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淋巴細胞的分離和激化 實驗材料 全血 試劑、試劑盒 肝素 葡聚糖 PBS Ficoll-Hypaque 儀器、耗材 離心機 實驗步驟 1. 收集 10 ml 全血，加入不含防腐劑的肝素（0.2 ml 肝素/10 ml 全血）。2. 在 15 ml 離心管中的肝素化血中加入......閱讀全文
第一部分：關于ELISPOT1． 什么是ELISPOT檢測?答:酶聯免疫斑點 ( enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT) 檢測技術是通過兩種高親和力的特異性抗細胞因子抗體來檢測淋巴細胞分泌細胞因子情況的一種方法。淋巴細胞在體內被抗原激活后，或者在體外培養
以前認為紅細胞、粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等血細胞都屬終末分化細胞，很難在體外培養生長或僅能短期培養而不能傳代，近年來由于細胞培養技術的發展，已有血細胞培養成功的報道，正常血細胞在體外培養生長時間短，只有白血病細胞，血友病細胞、淋巴瘤細胞可培養成功并建立細胞系，但多半為EB病毒等致瘤病毒引起的轉化細
實驗概要外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)主要指淋巴細胞和單核細胞，是免疫學實驗最常用的細胞，也是進行T細胞和B細胞分離純化的重要環節。本實驗介紹了兩種單個核細胞的分離方法。實驗原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密
外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）主要指淋巴細胞和單核細胞，是免疫學實驗最常用的細胞，也是進行T細胞和B細胞分離純化的重要環節。1．原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密度較大，為1.092左右；淋巴細胞和單核細胞的
用于基因芯片分析的血液樣品的準備可用于：（1）基因表達分析；（2）分析血液中白細胞的基因表達情況。實驗方法原理基因芯片(genechip)（又稱DNA芯片、 生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是 雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片
用淋巴細胞分離液分離單個核細胞1）分離外周血中的單個核細胞（PBMC）1．抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加等量含5～10IU/ml肝素的無血清緩沖液懸浮細胞。將細胞懸液小心加在與血液等量的淋巴細胞分離液上，室溫中，水平離心500×g 20分鐘。此時離心管中形成5層：最上面是血漿，血漿層和淋巴細胞
人外周血淋巴細胞RNA的提取方法 一、采集血樣，室溫保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管進行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可；血量一般為1ml；一般地，1ml外周血中含有大約1-2*10^6個單個核細胞（PBMC，即淋巴細胞核單核細胞）。 二、提取淋巴細胞。取1.5ml 無菌無酶的
人外周血淋巴細胞RNA的提取方法 一、采集血樣，室溫保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管進行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可；血量一般為1ml；一般地，1ml外周血中含有大約1-2*10^6個單個核細胞（PBMC，即淋巴細胞核單核細胞）。 二、提取淋巴細胞。取1.5ml 無菌無酶的
人外周血淋巴細胞RNA的提取方法 一、采集血樣，室溫保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管進行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可；血量一般為1ml；一般地，1ml外周血中含有大約1-2*10^6個單個核細胞（PBMC，即淋巴細胞核單核細胞）。 二、提取淋巴細胞。取1.5ml 無菌無酶的
人外周血淋巴細胞RNA的提取方法一、采集血樣，室溫保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管進行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可；血量一般為1ml；一般地，1ml外周血中含有大約1-2*10^6個單個核細胞（PBMC，即淋巴細胞核單核細胞）。二、提取淋巴細胞。取1.5ml 無菌無酶的離心管，為
實驗概要淋巴細胞主要分T淋巴細胞和B淋巴細胞兩大亞群，它們具有不同的特性和功能，為此在進行某些免疫學實驗時，首先需分離出純的T淋巴細胞和B淋巴細胞。本實驗介紹了T、B淋巴細胞分離試驗的操作步驟。實驗原理本試驗的原理為：淋巴細胞與用溴花二氨基異硫氫化物(簡稱AET)處理的綿羊紅細胞(SRBC)混合后，
從單個核細胞中分離T細胞一、用玫瑰花結形成試驗分離E＋細胞1．制備AET-綿羊紅細胞1）在刻度離心管中，用無菌的含5％小牛血清的Hanks液洗滌綿羊紅細胞3次，每次離心500×g 10分鐘。2）吸凈上清液，測量紅細胞比容。輕擊試管分散紅細胞，加入4倍紅細胞比容量、新鮮制備的AET溶液，混勻。室溫中反
人外周血淋巴細胞RNA的提取方法一、采集血樣，室溫保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管進行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可；血量一般為1ml；一般地，1ml外周血中含有大約1-2*10^6個單個核細胞（PBMC，即淋巴細胞核單核細胞）。二、提取淋巴細胞。取1.5ml 無菌無酶的離心管，為
1）用玫瑰花結形成試驗分離E＋細胞：1．制備AET-綿羊紅細胞：1）在刻度離心管中，用無菌的含5％小牛血清的Hanks液洗滌綿羊紅細胞3次，每次離心500×g 10分鐘。2）吸凈上清液，測量紅細胞比容。輕擊試管分散紅細胞，加入4倍紅細胞比容量、新鮮制備的AET溶液，混勻。室溫中反應30分鐘。3）用無
淋巴細胞主要分T淋巴細胞和B淋巴細胞兩大亞群，它們具有不同的特性和功能，用于（1）免疫學研究（2）淋巴細胞的鑒定。實驗方法原理淋巴細胞與用溴花二氨基異硫氫化物（簡稱AET）處理的綿羊紅細胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴細胞均能吸附AET-SRBC，形成牢固穩定而巨大的E-花環，較正常未處理的SR
概述臨床上的各種類型的免疫缺陷、自身免疫病以及腫瘤等疾病均可出現淋巴細胞或淋巴亞群的數量和功能的變化。因此用體外方法對機體具有免疫反應的外周血淋巴細胞及其亞群的數目或比例以及它們所顯示的功能的強弱進行檢測，是判斷機體細胞免疫水平的一種重要手段。這對于臨床認識疾病、探討其發病機制、觀察病情變化、判斷預
淋巴細胞主要分T淋巴細胞和B淋巴細胞兩大亞群，它們具有不同的特性和功能，為此在進行某些免疫學實驗時，首先需分離出純的T淋巴細胞和B淋巴細胞。本試驗的原理為：淋巴細胞與用溴花二氨基異硫氫化物（簡稱AET）處理的綿羊紅細胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴細胞均能吸附AET—SRBC，形成牢固穩定而巨大
第一節 免疫細胞的分離 一、外周血單個核細胞的分離 將2份6%聚蔗糖蒸餾水溶液與1份34%泛影葡胺生理鹽水溶液混合，其比重為1.077±0.002，可作為常規的淋巴細胞分離液，即Ficoll分離液。 主要用于分離外周血中單個核細胞，是一種單次密度梯度離心分離法，其分布由上到下依次為：稀釋
收集渾濁帶分離獲得的淋巴細胞，用無鈣、鎂離子的PBS洗3次后，再用培養基洗1次后計數，分瓶培養。此法分離獲得淋巴細胞純度高。分離液的制備：9% Ficoll（20℃下相對密度約1.020）24份與33.4%泛影葡胺（用泛影鈉或Conray400也可，在20℃下相對密度約1.200）10份混合后，
血細胞分離技術大容量離心機采血 （一）材料與試劑1．抗凝劑（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉化為凝血酶，進而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常
(一)材料與試劑 1．抗凝劑 (1)肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉化為凝血酶，進而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1 000U/ml，市售肝素多為100U~126U／mg。 (2)乙二胺四乙酸(EDTA)：是
采血 （一）材料與試劑 1．抗凝劑 （1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉化為凝血酶，進而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1 000U/ml，市售肝素多為100U~126U／mg。 （2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是
抗血清的制備 【原理】：用抗原刺激機體可以產生抗體，抗原的性質、純度和活性影響其免疫動物后獲得的抗體的的特異性和效價。在體外有目的的制備抗原，經初次、再次免疫的過程可以獲得高質量的抗體。 【注意事項】 ①制備佐劑時，一定要順著同一方向用勁磨。 ②檢查油包水的方法：培養皿內加水，滴入混勻液
器材和試劑： 所有直接接觸細胞的用品和試劑必須無菌。1. 標注體積刻度的試管（圓錐形底）；2. 巴斯德吸管（短型和長型）；3. 10ml刻度吸管和洗耳球或移液裝置；4. 臺式離心機；5. 淋巴細胞分離液或類似試劑；6. 培養基；實
從單個核細胞中分離T細胞1）用玫瑰花結形成試驗分離E＋細胞1．制備AET-綿羊紅細胞1）在刻度離心管中，用無菌的含5％小牛血清的Hanks液洗滌綿羊紅細胞3次，每次離心500×g 10分鐘。2）吸凈上清液，測量紅細胞比容。輕擊試管分散紅細胞，加入4倍紅細胞比容量、新鮮制備的AET溶液，混勻。室溫中反
實驗概要熟悉混合淋巴細胞培養(mixed lymphocyte cultue，MLC)的原理；掌握分離淋巴細胞的方法；學習用同位素標記進行混合淋巴細胞培養的操作方法。實驗原理混合淋巴細胞培養或稱混合淋巴細胞反應（MLR）是將二個無關個體的淋巴細胞混合在一起培養，由于二者的淋巴細胞膜上的組織相容性抗原
細胞介導的細胞毒作用（CMC）檢測法：效應細胞和靶細胞的制備CMC中效應細胞的制備：1）用淋巴細胞分離液分離PBMC：1、抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸鹽（PBS）懸浮細胞。將此懸液小心加在淋巴細胞分離液上，400×g離心30分鐘。2、離心后紅細胞在管底，PBMC在血漿和淋巴細胞分離
用體外或體內試驗對機體的各種參與免疫應答的細胞進行鑒定、計數和功能測定，藉以了解機體的免疫狀態，并對某些臨床疾病的診斷，預后及療效觀察等也具有一定意義。一、免疫細胞的分離體外測定免疫細胞首先要從外周血或淋巴組織中分離所需的細胞。其主要方法是根據細胞的表面標記、理化性狀及功能等方面的差別進行設計。
Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞 Percoll不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞
Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞 Percoll不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞