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連接反應的策略 可以采用幾種策略來進行外源ＤＮＡ片段和質粒載體的連接。對此，可依據外源ＤＮＡ片段未的性質，以及質粒載體與外源ＤＮＡ上限制酸切位點的性質來作出選擇。（一）外源ＤＮＡ片段未的性質帶有各種未的外源ＤＮＡ的克隆方法見下表：────────────────────────────────────────────外源ＤＮＡ片段所帶未端 克隆的要求 說明───────────────────────────────────────────平端 要求高濃度的ＤＮＡ和連接酶1)非重組體克隆的背景可能較高 2)質粒和外源DNA拼命處的限制酶切位點消失 3)重組質粒會帶人外源DNA的串聯拷貝用兩種限制酶消化后 需純化 1)質粒與外源DNA拼命處的限制酶切位點常可保留不同的突出端2......閱讀全文
【實驗原理】1．DNA重組技術重組DNA(Recombinant DNA)技術是遺傳工程的核心技術，也是人類在基因和DNA分子水平進行操作的技術。它包括以下幾個步驟： 1）重組DNA分子的構建：即將目的基因（DNA或cDNA片段）與載體DNA重組，應用TA克隆方法,將PCR擴增產物快速克隆至質粒
重組DNA是在體外用限制性內切酶，將不同來源的DNA分子進行特異地切割，獲得的目的基因或DNA片段與載體重新連接，從而組成一個新的DNA雜合分子。重組的DNA分子能夠通過一定的方式進入相應的宿主細胞，在宿主細胞中進行無性增殖，獲得大量的目的基因或DNA片段，此過程稱基因克隆。重組的DNA分子也能夠在
DNA的克隆是指在體外將含有目的基因或其它有意義的DNA片段同能夠自我復制的載體DNA連接，然后將其轉入宿主細胞或受體生物進行表達或進一步研究的分子操作的過程，因此DNA克隆又稱分子克隆，基因操作或重組DNA技術。DNA克隆涉及一系列的分子生物學技術，如目的DNA片段的獲得、載體的選擇、各種工具酶的
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
二、目的基因和載體的連接獲得目的基因后必須將其放在一定的載體內才能在宿主細胞內擴增或表達。目的基因與載體的連接及其后續的轉化過程習慣上稱為克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技術獲得，因此這里先介紹PCR產物的克隆策略，然后再介紹其他的克隆方式。（一）PCR產物的克隆策略獲得PCR
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
血液分子生物學檢驗技術主要包括PCR技術、DNA測序技術、限制性片段長度多態性（RFLP）、轉基因技術及基因芯片（DNA-chip）技術等分子生物學技術。目前這些技術已應用于血液病基因分析、基因診斷、白血病分型、指導治療、判斷預后和微小殘留病檢測等方面。 （1）核酸分子雜交技術原理和方法 1）So
血液分子生物學檢驗技術主要包括PCR技術、DNA測序技術、限制性片段長度多態性（RFLP）、轉基因技術及基因芯片（DNA-chip）技術等分子生物學技術。目前這些技術已應用于血液病基因分析、基因診斷、白血病分型、指導治療、判斷預后和微小殘留病檢測等方面。（1）核酸分子雜交技術原理和方法1）South
重組DNA技術涉及到組合不同來源的遺傳信息，從而創造自然界以前可能從未存在過的遺傳修飾生物體（genetically modified organisms，GMOs）。最初，在分子生物學家中有人擔心這些生物體可能具有不可預測的不良性狀，一旦從實驗室逸出將帶來生物學危害。這種擔心在 197
沈茜蓉（香港中文大學社會學系研究助理） 如今價值千億美元的美國現代生物技術產業誕生于一項科學發現。 1973年，美國生命科學家Stanley N. Cohen 和 Herbert W. Boyer發現了重組DNA技術，這項技術的發現為生命科學的應用轉化開啟了一扇門；1976年, 作為重組DN
基因克隆技術是分子生物學的核心技術，其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，用于深入分析基因的結構與功能，并可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。基因克隆的一項關鍵技術是DNA重組技術，它利用酶學方法將不同來源的DNA分子進行體外特異性切割，重新拼接組裝成一個新的雜合DNA分子。在此基礎上將
“20年來，我國轉基因技術發展，特別是重大專項的實施逐漸使我國與國際縮短了差距，但遠遠沒有實現對農業產業發揮作用，這其中有科技、社會認識、國家政策、國際輿論等多方面的原因。但作為一項技術，我國必須積極參與并引領其發展。” 28日，中國農村技術開發中心召開“農業前沿生物技術前瞻”圓桌會議，與會專家
“20年來，我國轉基因技術發展，特別是重大專項的實施逐漸使我國與國際縮短了差距，但遠遠沒有實現對農業產業發揮作用，這其中有科技、社會認識、國家政策、國際輿論等多方面的原因。但作為一項技術，我國必須積極參與并引領其發展。” 28日，中國農村技術開發中心召開“農業前沿生物技術前瞻”圓桌會議，與會專家
“20年來，我國轉基因技術發展，特別是重大專項的實施逐漸使我國與國際縮短了差距，但遠遠沒有實現對農業產業發揮作用，這其中有科技、社會認識、國家政策、國際輿論等多方面的原因。但作為一項技術，我國必須積極參與并引領其發展。” 28日，中國農村技術開發中心召開“農業前沿生物技術前瞻”圓桌會議，與會專家
PCR引物決定PCR的特異性，引物的設計就顯得尤為重要。下面以已知DNA序列設計引物為例介紹設計引物應考慮的幾個方面：1、GC比值：眾所周知,堿基對中的GC之間有三條氫鍵，AT之間有兩條氫鍵，GC和AT在引物序列中的合理比例是設定PCR中退火溫度的重要依據。通常在一個引物中GC和AT各半即可。2、長
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
在體外將兩個或多個來源相同或不相同的DNA片段連接成新的重組DNA分子，再轉到特定宿主細胞中進行自主復制并表達。這是分子生物學中的基本技術。DNA重組技術的基本程序包括：（1）獲得外源DNA：外源DNA是進行DNA重組的目的DNA片段，一般采用 DNA聚合酶鏈式反應(PCR)或逆轉錄-DNA聚合酶鏈
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免疫PCR技術（Immuno-PCR） 免疫PCR方法（Immuno-PCR）是Takeshi等1992年將免疫學反應和PCR技術相結合而創建的一種新的檢測技術，具有抗原、抗體反應的特異性和PCR技術的高效性。它運用PCR的高度敏感性來放大抗原抗體反應的特異性，使實驗中只需數百個抗原分子即
摘要：隨著食品工業持續、快速地發展，傳統的方法已經不能夠 滿足當前對食品檢測的更高要求了，人們要求更為簡便快捷、靈活 性強、特異性高的先進的檢測方法，而現代的生物技術的快速發展 使食品的檢測方法更加多樣、準確、迅速及安全，也就是說生物技 術的應用滿足了現代食品檢測的更高要求。 關鍵詞：食品檢測；生物
轉基因技術，是誕生于1865年的遺傳學結合生物化學導致的分子生物學革命的必然結果，是基礎科學的自然應用。 分子生物學誕生于1953年，劍橋大學英國醫學研究委員會的分子生物學實驗室兩位年輕人，美國的博士后Jim Watson和英國的研究生Francis Crick，確定了DNA的雙螺旋
重組DNA技術是現代分子生物技術發展中最重要的成就之一。即是基因工程(Gene Engineering)的核心技術。重組DNA技術（Recombinant DNA Technique）是人類根據需要選擇目的基因（DNA片段）在體外與基因運載體重組，轉移至另一細胞或生物體內，以達到改良和創造新的物種和
DNA改組(DNA shuffling)是一種高通量的突變、篩選技術, 自1994年提出以來, 經過了幾十年的發展，在DNA、酶和藥物蛋白等的改造上都有突出的表現。近期來自第二軍醫大學，浙江理工大學生命科學學院的研究人員就圍繞著這種技術在腺相關病毒定向進化中的發展及其應用，展開了探討，解析了
“核心刊物” 迎來了新期刊：科學通報，中國科學C輯:生命科學，這兩份期刊均是由中國科學院和國家自然科學基金委員會共同主辦的，我國學術期刊中的知名品牌，被國內外各主要檢索系統收錄，如國內的《中國科學論文與引文數據庫》(CSTPCD)、《中國科學引文數據庫》(CSCD)等;美國的SCI、CA、E
2011年在我們還不是十分熟悉它的名字的時候，它被評為了當年Nature Methods雜志的年度技術，2012年在這種技術已成功應用于人類體外培養細胞、酵母、線蟲、斑馬魚、植物、大小鼠等多個領域之后，它又入選了Science十大科學突破。這就是TALEN (Transcription
CRISPR/Cas9這項新技術使人們能更精準地對DNA代碼進行控制，引發了遺傳學和細胞生物學領域的革新，科學家們對它寄予厚望，希望借助它的力量，治療包括癌癥在內的疾病并進一步解開人類細胞身上籠罩的謎團。 但這一基因編輯技術也引發了科學家們的憂慮。據美國趣味科學網站報道，有科學家擔心，這一新工