初步應用有關原位PCR技術應用成功的第一篇報道是對感染綿羊中樞神經系統visna病毒在綿羊脈絡從一細胞中檢查,通過PCR擴增,僅用150堿基對的短探針就可通過ISH檢查到了細胞內的visna病毒。從開始在試管內細胞行PCR擴增后再涂片做ISH(原位雜交)檢查,已發展到用福爾馬林固定、石蠟切片的常規病理組織方法做原位PCR檢查。有傳統的標記探針的原位PCR法(間接法),也有將標記物先標記PCR的引物,讓標記物擴增后再行ISH檢查的直接法。因此,目前就原位PCR方法而言,尚未能獲得統一,也即未能比較出哪一種方法最可靠簡便,各家報道的原位PCR技術中,在標本處理和種類上尚不同(細胞懸液、涂片、組織切片等),想檢測的靶核酸也不同(病毒或體細胞的DNA或mRNA),擴增的方法上有不同(單引物、多引物),最后顯示的方法也不同(直接法、間接法)。這些還都有待在今后的工作中積累經驗,以求一致。原位PCR應用的課題,目前正片于開始階段,還很局限,......閱讀全文
DNA重組技術(或基因工程)是20世紀生物學的偉大成就,并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域,為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用,著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
常用分子生物學和細胞生物學實驗技術介紹! 核酸分子雜交技術 由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
核酸分子雜交技術 由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
實時熒光定量PCR (real time fluorogenetic quantitative PCR, FQ-PCR),是在PCR定性技術基礎上發展起來的核酸定量技術。它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時檢測整個PCR過程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方
實時熒光定量PCR (real time fluorogenetic quantitative PCR, FQ-PCR),是在PCR定性技術基礎上發展起來的核酸定量技術。它是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時檢測整個PCR過程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析
在體外將兩個或多個來源相同或不相同的DNA片段連接成新的重組DNA分子,再轉到特定宿主細胞中進行自主復制并表達。這是分子生物學中的基本技術。DNA重組技術的基本程序包括:(1)獲得外源DNA:外源DNA是進行DNA重組的目的DNA片段,一般采用 DNA聚合酶鏈式反應(PCR)或逆轉錄-DNA聚合酶鏈
PCR是一種模擬天然DNA復制過程,在體外將特異性目的DNA片段序列進行高效擴增的分子生物學新技術。自八十年代由美國Muilis發明這項技術以來,由于具有快速、敏感、特異及高效的特點,得以迅速推廣,并從這一分子生物學基本技術擴展出一系列分子生物學研究方法。PCR擴增所需的模板DNA來源
在體外將DNA分子片段與載體DNA片段連接,轉入細胞獲得大量拷貝的過程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步驟包括:制備目的基因→將目的基因與載體用限制性內切酶切割和連接,制成DNA重組→導入宿主細胞→篩選、鑒定→擴增和表達。載體(vecors)在細胞內自我復制,并帶動重組的分子片段共同增殖,從而
載體 所謂載體是指攜帶靶DNA片段進入宿主細胞進行擴增和表達的工具。細菌質粒 是一種細菌染色體外小型雙鏈環狀結構的DNA,分子大小為1-20kb,對細菌的某些代謝活動和抗藥性表型具有一定的作用。質粒載體是在天然質粒的基礎上人工改造拼接而成。最常用的質粒是pBR322。噬菌體(phaeg)&
核酸原位雜交用特定標記的已知順序核酸作為探針與細胞級或組織切片中核酸進行復性雜交并對其實行檢測的方法,稱為核酸原位雜交(nucleic acid hybridization in situ)。用來檢測DNA在細胞核或染色休上的分布,與細胞內RNA進行雜交以研究該組織細胞中特定基因表達水閏;還
一、醫學檢驗的發展現狀 醫學檢驗是一門具有多學科理論交叉;應用性強;發展迅速的應用技術學科,是醫學各科中發展最快的專業之一。現代實驗室科學的發展促使原來的醫學檢驗工作的內容、方式及人員結構和管理工作各方面都起著顯著的變化。我國的醫學檢驗人員的培養也學徒式道路發展到目前的正規院校教育。其中三年制為
基因工程基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遺傳物質,在體外切割,拼接和重新組合,然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞,使外源DNA 在受體細胞中進行復制和表達
基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遺傳物質,在體外切割,拼接和重新組合,然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞,使外源DNA 在受體細胞中進行復制和表達。按人們
基因工程又稱遺傳工程、DNA 重組技術、分子克隆等。它是七十年代在分子生物學發展的基礎上形成的新學科。所謂基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遺傳物質,在體外切割,拼接和重新組合,然后通過載體把重組的DNA 分子引入受體細胞,使外源DNA 在受體細胞中進行復制和
醫學真菌學檢查是診斷真菌病的重要依據,隨著真菌感染病例的日益增多,對實驗室的診斷也提出了更高的要求。不論是患者淺部或深部感染診斷,幾乎全依賴于臨床標本的真菌學檢查。特別是系統性真菌感染,其早期特異的診斷方法是挽救患者生命的關鍵,而病原真菌的形態結構十分多樣,在不同條件下同一真菌也可有不同特點的形態。
醫學真菌學檢查是診斷真菌病的重要依據,隨著真菌感染病例的日益增多,對實驗室的診斷也提出了更高的要求。不論是患者淺部或深部感染診斷,幾乎全依賴于臨床標本的真菌學檢查。特別是系統性真菌感染,其早期特異的診斷方法是挽救患者生命的關鍵,而病原真菌的形態結構十分多樣,在不同條件下同一真菌也可有不同特點的形態。
隨著先進儀器的發展和普及,檢驗行業普遍出現過分依賴儀器、忽視細胞形態學檢查的傾向,漏診、誤診甚至引發醫療糾紛的現象時有發生。為此,專家呼吁—— 血常規、尿常規檢查的內容主要包括細胞數目(或化學成分)檢測和細胞形態學檢查兩個方面。從某種意義講,細胞形
第一章 總則 第一條 為加強我省醫療機構臨床實驗室的建設與管理,提高臨床檢驗水平,保證醫療質量和醫療安全,根據《醫療機構臨床實驗室管理辦法》,結合我省實際,制定本實施細則。  
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數,具有速度快、精度高、準確性好的優點,是當代最先進的細胞定量分析技術之一。光源、液流通路、信號檢測傳輸和數據的分析系統是流式細胞儀的主要組成
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗