含5’突出羥基端的DNA分子磷酸化
本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌體多核苷酸激酶的催化下，以放射性標記的形式重新將磷酸加到核酸上，這是一種廣泛應用于 32P 標記探針的技術。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌體多核苷酸激酶的催化下，以放射性標記的形式重新將磷酸加到核酸上，這是一種廣泛應用于 32P 標記探針的技術。實驗材料T4 噬菌體多核苷酸激酶DNA試劑、試劑盒乙酸銨EDTA乙醇T4 噬菌體多核苷酸激酶緩沖液儀器、耗材液體閃爍計數儀Sephadex G-50 離心柱Sephadex G-50 柱實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨（10 mol/L)EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0 )乙醇2. 酶和緩沖液T4 噬菌體多核苷酸激酶10X T4 噬菌體多核苷酸激酶緩沖液3. 核酸和寡核苷酸DNA (10......閱讀全文
含5’突出羥基端的DNA分子磷酸化
本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌體多核苷酸激酶的催化下，以放射性標記的形式重新將磷酸加到核酸上，這是一種廣泛應用于?32P 標記探針的技術。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌
含5’突出羥基端的DNA分子磷酸化
實驗方法原理?本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌體多核苷酸激酶的催化下，以放射性標記的形式重新將磷酸加到核酸上，這是一種廣泛應用于 32P 標記探針的技術。實驗材料?T4 噬菌體多核苷酸激酶DNA試劑、試劑盒?乙酸銨EDTA乙醇T4 噬菌體多核苷酸激酶緩沖液儀器、耗材
含5’突出羥基端的DNA分子磷酸化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌體多核苷酸激酶的催化下，以放射性標記的形式重新將磷酸加到核酸上，這是一種廣泛應用于 32P 標記探針的技術。
用交換反應進行5突出端DNA分子的磷酸化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 T4 噬菌體多核苷酸激酶催化的交換反應（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一個標記 5' 端 DNA 的快速方法。與正向反應不同的是，它無需 DNA
用交換反應進行5突出端DNA分子的磷酸化
實驗方法原理 T4 噬菌體多核苷酸激酶催化的交換反應（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一個標記 5' 端 DNA 的快速方法。與正向反應不同的是，它無需 DNA 去磷酸化。正向反應在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑
用交換反應進行5突出端DNA分子的磷酸化
T4 噬菌體多核苷酸激酶催化的交換反應（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一個標記 5' 端 DNA 的快速方法。與正向反應不同的是，它無需 DNA 去磷酸化。正向反應在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑緩沖液中進行，以刺激酶促去
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
實驗方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子標記效率低。實驗材料 T4 噬菌體多核苷酸激酶試劑、試劑盒 乙酸銨EDTA乙醇咪唑緩沖液聚乙二醇儀器、耗材 液體閃爍計數儀Sephadex G-50 離心柱Seph
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子標記效率低。 實驗材料
去磷酸化的平端或5凹端DNA分子的磷酸化
在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5' 突出端的分子標記效率低。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在 T4 多核苷酸激酶的正向反應中，帶有平端、5' 凹端或分子內切口的 DNA 底物比 5'
DNA結構3′端和5′端的差異
中文名稱3′端英文名稱3′-end定 義DNA或RNA單鏈帶有游離3′-羥基或其磷酸酯的一個末端。一條核酸鏈通常從5′端到3′端書寫。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）中文名稱5′端英文名稱5′-end定 義DNA或RNA單鏈帶有游離5′-羥基或其磷酸酯的一個末端。
標記雙鏈DNA的3突出端
實驗材料限制性內切核酸酶小牛胸腺末端轉移酶模板 DNA試劑、試劑盒乙酸銨乙醇酚氯仿末端轉移酶緩沖液儀器、耗材Sephadex G-50 離心柱實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨（10 mol/L )乙醇酚：氯仿（1:1，V/V)2. 酶和緩沖液適當的限制性內切核酸酶小牛胸腺末端轉移酶5X 末端
合成的引物5’端是否有磷酸化？
合成的引物5’為羥基，沒有磷酸基團。如果需要您可以用多核苷酸激酶進行5’端磷酸化，或者要求我們合成時直接在5’或3’端進行磷酸化，需要另外收費。
雙脫氧ATP末端標記雙鏈DNA的3突出端
? ? ? ? ? ? 實驗材料 限制性內切核酸酶 小牛胸腺末端轉移酶 模板 DNA 試劑、試劑盒 乙酸銨
單鏈突出端的定義
中文名稱單鏈突出端英文名稱overhang定 義雙鏈核酸末端帶有一個或多個未配對核苷酸的單鏈部分。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
DNA的黏端和平端的區別
用限制酶切割后得到的末端齊平就是平末端，一長一短就是粘性末端根據限制性內切酶切割DNA所產生的產物末端，發現限制性內切酶對DNA的切割有兩種方式，即平切和交錯切。所謂平切，就是限制性內切酶在DNA雙鏈的相同位置切割DNA分子，這樣產生的末端就是平末端。交錯切就是限制性內切酶在DNA雙鏈的不同位置切割
DNA連接酶黏端和平端的區別
黏端和平端的區別：用限制酶切割后得到的末端齊平就是平末端，一長一短就是粘性末端根據限制性內切酶切割DNA所產生的產物末端，發現限制性內切酶對DNA的切割有兩種方式，即平切和交錯切。所謂平切，就是限制性內切酶在DNA雙鏈的相同位置切割DNA分子，這樣產生的末端就是平末端。交錯切就是限制性內切酶在DNA
細胞化學詞匯5′端
中文名稱：5′端英文名稱：5′-end定 義：DNA或RNA單鏈帶有游離5′-羥基或其磷酸酯的一個末端。一條核酸鏈通常從5′端到3′端書寫。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
什么是DNA的黏端？
中文名稱黏端英文名稱cohesive end;cohesive terminus;sticky end定 義雙鏈DNA片段末端的一種形式。其中兩條鏈的3′或5′具有突出的單鏈末端，這種末端可以與同一DNA片段上另一末端的互補的突出序列相連而形成一個環狀分子，或與另一DNA片段形成更大的DNA分子。
DNA平端化的定義
中文名稱平端化英文名稱blunting定 義將雙鏈DNA兩端突出的單鏈區變成平端的過程。通常對雙鏈的5′突出端，可用克列諾(Klenow)酶或T4 DNA聚合酶延伸補平；如果是3′突出端，可用T4 DNA聚合酶切去3′突出部分而削平。也可以用單鏈特異的核酸酶切除突出單鏈。應用學科生物化學與分子生物
5端RACE升級版
實驗概要完成這個RACE需要全套反轉錄系統，當然選一個好的反轉錄酶（無RNase H），dUTP，taq酶，Uracil DNA glycosylase ，還有這幾條引物：?Adapter A?AUCUCGAGUUCGCGCCGGAUCC(T) 25 VN?cDNA synthesis and ad
DNA連接試驗
當我們已經獲得目的基因片段，選擇好適當的克隆（或表達，轉化）質粒載體， 并確定重組方案后，下面要進行的就是ＤＮＡ片段之間的體外連接，從而獲得重組子。 此重組子可轉入相應的宿主菌中用于對目的基因的擴增以及目的基因表達（如現代基因工程藥物的生產），還可用于序列分析和轉基因等重要生物技術的研究中。?DNA
體外DNA重組技術5
（三）DNA酶切片段的回收【實驗方法與步驟】1.凍融法:（1）在UV燈下，用手術刀片將含DNA片段的瓊脂糖凝膠切下，-70℃冷凍至少 15min，然后在65℃水浴中使膠融化；（2）加入等倍體積TE-飽和酚，劇烈振蕩30秒鐘，然后-70℃冷凍 15min；（3）室溫融化后，12,000rpm離心5mi
質粒DNA的去磷酸化實驗
實驗方法原理 去除 5' 端的磷酸基可防止質粒 DNA 的自身連接和環化。在體外連接反應中，DNA 連接酶可在鄰近的兩個分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當一個分子的 5' 端帶有磷酸基另一分子的 3' 端帶有羥基時，這一反應才能完成。實驗材料 小牛腸堿性磷酸酶（CIP) 或
質粒DNA的去磷酸化實驗
去除 5' 端的磷酸基可防止質粒 DNA 的自身連接和環化。在體外連接反應中，DNA 連接酶可在鄰近的兩個分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當一個分子的 5' 端帶有磷酸基另一分子的 3' 端帶有羥基時，這一反應才能完成。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理
DNA結合蛋白的磷酸化研究
磷酸化化學計量的確定及磷蛋白形成動力學的測定l??????磷酸化作用化學計量的確定1．在冰上建立下列反應混合液：Tris-HCl（50mmol/L；pH8.0）/MgCl2（10mmol/L）????????250μlATP（10mmol/L）????????????????????????????
質粒DNA的去磷酸化實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 去除 5' 端的磷酸基可防止質粒 DNA 的自身連接和環化。在體外連接反應中，DNA 連接酶可在鄰近的兩個分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當一個分子的 5' 端帶有磷酸基另一分子的 3' 端帶有羥基時，這一反
DNA重組技術
連接反應的策略?? 可以采用幾種策略來進行外源ＤＮＡ片段和質粒載體的連接。對此，可依據外源ＤＮＡ片段未的性質，以及質粒載體與外源ＤＮＡ上限制酸切位點的性質來作出選擇。（一）外源ＤＮＡ片段未的性質帶有各種未的外源ＤＮＡ的克隆方法見下表：────────────────────────────────
克隆中載體的處理和去磷酸化
克隆成功與否,除與連接方式以及載體選擇有關外，載體的處理也是一個重要環節。為了提高連接效率，處理載體時應注意以下幾點：??(1)應加入常用量5～10倍的內切酶水解載體，以保證載體被完全酶切；??(2)如用雙酶切割載體，則必須電泳回收載體片段，除去雙酶切所產生的小DNA片段；?(3)如粘端連接,
克隆中載體的處理和去磷酸化
克隆成功與否,除與連接方式以及載體選擇有關外,載體的處理也是一個重要環節。為了提高連接效率,處理載體時應注意以下幾點:(1)應加入常用量5~10倍的內切酶水解載體,以保證載體被完全酶切;(2)如用雙酶切割載體,則必須電泳回收載體片段,除去雙酶切所產生的小DNA片段;?(3)如粘端連接,單酶切處理過的
大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段實驗——修復突出的3’或5‘末端
Klenow酶是大腸桿菌八聚合酶I的羧基端片段，它具有DNA聚合酶和3’到5’方向的外切酶活性，不含5’到3”方向的外切酶活性。實驗材料DNA試劑、試劑盒限制性內切酶EDTA儀器、耗材水浴鍋實驗步驟1. ?在20 μl 反應體積中，用限制性內切酶消化0.1~4 μg DNA。2. ?加入1 μl 0