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實驗方法原理 在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。 實驗材料 重組 M13 噬菌體單鏈 DNA M13 噬菌體重組噬菌斑 M13 噬菌體非重組載體噬菌斑 大腸桿菌 F' 菌株 試劑、試劑盒 SDS SSC 蔗糖凝膠加樣緩沖液 儀器、耗材 ......閱讀全文
實驗方法原理 在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。實驗材料 重組 M13 噬菌體單鏈 DNAM13 噬菌體重組噬菌斑M13 噬菌體非重組載體噬菌斑大腸桿菌 F' 菌株試劑
本方案主要描述了篩選噬菌體 M13 重組克隆，而一種選擇方案是篩選含噬菌粒的細菌克隆。最后也介紹了用 PCR 檢測突變體的方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗方法原理試劑、試劑盒甲酸銨寡核苷酸雜交溶液寡核苷酸預雜交液TE噬菌體T4多核
在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌
實驗方法原理 試劑、試劑盒 甲酸銨 寡核苷酸雜交溶液 寡核苷酸預雜交
實驗方法原理 試劑、試劑盒 甲酸銨寡核苷酸雜交溶液寡核苷酸預雜交液TE噬菌體T4多核苷酸激酶限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變寡核苷酸[γ-32P]ATP2XYT 頂層瓊脂和 2xYT 瓊脂平皿儀器、耗材 鈍端鑷子皮下注射用針頭（18 號）和印度墨水孵箱硝酸纖維素膜或尼龍膜真空烤箱68°C 水浴What
二、噬菌體載體作為細菌寄生物的噬菌體，大多數具有編碼多種蛋白質的基因，能利用宿主細胞的蛋白質合成體系，進行生長和增殖。構建的噬菌體載體，以λ噬菌體、M13和粘粒最為常用。㈠ λ噬菌體載體野生型λDNA是一種基因組為4.8 kb的線性雙鏈DNA，全部序列已知，共編碼50多個基因。其中約一半基因參與
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 乙醇 氯化鈉 苯酚 醋酸鈉 TE 瓊
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液乙醇氯化鈉苯酚醋酸鈉TE瓊脂糖凝膠原始的重組 M13 噬菌體單鏈 DNAYT 培養基儀器、耗材 Corex 離心機管巴斯德滴管柱層析樹脂大腸桿菌菌株 CJ236大腸桿菌菌株 TG1JM109 或相當的菌株實驗步驟 材料緩沖液和溶液各種貯存液，緩沖液和試劑成分請參閱附錄 1。
經典的 Kunfcel 寡核苷酸指導的誘變方法利用大腸桿菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特異地篩除去含尿嘧啶堿基的 DNA 的選擇性作用（請參考寡核苷酸誘變信息欄）。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩
試劑、試劑盒 乙酸銨 ATP 乙醇 甘油 蒸餾水 IPTG Mg
下面的方案描述了鳥槍法測序的起始步驟，從靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌體載體構建 DNA 片段文庫，也包括斷裂靶 DNA 的兩種方法--超聲法和噴霧法，以及用 DNA 聚合酶修復片段末端的技術要點。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。試劑、
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這個方案主
雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌體的 DNA 片段不要大于 1000 堿基。而且，當用“正向”或“反向”通用測序引物進行 DNA 測序時，大片段的中心區域可
序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam－Gilbert DNA 化學降解法測序策略目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的
實驗方法原理 M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌至周圍培養液中的病毒顆粒中制備的，首先在高鹽存在下，絲狀病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀濃縮，然后用酚抽提釋放單鏈 DNA，最
實驗方法原理 M13 噬菌體單鏈 DNA 是從感染細胞分泌至周圍培養液中的病毒顆粒中制備的，首先在高鹽存在下，絲狀病毒被聚乙二醇（PEG) 沉淀濃縮，然后用酚抽提釋放單鏈 DNA，最后乙醇沉淀收集單鏈 DNA。實驗材料 M13 單鏈噬菌體載體感染 M13 噬菌體的大腸桿菌培養物未感染的大腸桿菌的培養
實驗方法原理 這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特定的重組體被多次用于制備反射性標記探針或構建大量定點突變體時。實驗材料 大腸桿菌 F' 菌株M13 噬菌體原液
實驗方法原理 這個方案主要用于制備大量 M13 噬菌體的雙鏈 DNA，因在實驗室中 M13 噬菌體經常被用作克隆載體，以及在某些特殊用途時需要制備大量的單鏈噬菌體 DNA，如當一個特
實驗方法原理 噬菌粒巧妙地組合了質粒和絲狀噬菌體的特征。除了基本特征外，這些質粒通常是高拷貝數的，并帶有一個修飾后的絲狀噬菌體的主要基因間區。這個區域 ( 野生型為 508 bp
噬菌粒巧妙地組合了質粒和絲狀噬菌體的特征。除了基本特征外，這些質粒通常是高拷貝數的，并帶有一個修飾后的絲狀噬菌體的主要基因間區。這個區域 ( 野生型為 508 bp)不表達蛋白，但含有全部的順式作用序列，該作用是病毒 DNA 合成起始和結束及噬菌體顆粒的形態發生必不可少的。本實驗來源「分子克隆實驗指
⑷基因組成 lDNA至少包括61個基因，大多基因按功能相似性成簇排列，其中一部分為噬菌體生命活動的必須基因，另一部分約1／3為非必須區段。 3. l噬菌體載體的類型 插入型 （Insertion vectors ）
實驗方法原理 噬菌粒巧妙地組合了質粒和絲狀噬菌體的特征。除了基本特征外，這些質粒通常是高拷貝數的，并帶有一個修飾后的絲狀噬菌體的主要基因間區。這個區域 ( 野生型為 508 bp)不表達蛋白，但含有全部的順式作用序列，該作用是病毒 DNA 合成起始和結束及噬菌體顆粒的形態發生必不可少的。實驗材料
（一）外源ＤＮＡ和質粒載體的連接反應 外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間 形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的
實驗方法原理 雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至
試劑、試劑盒 dATP 去離子蒸餾水 EDTA 延伸 終止混合液 和示蹤混合液 甲
基因克隆技術是分子生物學的核心技術，其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，用于深入分析基因的結構與功能，并可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。基因克隆的一項關鍵技術是DNA重組技術，它利用酶學方法將不同來源的DNA分子進行體外特異性切割，重新拼接組裝成一個新的雜合DNA分子。在此基礎上將
用大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及單鏈 DNA 模板進行雙脫氧測序實驗試劑、試劑盒 dATP去離子蒸餾水EDTA延伸 終止混合液和示蹤混合液甲酰胺上樣緩沖液Tris-Cl酶和緩沖液大腸桿菌 DNA 聚合酶ⅠKienow 片段核酸和寡聚核苷酸寡核苷酸引物單鏈 DNA 模板放射性化合物
實驗方法原理 雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌體的 DNA 片段不要大于 1000 堿基。而且，當用“正向”或“反向”通用測序引物進行 DNA
當 Sanger 及其同事建立第一個 DNA 鏈終止延伸法時，只有一種合適的 DNA 聚合酶可用，即大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在時聚合 dNTP 的活性，但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，