SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量(垂直...1
目的:1.學習SDS—PAGE測定蛋白質分子量的基本原理。2.掌握垂直板型電泳的基本操作技術。二、原理:蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時,它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。1967年,Shapiro等人發現,如果在聚丙烯酰胺凝膠系統中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(sodium dodecyl sulfate,簡稱SDS),則蛋白質分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量,而與所帶電荷和形狀無關。在一定條件下,蛋白質的分子量與電泳遷移率間的關系,可用下式表示:因此,測定某個蛋白質的分子量,只需比較它和一系列已知分子量的蛋白質在SDS-凝膠電泳時的遷移率就可以了。后來,Weber等人基本按Shapiro的方法對約40種蛋白質進行了研究,進一步證實了這個方法地可行性(見圖16-1)。用這種方法測定蛋白質的分子量,簡便、快速,只需要廉價的設備和微克量的蛋白質樣品;所得結果,在分子量為15,000—200,000的范......閱讀全文
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量(垂直...-1
目的:1.學習SDS—PAGE測定蛋白質分子量的基本原理。2.掌握垂直板型電泳的基本操作技術。二、原理:蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時,它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。1967年,Shapiro等人發現,如果在聚丙烯酰胺凝膠系統中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(sodium
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量(垂直...-2
三、器材與試劑: 1.器材: ①夾心式垂直板電泳槽,凝膠模(135×100×1.5mm)(北京六一儀器廠) ②直流穩壓電源(電壓300—600V,電流50—100mA) ③吸量管(1,5,10 ml) ④燒杯(25,50,100 ml) ⑤ 細長頭的滴管 ⑥1ml注射器及6號長針頭 ⑦微量注射器(1
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量(垂直...-3
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量(垂直板型電泳)-3⑤1%TEMED:取TEMED1ml,加重蒸水至100ml,置棕色瓶內4℃貯存。⑥10%過硫酸銨(AP):稱AP1g,加重蒸水至 100ml,此液應每周新配,置棕色瓶內,4℃貯存。⑦電極緩沖液(0.1%SDS,0.1mol·L-1 p
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量(垂直...-4
2、將長、短玻璃板分別插到 形硅橡框的凹形槽中。注意勿用手接觸灌膠面的玻璃。3、將已插好玻璃板的凝膠模平放在上貯槽上,短玻璃板應面對上貯槽。4、將下貯槽的銷孔對準已裝好螺絲銷釘的上貯槽,雙手以對角線的方式旋緊螺絲帽。5、豎直電泳槽,在長玻璃板下端與硅膠模框交界的縫隙內加入已融化的1%瓊脂(糖)。其目
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質分子量
一、原理用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離鑒定蛋白質(protein),主要依賴于電荷效應和分子篩效應。再與標準樣品對照即可確定各區帶的成分。要利用凝膠電泳測定某樣品的蛋白質分子量就必須去掉其電荷效應,使樣品的蛋白質分子的遷移率完全取決于分子量。如在電泳體系中加入一定濃度的十二烷基硫酸鈉(Sodiumdod
常用的一些測定蛋白質分子量的幾種方法介紹
1.凝膠過濾法 凝膠過濾法分離蛋白質的原理是根據蛋白質分子量的大小。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍,在此范圍內,分子量的對數和洗脫體積之間成線性關系。因此,用幾種已知分子量的蛋白質為標準,進行凝膠層析,以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數作圖,繪制出標準洗脫曲線。未知
測定蛋白質分子量的常用方法
知道蛋白質分子量、氨基酸組成計算器http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/一般的方法:SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量[原理]十二烷基硫酸鈉(Sodium dodecyl sulfate, 簡稱SDS)-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量,
蛋白質SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳-1
【實驗原理】蛋白質在高于或低于其等電點的溶液中為帶電的顆粒,在電場中能向正極或負極移動。當溶液pH值大于蛋白質等電點時,蛋白質帶負電荷,在電場中向正極移動;反之則向負極移動,這種帶電的顆粒在電場中泳動的現象稱為電泳(electrophoresis)。不同的蛋白質由于等電點不同,在電場中的泳動速率也不
蛋白質分子量的測定(SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法)
一、原理用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離鑒定蛋白質(protein),主要依賴于電荷效應和分子篩效應。再與標準樣品對照即可確定各區帶的成分。要利用凝膠電泳測定某樣品的蛋白質分子量就必須去掉其電荷效應,使樣品的蛋白質分子的遷移率完全取決于分子量。如在電泳體系中加入一定濃度的十二烷基硫酸鈉(Sodiumdod
蛋白質分子量的測定——SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法
目的要求學會SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法原理。掌握用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質分子量的操作技術。實驗原理:SDS是十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate)的簡稱,它是一種陰離子表面活性劑,加入到電泳系統中能使蛋白質的氫鍵、疏水鍵打開,并結合到蛋白質分子上(在一定