核酸探針標記的簡介
核酸探針根據核酸的性質,可分為DNA和RNA探針；根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針；根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針；根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。......閱讀全文
核酸探針標記的簡介
核酸探針根據核酸的性質,可分為DNA和RNA探針；根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針；根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針；根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。
核酸探針標記
實驗概要核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。實驗原理分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因
核酸探針標記的實驗過程
?實驗原理分子生物研究中，zui常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可
核酸探針標記的實驗過程
實驗原理分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將
核酸探針標記的實驗過程
實驗原理分子生物研究中，zui常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因植物拷貝數的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nick translation) 當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可將
核酸探針標記及原位雜交
一、核酸探針標記核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否
核酸探針標記及原位雜交
一、核酸探針標記 核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。 核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大
分子雜交技術的核酸探針標記法
核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。 分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA
關于探針標記的基本簡介
探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理，用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA（或RNA）分子，與被測定的靶序列互補，以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、R
核酸探針標記及原位雜交2
（二）隨機引物合成法 隨機引物合成雙鏈探針是使寡核苷酸引物與DNA模板結合，在Klenow酶的作用下，合成DNA探針。合成產物的大小、產量、比活性依賴于反應中模板、引物、dNTP和酶的量。通常，產物平均長度為400～600個，可以獲得大量的有效探針。反應時對模板的要求不嚴格，用微量制備的質
核酸探針標記及原位雜交3
3.注意事項（1）避光下準備反應體系：由于光敏生物素醋酸鹽對光敏感，應避免光照。在分裝試劑及核酸與光敏生物素混合時應在暗室安全燈下操作。（2）核酸純度：由于光敏生物素能與任何有機物反應，因此用做標記探針的核酸要高度純化。用作標記探針的核酸最好不用Tris溶液溶解，Tris中所含氨基會干擾標記。（3）
核酸探針標記及原位雜交4
(三)試劑配制配制溶液過程中均需戴手套，液體配制均用超凈水，所用瓶子均經160℃烘烤4h，主要目的是去除RNA酶。1.DEPC水 將DEPC按1‰濃度加入超凈水中，充分混合后靜置過夜，15~20min高壓消毒，之后室溫避塵存放。2.0.1mol PBS pH 7.4A液：0.1mol NaH2PO4
核酸探針標記及原位雜交1
一、核酸探針標記核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否
關于Southern雜交的探針標記簡介
用于Southern印跡雜交的探針可以是純化的DNA片段或寡核苷酸片段。探針可以用放射性物質標記或用地高辛標記，放射性標記靈敏度高，效果好；地高辛標記沒有半衰期，安全性好。人工合成的短寡核苷酸可以用T4多聚核苷酸激酶進行末端標記。探針標記的方法有隨機引物法、切口平移法和末端標記法。
核酸雜交技術(Northern－Blot、Southern－Blot和探針標記）
（一）Southern Blot原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進
PCR擴增標記法探針標記
PCR擴增標記法探針標記???? PCR擴增標記法的原理與普通的核酸PCR相同。即Taq?DNA多聚酶以DNA為模板，在特異引物引導下，在PCR儀中合成cDNA探針。由于在反應體系中加入一定量的標記dNTP，因此擴增的同時又是一個標記過程。cDNA探針PCR擴增法標記原理
核酸探針的分類
核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。
地高辛對探針的標記
實驗概要本實驗擬通過隨機引物及PCR方法，將DNA探針片段用DIG標記，進一步掌握探針的標記技術。實驗原理帶有地高辛標記的dUTP（圖1）通過缺口翻譯、隨機翻譯或PCR等反應而使探針核酸片段帶有地高辛，進一步可與帶有AP、CSP等各種抗地高辛抗體復合物發生免疫反應，使探針上帶有AP等分鐘，進一步能催
基因探針標記的介紹
探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA（或RNA）分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、R
基因探針的標記方法
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
關于探針標記的簡述
探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理，用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA（或RNA）分子，與被測定的靶序列互補，以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、R
簡述探針標記方法
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同時在3´；端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分
搖核酸的熒光探針
DNA和RNA?搖核酸的熒光探針 用于共聚焦激光掃描顯微鏡的主要有Acridine Orange(吖啶橙，AO)、Propidium Iodide(碘化丙啶，PI)。兩種染料既可標記DNA又可標記RNA，如為獲得單獨的DNA或RNA分布，染色前可用RNA酶或DNA酶處理細胞。PI不能進入完整的細胞膜
核酸基因分子探針
從化學和生物學的意義上理解，探針是一種已知特異性的分子，它帶有合適的標記物供反應后檢測。探針和靶的相互反應如抗原-抗體、血凝素-碳水化合物、親合素-生物素、受體和配體，以及核酸與其互補核酸間的雜交等反應均屬此類。用核酸探針與待檢標本中核酸雜交，形成雜交體，再用呈色反應顯示。此方法用于疾病的診斷，稱為
核糖核酸探針
核糖核酸探針1．室溫下，于1.5ml無菌微量離心管內依次加入：5μl???????????????5×轉錄緩沖液1μg???????????????模板DNA1.2μl?????????????10 mmol/L rATP（終濃度為480μmol/L）1.2μl?????????????10 mmo
關于探針標記方法的介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同時在3´；端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用于大分
DNA探針的標記實驗
核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類；根據是否存在互補鏈，可分為單鏈和雙鏈探針；根據放射性標記物摻入情況，可分為均勻
基因探針的標記方法介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
DNA探針的標記實驗
實驗方法原理?分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。放射性同位素標記是最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法。
DNA探針的標記實驗
探針標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一