還原糖的測定方法——斐林氏容量法

　　還原糖包括葡萄糖、果糖、麥芽糖，在葡萄糖分子中含有淤青的醛莖，在果糖分子中含有淤青的酮莖，在乳糖中和

　　麥芽糖中含有淤青的半縮羧莖，因此都有還原性。在測定還原糖時一般測定總糖時所有將糖類水解為轉化糖再測定

　　的方法都可用來測定還原糖。

　　（一）斐林氏容量法

　　1.此法的原理、試劑、方法與總糖的測定方法相同。只是樣品溶液不必以過轉化，而是直接取濾液進行滴定，濾液進行滴定，濾液中的還原糖含量以在0.2-0.5%為好，又能通過增減樣品量或改變稀釋倍數來調節。10毫升費林氏A、B液混合時理論上相當還原糖量如下：

　　葡萄糖（無水）果糖或轉化糖尿病 0.0500克

　　乳糖尿病 0.0678克

　　麥芽糖 0.0807克

　　2試劑

　　（1） 斐林氏A液，稱69.8g cp硫酸銅于100ml水中，過濾備用

　　（2） 斐林氏B液，稱34.6g.cp濃流鋅鈉和100gcp NaOH于1000ml水中，過濾備用

　　3方法

　　稱取樣品10-20g：制備與轉化同鐵氰化鉀法。將樣液倒入滴管中，吸取A,B液準備預滴定

　　預滴定：

　　吸A、B液各5ml→從滴管中加15ml樣液→加熱至沸→繼續滴加樣液→至蘭色變潛→加3滴次甲基蘭→在1分鐘內滴定到終點

　　達到終點時，稍微過量的轉化糖，將蘭色的次甲基蘭染色體還原為無色的隱色體，而顯出氧化亞銅的紅色，去堿性條件下加熱糖的產物是復雜的。

　　去堿性中斷裂是由于堿度不同，加熱時間不同，生產不等的碎片，這種碎片給后面滴定帶來誤差，而且，這種碎片與糖沒有化合量的關系，所以，Lanecrol-Eynon Method 作出數據檢索表

　　正式滴定：

　　吸A,B液各5ml→于三角瓶→加比預定量少0.5-1.0ml樣液→2分鐘內要求沸騰1分鐘→加3滴指示劑→用樣液滴定蘭色消失

　　總沸騰時間為3分鐘，即滴定在3分鐘完成。

　　計算：

　　還原糖＝( F·V2)/(W·V1)×100

　　F：轉還糖回數，即與10ml斐林氏試液相當的轉化糖毫克數，

　　V1：樣品試液總體積

　　V2：樣品試液滴定量

　　W：樣品重量

　　在測量乳糖制品時，若蔗糖與乳糖的含量比超過3：1時，則應與滴定量中加上相關表中（課本中表9-8）校正值后在進行計算

　　我們舉例如下：

　　如果標準果糖溶液度為每100ml溶液含糖262.5mg。對于10ml斐林試液從9-5可以查得果糖液滴定應為20ml。如果不是20ml，可先算出A,B液 校正等數。然后進行計算

　　再如標準糖溶液濃度為每100ml溶液含糖199.3ml，對于10ml A,B液 從9-4中查到，糖液滴定量應為 25.00ml，若有出入可校正。如果要求不高，可省略校正步驟但要求1％得 測定誤差，則省略校正。另外有時候并未根據檢索表計算樣含糖量，但對A,B液進行標定，以使確定相當得 還原糖量。這種誤差為0.5％。下面我們講標定量A,B液

　　準確準確稱取烘干冷卻得 A.R蔗糖1.5g→用水溶解稱取250ml容量瓶中→定容→吸50ml于100ml 定量瓶中→加HCL5ml→再65-70攝氏度水裕15分鐘→冷卻→用30％NaOH中和→定容

　　準確吸A,B液 各5ml于三角瓶中→加水約50ml玻璃珠三粒→加熱至沸→保持1分鐘→加指示劑1滴→再煮1分鐘→立即用糖液滴定至蘭色褪去，紅色出現即為終點

　　正式滴定，先加入比預滴定時少0.5ml左右得糖液煮沸1分鐘→加指示劑1滴→再煮沸1分鐘→繼續滴至終點

　　計算： A＝W*V/500×0.95

　　A：相當于10ml斐林氏A、B液的轉化糖的量

　　W：稱取蔗糖的質量

　　V ：滴定蔗糖的量

　　500：稀釋比

　　0.95：換算等數

　　最后計算：

　　總糖（還原糖）以轉化糖計%=（A*1000/W*V）*100

　　A：同上

　　W：制取樣品的量

　　V：滴定是時樣品消耗量

　　1000：是稀釋倍數（100/50*500）

　　1.預測定的目的：對樣品溶液中還原糖濃度有一定要要求（0.1%左右），測定時樣品溶液的消耗體積應該與標定葡萄糖標液的消耗體積相近，通過測定了解樣品濃度是否合適，濃度過大或過小應該加以調整，使測定時消耗樣品溶液量在10毫升左右；二是通過測定可知道此溶液的大概消耗量，以便在正式的滴定時，預先加入比實際用量少1毫升左右的樣液，只留下1ml左右的樣液在續滴定時加入，以便保證在1分鐘內完成續滴定工作，提交預測定的準確度。

　　2.此實驗影響測定結果的主要操作因素是反應液堿度、熱源強度，煮沸時間和滴定速度一般煮沸時間短消耗糖多，反之，消耗糖液少，滴定速度過快，消耗糖量多，反之，消耗糖量少。另外溶液堿度愈高，二價銅的還原愈快，因此必須嚴格控制反應的體積，使反應體系堿度一致。熱源一般采用800W電爐，反應液在2秒內沸騰。