蛋白質SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳1
【實驗原理】蛋白質在高于或低于其等電點的溶液中為帶電的顆粒,在電場中能向正極或負極移動。當溶液pH值大于蛋白質等電點時,蛋白質帶負電荷,在電場中向正極移動;反之則向負極移動,這種帶電的顆粒在電場中泳動的現象稱為電泳(electrophoresis)。不同的蛋白質由于等電點不同,在電場中的泳動速率也不同,因此應用電泳技術很容易實現對蛋白樣本的分離與分析。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)是目前用于測定蛋白質亞基分子量的常規方法。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和交聯劑N,N'-甲叉雙丙烯酰胺在引發劑(過硫酸銨)和增速劑(N,N,N',N'-四甲基乙二胺)的氧化-還原作用下聚合而成的。凝膠的有效孔徑與它的總濃度T%成反變關系,在高濃度時,凝膠孔徑小,可以篩分分子量小的多......閱讀全文
蛋白質SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳-1
【實驗原理】蛋白質在高于或低于其等電點的溶液中為帶電的顆粒,在電場中能向正極或負極移動。當溶液pH值大于蛋白質等電點時,蛋白質帶負電荷,在電場中向正極移動;反之則向負極移動,這種帶電的顆粒在電場中泳動的現象稱為電泳(electrophoresis)。不同的蛋白質由于等電點不同,在電場中的泳動速率也不
蛋白質SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳-2
(4)10% 過硫酸銨,5ml(0.5g過硫酸銨, 加5ml蒸餾水, 新鮮配置),-20℃保存一個月左右。(5)10% (w/v)SDS,10g SDS加蒸餾水100ml, 室溫保存。(6)10% TEMED 0.1ml TEMED , 加0.9 ml蒸餾水。(7) 2×上樣緩沖液(10ml):0.
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量(垂直...-1
目的:1.學習SDS—PAGE測定蛋白質分子量的基本原理。2.掌握垂直板型電泳的基本操作技術。二、原理:蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時,它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。1967年,Shapiro等人發現,如果在聚丙烯酰胺凝膠系統中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(sodium
蛋白質的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗
實驗方法原理 蛋白質在十二烷基硫酸鈉(SDS)和巰基乙醇的作用下,分子中的二硫鍵還原,氫鍵等打開,形成按1.4 g SDS/1 g蛋白質比例的SDS-蛋白質多肽復合物,該復合物帶負電,故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移,且主要由于凝膠的分子篩作用,遷移速率與蛋白質的分子量大小有關,因此可以
蛋白質的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗
SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳技術首先在1967年由Shapiro建立,1969年由weber和Osborn進一步完善。主要用于(1)蛋白質的分離(2)蛋白質的純化。實驗方法原理蛋白質在十二烷基硫酸鈉(SDS)和巰基乙醇的作用下,分子中的二硫鍵還原,氫鍵等打開,形成按1.4 g SDS/1 g蛋白質比例的
蛋白質的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗
[原理]蛋白質在十二烷基硫酸鈉(SDS)和巰基乙醇的作用下,分子中的二硫鍵還原,氫鍵等打開,形成按1.4gSDS/1g蛋白質比例的SDS-蛋白質多肽復合物,該復合物帶負電,故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移,且主要由于凝膠的分子篩作用,遷移速率與蛋白質的分子量大小有關,因此可以濃縮和分離蛋白質多肽
蛋白質的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗
SDS-PSGE ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質在十二烷基硫酸鈉(SDS)和巰基乙醇的作用下,分子中的二硫鍵還原,氫鍵等打開,形成按1.4 g SDS/1 g蛋白
專題蛋白質技術的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗
原理]蛋白質在十二烷基硫酸鈉(SDS)和巰基乙醇的作用下,分子中的二硫鍵還原,氫鍵等打開,形成按1.4gSDS/1g蛋白質比例的SDS-蛋白質多肽復合物,該復合物帶負電,故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移,且主要由于凝膠的分子篩作用,遷移速率與蛋白質的分子量大小有關,因此可以濃縮和分離蛋白質多肽。
蛋白質SDS-]聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理
兩種方法原理不同,有差異是正常的。如果差距較大,要仔細分析。一般凝膠層析是非變性的,sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳是變性的,二硫鍵也被還原,所以是亞基(肽鏈)分子量。凝膠層析與分子形狀有關,一般marker都是球狀蛋白,所以測球狀蛋白分子量較準。sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳與分子形狀無關。有些蛋白性質特殊
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質分子量
一、原理用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離鑒定蛋白質(protein),主要依賴于電荷效應和分子篩效應。再與標準樣品對照即可確定各區帶的成分。要利用凝膠電泳測定某樣品的蛋白質分子量就必須去掉其電荷效應,使樣品的蛋白質分子的遷移率完全取決于分子量。如在電泳體系中加入一定濃度的十二烷基硫酸鈉(Sodiumdod