多抗和單抗優缺點比較
多克隆抗體能識別任一抗原上的多個表位,而單克隆抗體僅檢測任一抗原上的一個表位。但是它們兩者有著屬于各自的優點和缺點。
多克隆抗體的優點
多克隆抗體可有助于放大低表達水平的靶蛋白信號,因為靶蛋白可在多個表位上結合不 止一個抗體分子。但是這會給定量實驗造成不利影響,因為結果將變得不準確。
由于能識別多個表位,多克隆抗體可在 IP/ChIP 中得到更好的結果。
比單克隆抗體更能容許抗原中的微小變化。
它們會識別出與免疫原蛋白質具有高同源性的蛋白質,或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當未測試物種中的抗原性質未知時,有時會使用多克隆抗體。這也 使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應性非常重要。
多克隆抗體通常是檢測變性蛋白質的首選。
多表位通常可提供更為有力的檢測。
多克隆抗體不適用于探測抗原的特定結構域,因為抗血清通常可識別多個結構域。
不足之處
易于產生批次間差異。
產生大量非特異性抗體,有時可能在某些應用中產生背景信號。
多表位使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應性非常重要。
客觀事實
識別任一抗原上的多個表位。獲得的血清將包含不同親和力抗體的異質復合體混合物。多克隆抗體主要由 IgG 亞類組成。
肽免疫原通常用于產生靶向唯一表位的多克隆抗體,特別適合高同源性的蛋白家族。
抗體制備
制備所需技術和技能不高。
制備時間短。
多克隆抗體不適用于探測抗原的特定結構域,因為多克隆抗血清通常可識別多個結構域。
單克隆抗體的優點
雜交瘤制得后,就成為了恒定的再生源,所有批次都將相同–對確保實驗步驟和結果的 一致性和標準化非常有幫助。
單克隆抗體通常在切片和細胞染色造成的背景較低。因為它們以更強特異性檢測一個靶 表位,所以不太可能與其它蛋白質發生交叉反應。
由于具有特異性,單克隆抗體非常適于用作分析測定中的一抗,或者用于檢測組織中的 抗原,并且通常所產生的背景染色顯著低于多克隆抗體。
與多克隆抗體相比,單克隆抗體的同質性非常高。如果實驗條件保持不變,單克隆抗體 的各實驗結果重現性很高。
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