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    ChIP實驗的三大法寶

    在基因調控領域,可以說沒有比表觀遺傳學更熱的話題了。而染色質免疫共沉淀ChIP是表觀遺傳學研究中最常用的方法。 ChIP通過針對染色質相關蛋白(組蛋白、轉錄因子等)的抗體,來鑒定與該蛋白(或蛋白修飾)相連的序列。這種方式能夠幫助人們定位基因組中發生的表觀遺傳學改變。舉例來說,針對H3K4me3(賴氨酸-4上的組蛋白H3三甲基化)的抗體可用來檢測活躍表達的基因,而針對H3K27me3的抗體可用于檢測沉默的基因。類似的技術還包括RIP(RNA免疫沉淀)和MeDIP(甲基化DNA免疫沉淀)。RIP可以幫助人們鑒定,與特定RNA結合蛋白相連的RNA。而MeDIP技術允許研究者pull down甲基化的染色質序列。 一、提高染色質的質量與絕大多數實驗方法相同,ChIP也遵循著GIGO原則(Garbage in, garbage out)。如果你的染色質原材料不佳,當然就很難得到理想的實驗結果。同時如果你的原材料OK,下一步片段......閱讀全文

    染色質免疫沉淀技術的應用

    隨著人類基因組測序工作的基本完成,功能基因組學逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域,要想提供蛋白因子直接調控的證據,需要直接檢測蛋白質-DNA的相互作用,而染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一種研

    ChIP實驗技術經驗分享

       染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱ChIP)是研究活體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體反應的特異性,可以真實地反映體內蛋白因子與基因組DNA結合的狀況。隨著對基因功能研究的不斷深入,這項技術正越來越多的被應用于科研的各個領域。

    染色質免疫沉淀(ChIP)技術的難點及應用-2

    3. 染色質免疫沉淀Input對照:在進行免疫沉淀前,需要取一部分斷裂后的染色質做Input對照。Input是斷裂后的基因組DNA,需要與沉淀后的樣品DNA一起經過逆轉交聯,DNA 純化,以及最后的PCR或其他方法檢測。Input對照不僅可以驗證染色質斷裂的效果,還可以根據Input中的靶序

    ChIP實驗技術經驗分享

    染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱ChIP)是研究活體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體反應的特異性,可以真實地反映體內蛋白因子與基因組DNA結合的狀況。隨著對基因功能研究的不斷深入,這項技術正越來越多的被應用于科研的各個領域

    染色質免疫沉淀(ChIP)技術的難點

    染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱ChIP)是研究體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體的特異性反應,可以真實地反映體內蛋白分子與基因組DNA結合的狀況。下面我們就最基本的實驗步驟,實驗中的小技巧以及需要注意的問題簡單介紹一下。1.

    快速了解染色質免疫共沉淀技術(ChIP)

      ChIP技術的原理   在生理狀態下把細胞內的DNA與蛋白質交聯在一起,通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后,利用抗原抗體的特異性識別反應,將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來,以富集存在組蛋白修飾或者轉錄調控的DNA片段,再通過多種下游檢測技術(定量PCR、基因芯片、測序等)來檢測此富集片

    快速了解染色質免疫共沉淀技術(ChIP)

    ChIP技術的原理在生理狀態下把細胞內的DNA與蛋白質交聯在一起,通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后,利用抗原抗體的特異性識別反應,將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來,以富集存在組蛋白修飾或者轉錄調控的DNA片段,再通過多種下游檢測技術(定量PCR、基因芯片、測序等)來檢測此富集片段的DNA序

    ChIP 新手心得

    最近有不少戰友在做ChIP實驗,希望我的一點經驗對大家有幫助(本貼不談實驗步驟,最后我會附件一份說明書,有詳細步驟,另外建議像我一樣的新手用試劑盒,避免不必要的麻煩)一、原理轉錄從基因的啟動子區開始,由一系列的轉錄因子結合到基因的啟動子區,通用轉錄因子結合在基本啟動子區起始轉錄,而這個過程對基因的轉

    ChIP-Seq分析常見問題集錦

    染色質免疫共沉淀測序(ChIP-Seq)是指對染色質免疫共沉淀(ChIP)獲得的DNA片段進行大規模測序,并能把所研究蛋白的DNA結合位點精確定位到基因組上。Roche GS FLX Titanium 、Illumina Hiseq2000和AB SOLID 4 這3種測序技術均可以用于ChIP-

    去甲基化酶ALKBH5在胰腺癌中的應用

      文章導讀   表觀遺傳修飾如m6A甲基化在腫 瘤的發生和發展中起到重要作用。而甲基化酶對ai癥的影響也受到廣 泛關注。其中去甲基化酶ALKBH5已被報道過能通過維持乳腺ai細胞的干細胞性而促進腫 瘤的形成,還有文章探究過其在急性白血病中的作用,但其對胰腺ai的影響還缺乏研究。今年5月份發表在M

    去甲基化酶ALKBH5在胰腺癌中的應用

      表觀遺傳修飾如m6A甲基化在腫 瘤的發生和發展中起到重要作用。而甲基化酶對ai癥的影響也受到廣 泛關注。其中去甲基化酶ALKBH5已被報道過能通過維持乳腺ai細胞的干細胞性而促進腫 瘤的形成,還有文章探究過其在急性白血病中的作用,但其對胰腺ai的影響還缺乏研究。今年5月份發表在Molecular

    染色質免疫沉淀(ChIP)技術的難點及應用-1

    序言隨著人類基因組測序工作的基本完成,功能基因組學的研究逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域。研究某個蛋白因子的調控功能,可以通過對蛋白活性(激活或抑制其活性),蛋白數量(過表達Overexpression或基因缺陷型Knockout), 以及蛋白功能(功能缺陷

    中國科大基因轉錄調控研究取得進展

      近日,中國科學技術大學生命科學學院教授單革實驗室研究發現,秀麗線蟲中兩個高度保守的轉錄因子UNC-30和UNC-55,共調控包括cAMP通路、微小RNA(microRNA)和長鏈非編碼RNA(lncRNA)等在內的數以千計的靶基因的表達,從而調控D型運動神經元的發育和可塑性。研究論文近日發表在《

    外泌體lncRNA介導的淋巴轉移機制的揭秘

      外泌體是指包含多種RNA(環狀RNA、miRNA、LncRNA和mRNA等)和蛋白質的盤狀囊泡(30-200nm)。幾乎所有類型的細胞均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于各種體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,能夠參與細胞間通訊。目前,有關外泌體分泌、攝取、

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      外泌體是指包含多種RNA(環狀RNA、miRNA、LncRNA和mRNA等)和蛋白質的盤狀囊泡(30-200nm)。幾乎所有類型的細胞均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于各種體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,能夠參與細胞間通訊。目前,有關外泌體分泌、攝取、

    辭舊迎新,ChIP都有哪些新玩法

      如果研究者們想知道蛋白在做什么,他們通常會采取直接的方式:免疫共沉淀能知道蛋白A和蛋白B有沒有在一起,ChIP能確定蛋白A是否與核酸序列B結合。  染色質免疫共沉淀ChIP可以鑒定與指定蛋白結合的DNA序列,其基礎理念能追溯到幾十年前。如今ChIP已經成為了表觀基因組學的一個基本工具,與新一代測

    技術推薦 | ChIP的新玩法

      如果研究者們想知道蛋白在做什么,他們通常會采取直接的方式:免疫共沉淀能知道蛋白A和蛋白B有沒有在一起,ChIP能確定蛋白A是否與核酸序列B結合。  染色質免疫共沉淀ChIP可以鑒定與指定蛋白結合的DNA序列,其基礎理念能追溯到幾十年前。如今ChIP已經成為了表觀基因組學的一個基本工具,與新一代測

    RNA-蛋白互作揭示視網膜母細胞瘤發生的染色體構象調控

       上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院范先群教授主攻眼部腫瘤和眼眶外科,在基礎研究和臨床治療方面取得突出成就。其帶領的眼腫瘤團隊利用ChIRP-MS技術(一種研究RNA-蛋白相互作用的技術手段)結合RNA-seq、ChIP等一系列體內體外實驗對視網膜母細胞瘤新的作用機制進行了深入研究。研究發現腫瘤

    染色質免疫共沉淀研究

    真核生物的基因組DNA以染色質的形式存在,研究蛋白質與DNA在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。與傳統的EMSA技術相比,染色質免疫沉淀技術(ChIP)能真實完整地反映結合在DNA序列上的調控蛋白,是目前研究體內DNA與蛋白質相互作用的最佳方法。染色質免疫沉淀技術(chro

    轉錄因子Sp9參與神經紋狀體蒼白球發育過程

      研究人員發現鋅指轉錄因子——Sp9,在LGE祖細胞中廣泛表達,對維持有絲分裂期后的紋狀體蒼白球MSNs至關重要,為我們理解神經元發育過程提供了新的證據。   研究背景   紋狀體是基地神經節的重要組成部分,是一類中型多棘神經元(MSNs)。MSNs的兩個重要的基地神經節亞型分別是紋狀體黑質(

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      研究人員發現鋅指轉錄因子——Sp9,在LGE祖細胞中廣泛表達,對維持有絲分裂期后的紋狀體蒼白球MSNs至關重要,為我們理解神經元發育過程提供了新的證據。   研究背景   紋狀體是基地神經節的重要組成部分,是一類中型多棘神經元(MSNs)。MSNs的兩個重要的基地神經節亞型分別是紋狀體黑質

    轉錄因子Sp9參與神經紋狀體蒼白球發育過程

      轉錄因子Sp9參與神經紋狀體蒼白球發育過程   研究人員發現鋅指轉錄因子——Sp9,在LGE祖細胞中廣泛表達,對維持有絲分裂期后的紋狀體蒼白球MSNs至關重要,為我們理解神經元發育過程提供了新的證據。   研究背景   紋狀體是基地神經節的重要組成部分,是一類中型多棘神經元(MSNs)。

    轉錄因子Sp9參與神經紋狀體蒼白球發育過程(二)

             對Sp9LacZ突變體中β-gal+和β-gal+/Foxp1+細胞數目統計,發現數量顯著減少。由于Sp9主要在紋狀體蒼白球細胞中表達。所以,Sp9的缺失影響了紋狀體蒼白球MSNs的產生。 &

    簡化ChIP分析的新方法

      最近,美國普渡大學的研究人員開發出一種方法,稱為ZipChip,可大大降低ChIP分析的時間和成本,同時還能提高靈敏度。  染色質免疫沉淀(ChIP)研究,對于染色質相關蛋白和組蛋白修飾在基因組中的定位,提供了深入的見解。然而,標準的ChIP方法耗時、昂貴、費力,由于涉及大量的步驟,易受實驗誤差

    交聯染色質免疫共沉淀(X-ChIP)實驗設計

    ChIP是一種強大的確定蛋白或者組蛋白修飾在基因組上定位的實驗方法。染色質被分離出來后采用抗體與抗原的結合來判定目的蛋白是否結合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白結合位點在全基因組范圍的分布(微陣列或DNA序列)。這種方法具有空間性與時效性。該實驗設計為如何在細胞中進行ChIP實驗提供了詳細的步驟

    云序生物為你解密ATAC-seq研究方案

      ATAC-seq最近幾年是比較火的一種測序技術。那ATAC-seq技術到底什么呢?ATAC-seq的全稱是Assay for Transposase Accessible Chromatin using sequencing, 運用測序手段研究轉座酶可接近的染色質的一種技術。該技術通過轉座酶對某

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    RIP 技術--研究腫瘤發生和轉移中microRNA失調的有力工具

      microRNAs(miRNA)是一種內源性非編碼小分子RNA,一般具有18到25個核苷酸,其序列在進化上高度保守,通過靶向特定mRNA來調節基因的表達。   miRNA是越來越受關注的轉錄后調控網絡(post-transcriptional control)中重要的調控因子。首先,miRNA

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    RIP 技術——研究腫瘤發生和轉移中microRNA失調的有力工具 二

    但是miRNA具有成百上千個靶標,所以要完全理解一個miRNA和靶標的特異性反應與腫瘤發生之間的聯系,是一項非常具有挑戰性的工作,尤其是在癌癥研究中鑒別出miRNA的準確靶點仍然是一大難題。現已知道miRNA的調節功能是通過結合不同的蛋白質或RNA來實現的,因此研究miRNA與蛋白的結合情況對于揭示

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