核酸親和層析法純化蛋白質實驗2
核酸親和層析實驗材料樣品蛋白質試劑、試劑盒平衡緩沖液（Tris-HClKClEDTA）非特異 DNA實驗步驟在上樣品液到核酸親和柱之前，建議首先采用其他的純化方法，如硫酸銨沉淀、離子交換或凝膠過濾層析等富集目的蛋白。這樣可以除去絕大多數的污染物，并減少非特異結合。親和層析柱一般來講是短而粗的，例如長寬比為 2：1。1. 10 倍柱體積的平衡緩沖液（20 mmol/L，pH 8.0 Tris-HCl，0.15 mol/L KCl，1 mol/L EDTA）平衡柱；2. 調整樣品液到相似的離子濃度（即 0.15 mol/L KCl）；3. 加非特異 DNA 到樣品液內，每 ug 純蛋白質加 100 ng。混勻后在冰上孵育 10 min。非特異 DNA 長度通常是 1 kb 左右，可以是 poly（dI-dC）或 poly（dA-dT），也可以是超聲破碎的大腸桿菌、牛胸腺或鮭魚精 DNA。為了除去孵育后可能形成的復合物，需 10 00......閱讀全文
核酸親和層析法純化蛋白質實驗2
核酸親和層析實驗材料樣品蛋白質試劑、試劑盒平衡緩沖液（Tris-HClKClEDTA）非特異 DNA實驗步驟在上樣品液到核酸親和柱之前，建議首先采用其他的純化方法，如硫酸銨沉淀、離子交換或凝膠過濾層析等富集目的蛋白。這樣可以除去絕大多數的污染物，并減少非特異結合。親和層析柱一般來講是短而粗的，例如長
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
步驟一 偶聯寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步驟二 核酸親和層析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通過它們本身的堿基實現的。從理論上講，該方法也許干擾最佳結合序列的接近路徑，但是這樣一個簡單的方法一直被廣泛地成功應用。偶聯效率的定量檢測可經 A260 值測定評估，或者更精確地從偶聯介質上水解核酸和進行磷酸鹽測定。實
核酸親和層析法純化蛋白質實驗1
核酸親和柱的應用極大地促進了核酸結合調節蛋白特性的研究，這些蛋白質涉及基因表達、染色體修復和復制、基因重組等的調控。核酸結合蛋白可以結合單鏈 DNA、雙鏈 DNA 或 RNA。DNA 結合蛋白結合 DNA 可以是序列特異的，也可以是非特異的。此外，含有特異寡核苷酸的親和樹脂能用于某些酶的分離，這些酶
蛋白質純化親和層析法
若表達蛋白質上含有一段六個His 的片段，而親和吸附膠上接有鎳離子，此蛋白質會特異性地結合到吸著膠體；洗去雜質后可imidazole 洗脫目標蛋白質。（Pharmacia 操作手冊， Affinity Chromatography）。儀器設備：親和層析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Pol
凝集素親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 用于親和層析的凝集素應根據它們結合的特異性和緊密度加以選擇。例如，刀豆素 A（Con A）與糖蛋白含有的葡萄糖或甘露糖結合，而麥芽凝集素只與具 N-乙酰葡糖胺的蛋白質結合。胞膜糖蛋白常與麥芽凝集素結合，而可溶性糖蛋白卻通常用 Con A 或扁豆凝集素親和柱純化。由于在許多情
凝集素親和層析法純化蛋白質實驗
凝集素是能可逆性結合碳水化合物的蛋白質。因為絕大多數凝集素至少每個分子有兩個碳水化合物結合部位，所以它們可以沉淀糖蛋白和凝集細胞。凝集素也就可以用作糖蛋白的親和配基，具有單糖的糖蛋白可用溫和的蛋白質冼脫條件分離。雖然凝集素親和層折沒有很高的選擇性，但是無疑它已成為蛋白質純化的一種常用方法。它通常作為
凝集素親和層析法純化蛋白質實驗
刀豆素 A 親和柱純化蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用于親和層析的凝集素應根據它們結合的特異性和緊密度加以選擇。例如，刀豆素 A（Con A）與糖蛋白含有的葡萄糖
固相化金屬親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理固相化金屬親和層析的原理是利用暴露的蛋白質殘基和介質上的金屬離子之間的相互作用進行純化。作為電子供體的表面氨基酸，特別是甘氨酸，與金屬離子螯合時，在金屬親和柱內含這些氨基酸殘基的蛋白質就受到阻滯。由于電子供體一定是未質子化的，至少部分是如此以便螯合金屬離子，所以越堿性的溶液蛋白質與金屬親
固相化金屬親和層析法純化蛋白質實驗
固相化金屬親和層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 固相化金屬親和層析的原理是利用暴露的蛋白質殘基和介質上的金屬離子之間的相互作用進行純化。作為電子供體的表面氨基酸，特別是甘
固相化金屬親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 固相化金屬親和層析的原理是利用暴露的蛋白質殘基和介質上的金屬離子之間的相互作用進行純化。作為電子供體的表面氨基酸，特別是甘氨酸，與金屬離子螯合時，在金屬親和柱內含這些氨基酸殘基的蛋白質就受到阻滯。由于電子供體一定是未質子化的，至少部分是如此以便螯合金屬離子，所以越堿性的溶液蛋白質與金屬
親和層析法（aflinity－chromatography）純化蛋白質
若表現蛋白質上含有一段六個His 的片段，而親和吸著劑膠體上接有鎳離子，此蛋白質會專一性地結合到吸著膠體；洗去雜質后可用imidazole 溶離純質蛋白質（Pharmacia 操作手冊， Affinity Chromatography）。一、儀器設備：1.親和層析管柱 （Bio-Rad 731-15
親和層析法(affinity－chromatography)純化胰蛋白酶2
本實驗采用豬胰蛋白酶的天然抑制劑—雞卵類粘蛋白作為配基．從豬胰臟的粗提液中分離純化胰蛋白酶。雞卵類粘蛋白是一種專一性很強的胰蛋白酶的抑制劑，對豬和牛的膠蛋白酶有很強的抑制作用。而對胰凝乳蛋白酶無抑制作用。在pH7.6~8.0的范圍內，豬或牛胰蛋白酶能牢固地吸附在雞卵類粘蛋白上，在 PH2.5
序列特異性DNA結合蛋白親和層析純化實驗_DNA親和層析法
實驗材料制備性的DNA親和層析樹脂試劑、試劑盒緩沖液Z或其他柱緩沖液（如緩沖液Ze或TM)配制時含不同的KCl濃度（從緩沖液 Z 0.1 mol L KCl 至緩沖液 Z 1 mol L KCl對緩沖液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分純化的蛋白質組分非特異性的競爭DNA柱再生緩沖液柱儲存緩
抗體的親和層析法純化技術
實驗概要本實驗介紹了抗體親和層析法純化的操作流程。實驗原理親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中最有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，
抗體的親和層析法純化技術
實驗概要本實驗介紹了抗體親和層析法純化的操作流程。實驗原理親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中最有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理 核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料 待純化樣本試劑、試劑盒 醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟 實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）4
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料待純化樣本試劑、試劑盒醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）408.1
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
疏水相互作用層析是以介質疏水基團和蛋白質疏水區域間的親和作用為基礎的。疏水力是浸在一種極性液體（如水）中的非極性物質的排斥力。胞膜蛋白都具有一個明顯的疏水區域以錨定在膜上。可溶性蛋白質在外表面上可能存在疏水小區，它促進蛋白復合物的形成，也可能是疏水配基結合部位或活性部位。這些暴露的疏水區對疏水層析純
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 在疏水層析的主要支持介質上含有大小不等的疏水側鏈，烷基或芳香基，可是絕大多數情況起作用的是苯基或辛基。當碳氫鏈長度增加，即變得更疏水時，疏水強的少量蛋白質被吸附。這時疏水相互作用太強，需用極端方法洗脫，可能會導致蛋白質變性。苯基瓊脂糖比辛基瓊脂糖疏水性低，是疏水純化中效果不錯的常用介質
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
疏水作用層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在疏水層析的主要支持介質上含有大小不等的疏水側鏈，烷基或芳香基，可是絕大多數情況起作用的是苯基或辛基。當碳氫鏈長度增加，即變得更
反義親和層析法純化及去除核蛋白復合物實驗
實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒NaCl 洗液Laemmli 上樣緩沖液ATP磷酸肌酸無菌蒸餾水尿素緩沖液MD 0.1MD 0.6KCl 洗液鏈親和素瓊脂糖凝膠封閉緩沖液NP-40儀器、耗材鏈親和素瓊脂糖凝膠Dounce 玻璃勻漿器微量透析杯透析袋實驗步驟一、材料與設備1. AAS 法純化 RNP
反義親和層析法純化及去除核蛋白復合物實驗
實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 NaCl 洗液Laemmli 上樣緩沖液ATP磷酸肌酸無菌蒸餾水尿素緩沖液MD 0.1MD 0.6KCl 洗液鏈親和素瓊脂糖凝膠封閉緩沖液NP-40儀器、耗材 鏈親和素瓊脂糖凝膠Dounce 玻璃勻漿器微量透析杯透析袋實驗步驟 一、材料與設備1. AAS 法純化
反義親和層析法純化及去除核蛋白復合物實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 HeLa 細胞 試劑、試劑盒 NaCl 洗液 Laemmli 上樣緩沖液 ATP
親和層析法(affinity－chromatography)純化多克隆抗體
【實驗原理】如圖所示，親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中最有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。 雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，但如果一旦需要，蛋白A親和層析
蛋白質的表達、分離、純化實驗——層析法
蛋白質表達、分離、純化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理；（2）供作結構與功能的研究；（3）作為催化劑、營養劑等。實驗方法原理攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共
染料配基層析法純化蛋白質實驗
染料配基法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 選擇純化特異蛋白質的適宜染料一般是通過反復試驗比較后決定。Cibacron Blue F3GA，作為該領域的先驅染料與煙酰胺腺嘌
蛋白質的純化實驗——膠體過濾法
不同大小的蛋白質分子進入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應用的蛋白質partition色析法 。實驗材料Sephacryl S-300膠體試劑、試劑盒緩沖液buffer A-150儀器、耗材色析管柱鐵夾試管鐵架水平儀收集器濃縮用離心機?濃縮用離心管實驗步驟一、儀器設備色析管柱 （Pha
核酸分離純化實驗技術指南
?核酸分離純化實驗技術指南：? ? ? 總RNA提取常見問題分析? ? ? RNA降解? ? ? 1. 新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如? 果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。?? ? ? 2. 新鮮組織：某些富含
親和層析－－抗體純化
蛋白 A（Protein A）瓊脂糖微球蛋白 A（Protein A）是金黃色葡萄球菌的細胞壁成分。它由一條多肽鏈組成，其中包含五個抗體結合結構域。這些高親和力結合域和免疫球蛋白 G（IgG）的 Fc 區域特異性結合。其他類型如 IgA 和 IgM 可能可以通過和 抗體 Fab 片段相互作用與蛋白