫組化LSAB法測定40例肝癌細胞和16例正常肝組織的bcl-2和bax蛋白表達水平。結果：bcl-2及bax蛋白表達陽性率在正常肝組織和肝細胞癌分別為12.5%(2/16)、45.0%(18/40)、87.5%(14/16)、52.5%(21/40)，兩組間比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。bcl-2、bax蛋白表達與腫瘤病理分級、分期、淋巴結轉移及患者預后相關。結論：bcl-2和bax蛋白的表達參與肝細胞癌的發生及進展，并存在相互作用的關系。bcl-2蛋白表達在肝癌有獨立預后價值。

 [關鍵詞] 肝細胞癌；細胞凋亡；癌基因；bcl-2蛋白；bax蛋白

 [中圖分類號] R735.7                   [文獻標識碼]  A                 [文章編號]  1674-4721（2009）04（b）-010-02

 Expression of Gene bcl-2 and  bax  in  liver cell  carcinoma  and  its  clinical  significances QIAN Yanchun， TANG Ping（Vocational and Technical College School of Medicine of Yongzhou，Yongzhou   425000，Chian）

 [Abstract] Objective: To study the role and the prognostic effect of bcl-2 and bax in the development to liver cell carcinoma. Methods: Bcl-2 and bax expression was investigated in 40 cases of liver cell carcinoma and 16 cases of mormal liver tissue by immunohistochemistry LSAB method. Results: The positive rates of bcl-2 and bax expression were 12.5%(2/16)and 87.5%(14/16) in normal liver tissue and 45.0%(18/40) and 52.5%(21/40) in liver cell carcinoma.The difference was of significance(P＜0.05).Bcl-2 and bax expression levels were associated with histological grade stages，lymph node metastasis and prognosis. Conclusion: The increased expression of bcl-2 and decreased expression bax might be involved in the development of liver cell carcinoma，and they might have a mutual effect on each other. bcl-2 protein is an independent indicator of prognosis in liver cell carcinoma.

 [Keywords] Livercellcarcinoma； Apoptosis； Oncogene； bcl-2 protein；bax protein

 近來的研究表明，腫瘤不僅是增殖和分化異常的疾病，也是細胞凋亡異常的疾病，細胞凋亡狀態及其調控基因的異常，參與腫瘤的發生、發展[1]。bcl-2和bax基因是近年來發現的細胞凋亡相關基因，它們與腫瘤的發生、發展及預后有密切關系。本研究利用免疫組化LSAB法檢測了40例肝癌組織中bcl-2和bax基因產物的表達，探討bcl-2和bax基因在肝癌發生發展中的作用和臨床意義。

 1資料與方法

 1.1一般資料

 40例肝細胞癌組織標本為永州職業技術學院醫學院附屬醫院2000年5月～2001年12月手術切除并經病理診斷的肝腫瘤患者，所有患者術前未接受放（化）療，均有完整的隨訪資料，隨訪期為5年。其中，男35例，女5例。年齡36～70歲，平均52.5歲。按FIGO分期：Ⅰa期4例， Ⅰb期5例， Ⅱa期12例， Ⅱb期19例；按WHO分級：Ⅰ級9例，Ⅱ級18例，Ⅲ級13例；術后病理證實有淋巴結轉移者12例，術后5年內死亡者33例。另取16例正常肝組織作對照，為取自距腫瘤邊緣2.0 cm處的正常肝組織。全部標本均經10%的甲醛固定，石蠟包埋，常規制備，5 μm連續切片。

 1.2試劑

 兔抗人bax多克隆抗體及小鼠抗人bcl-2單克隆抗體為SantaCruz公司產品，工作濃度1∶70、1∶50；LsAB試劑盒購自中山生物技術公司。

 1.3方法

 采用免疫組化LsAB法，其操作步驟按試劑盒說明書進行。陰性對照以PBS代替一抗。

 1.4結果判定
在光鏡下觀察，以細胞漿內出現棕黃色顆粒為陽性。隨機計數10個高倍視野(×400)，500個細胞中陽性細胞百分率＜10%(-)，≥10%為陽性(+)。
 1.5統計方法
 ?字2檢驗及四格表確切概率法。

 2結果
 2.1肝細胞癌和正常肝組織bcl-2及bax蛋白表達的比較

 肝細胞癌和正常肝組織的bcl-2及bax蛋白表達陽性率比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。bcl-2在肝癌細胞中表達陽性，見圖1。

 2.2  bcl-2、bax蛋白表達與肝細胞癌病理特征的關系

 bcl-2表達陽性率隨腫瘤分級而增高，統計學檢驗差異有統計學意義(P<0.05)，bax表達陽性率則隨肝癌分級增加而有遞減趨勢(P<0.05)；Bcl-2與臨床分期呈正相關(P<0.05)，bax表達與肝癌臨床分期呈負相關(P<0.05)；有淋巴結轉移者較無淋巴結轉移bcl-2表達呈增高趨勢(P<0.05)，bax呈降低趨勢；Bcl-2表達與生存年限與血常比較差異有統計學意義(P<0.05)，bax表達在預后不良組較預后良好組有降低趨勢。見表2。

 3討論

 細胞凋亡是在基因控制下的細胞自我消亡的過程，涉及一系列的基因表達的級聯反應，受凋亡抑制基因和凋亡促進基因的調控。Vaux 等[2]首先證實bcl-2 基因高表達可明顯延長細胞的生存期。體外研究亦表明bcl-2可阻止許多刺激物誘發的細胞凋亡，且bcl-2的抑制可能是細胞凋亡的共同通道[3]。就腫瘤的形成而言，bcl-2過度表達使細胞生存延長，這類細胞因此獲得其他基因異常的機會，同時由于阻止了正常的凋亡途徑，使DNA 受損的細胞持續生存，實變產物積聚，從而促進腫瘤發生發展。bax是bcl-2家族的另一成員，與bcl-2形成異二聚體，對細胞凋亡進行調控，它的過表達可拮抗bcl-2的保護效應使細胞趨于凋亡[4-5]。在體內， bcl-2 與bax 相互影響，相互拮抗，其作用并不直接表現為單獨的bcl-2和bax對凋亡的影響，而是由bcl-2/bax來決定細胞是否發生凋亡。有人研究證實 bcl-2/bax 比值降低，可使腫瘤細胞發生凋亡，作為細胞凋亡調控的主要因子bcl-2蛋白家族，尤其是bcl-2和bax的相互作用在凋亡的調節中起關鍵作用[6-7]。

 本研究結果顯示，在肝細胞癌組織中bcl-2蛋白表達陽性率比正常組高，且隨腫瘤分級增加而增加，并且與肝癌臨床分期、淋巴結轉移及預后呈正相關關系。bax蛋白表達與肝癌分級程度，臨床分期及淋巴結轉移呈負相關，說明bax的表達與肝癌的存活期延長，細胞凋亡受到抑制有密切關系，且與bcl-2蛋白是相互作用且作用相反的一對基因，提示bcl-2與bax基因蛋白參與了肝癌的發病過程，對探索肝癌的發生、演化是一種新的啟示，值得深入研究。綜合本研究結果及文獻復習，筆者認為bcl-2和bax是一對正負調節基因。bcl-2和bax蛋白都是均一的二聚體，反應時需一個分子bcl-2及一個分子bax結合形成異二聚體。

 綜上所述，bcl-2和bax蛋白的表達與肝細胞癌的臨床分期、分級、淋巴結轉移相關，并通過對細胞凋亡的調控參與了肝細胞癌的發生、發展，和預后密切相關。

 [參考文獻]

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