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菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。具體方法：1、PCR混合物的制備Taq buffer（10×） 20 uldNTP（2.5 mM） 5 ulPrimer Forward（50 mM） 10 ulPrimer Reverse（50 mM） 10 ulddH2O 147 ulTaq（2U/ul） 8 ultotal 200 ul將上述溶液混勻，10 ul每管分裝于200 ul PCR管中。2、常溫下隨機挑選轉化板上的轉化子，用滅菌的牙簽或槍頭挑取少量菌體，在LB瓊脂糖平板上輕點，做一拷貝；然后將沾有菌體的牙簽或槍頭置于相應的裝有PCR混合物的PCR管中洗滌數下（管子做好記號，如平板上點的是1＃，則管......閱讀全文
菌落PCR標簽： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。
實驗概要構建并篩選含有目的基因的候選陽性重組克隆。有助于理解目的基因與克隆載體的連接、轉化和篩選原理及流程。實驗原理1. 連接反應：利用經過限制性內切酶消化的線形載體與目的基因兩端暴露出的平末端或相同的粘性末端，使用T4 DNA 聚合酶將二者連接起來形成重組載體。2. 轉化過程：感受態細胞通過溫度敏
利用PCR分析酵母菌落 實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵
利用PCR分析酵母菌落主要用于確定酵母中是否攜帶目的DNA序列。實驗方法原理用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定酵母中是否攜帶目的 DNA 序列。 實驗材料Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重
8. TA質粒轉化菌落的驗證 與表達載體的驗證不同，轉化TA質粒時不用雙酶切驗證。只需用目的基因引物和TA載體引物PCR驗證即可。TA載體引物PCR片段比插入片段大約長150bp。 目的基因退火溫度與之前膠回收時溫度相同，TA退火溫度60C即可，但可在55～70之間變動，不會
菌落PCR可用于：（1）重組體的篩選；（2）重組體DNA測序分析。實驗方法原理直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料菌落樣品試劑、試劑盒dNTPPCR混合液儀器、耗材PCR儀實驗步驟1. PCR混合液的
實驗原理 PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法，它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs；而體外PCR反應同樣需要類似的成分，有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列，實現對特
實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。
實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定 YAC 中是否攜帶目的 DNA 序列。實驗材料 Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重組子的酵母菌株試劑、試劑盒 PCR 緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材
實驗方法原理 直接挑取菌落進行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質粒，成為PCR體系的模板，然后進行鏈式擴增。實驗材料 基因樣品試劑、試劑盒 dNTPPCR混合液儀器、耗材 PCR儀實驗步驟 1. PCR混合液的制備（1）Taq buffer（10×） 180 ul（
此方法可能很多師兄師姐們都在用，只是當時的確沒有找到相關的詳細說明，學弟再次把自己摸索出來的一點心得寫出來，高手就多多指正，沒做過的就相互學習下，見笑）由于課題組所需，我需要構建數量可觀的真核表達載體和融合載體起初我也查到相關菌落PCR 的文獻 ，和導師商量，導師一口回絕了他的理由和我所搜
大家是否在實驗中經常遇到載體構建的各種問題，浪費大量的時間和精力，各種各樣的問題讓人頭疼，海創科業小編作為科研老司機特意為各位科研君整理了載體構建實驗常見問題及解決方法，希望能夠幫助到大家。1. PCR載體構建大部分時候都要通過PCR的方法獲取目的片段，擴增
實驗材料菌株BY4741質粒PDB118試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材YPD 平板YPD 液體培養基血球計數板SC-his平板實驗步驟YPD 平板 第 1 天將菌株 7-3 在 YPD 平板上劃單克隆，30°C 下培養兩天。第 3 天挑取單克隆，在 5 mlYPD 液體培養基中培養，30°C 過
實驗方法原理 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。使用載體上的通用引物，進行重
現象可能原因解決方案 轉化后無菌落生長 感受態細胞已經失效用pUC18質粒進行轉化，確認細胞的感受態效率。1ng pUC18質粒至少應得到1000個以上的轉化子。如有問題，重新制備感受態細胞。 平板所用抗性不對pBS-T載體為amp抗性，工作濃度 100 ug/ml 連接中使用了不恰當的vector
已轉化的重組載體的細菌細胞或 λ 噬菌體顆粒可通過直接從培養皿上挑取菌落或噬菌斑獲得，然后直接加入到 PCR 混合液中，這時 PCR 混合液中含有除了未加熱穩定 DNA 聚合酶外的所有試劑，其中引物與所要鑒定的已克隆 DNA 片段的側翼序列互補。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方
實驗概要掌握快速細胞破碎法測定大小不等的眾多的質粒DNA；和菌落PCR快速鑒定克隆。實驗原理在這個實驗方法中，只需配制一種細胞緩沖液（它可以在室溫下保存，長期使用）。利用破碎細胞緩沖液中的陰離子去污劑---SDS在37℃溶解膜蛋白，使細胞破裂，并解聚核蛋白，SDS還能與蛋白質結合形成復合物，使得蛋白
試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠 菌落裂解緩沖液 蒸餾水 甲醛 甲酰胺預雜交 雜交液 Ho
試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲醛甲酰胺預雜交 雜交液HotPrime cDNA Labeling Kit礦物油MOPS 緩沖液MOPS乙酸鈉EDTAPCR 緩沖液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鮭魚精 DNATaq DNA
為了確認所選擇 cDNA 確實是差異表達的，建議使用 Northern 印跡分析，而不要用其他的確認技術，比如反向 Northern 雜交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲
[器材和試劑] ●MicroAmp反應管（PerkinElmer） ●洗脫緩沖液（20mmol/LTris—ClpH8．5，2mmol/LEDTA，1％TritonX—100） ●GeneAmp9600PCR儀（PerkinElmer） ●正向引物：5’—AGAGATTA
問：很郁悶，zui近在做電轉畢赤酵母，但是轉化完了沒有合適的篩選方法，如果提基因組的話費時費錢，而且由于我這個電轉的幾率十分低，也就有1%-10%，所以想用菌落PCR方法篩選，但酵母菌破壁很困難，如果處理不好的話基因組釋放不出來，就沒有陽性結果了。查了一些資料說用反復凍融法，是不是直接挑單菌落就行了
實驗方法原理 已轉化的重組載體的細菌細胞或 λ 噬菌體顆粒可通過直接從培養皿上挑取菌落或噬菌斑獲得，然后直接加入到 PCR 混合液中，這時 PCR 混合液中含有除了未加熱穩定 D
實驗方法原理 已轉化的重組載體的細菌細胞或 λ 噬菌體顆粒可通過直接從培養皿上挑取菌落或噬菌斑獲得，然后直接加入到 PCR 混合液中，這時 PCR 混合液中含有除了未加熱穩定 DNA 聚合酶外的所有試劑，其中引物與所要鑒定的已克隆 DNA 片段的側翼序列互補。實驗材料 熱穩定 DNA 聚合酶正義和反
實驗概要本實驗介紹了一種構建植物表達載體的方法。實驗步驟1. 植物正義表達載體的構建 1) 用SmaI和SacI雙酶切pTriplEx2-GhMT3a和植物表達載體pBI121： 2) 進行瓊脂糖凝膠電泳，回收GhMT3a片段和
實驗方法原理TA克隆 系統由Invitrogen公司（San Diego，CA）發展而來的商業性試劑盒，它用于PCR 產物的克隆 和測序。其原理是利用Taq酶能夠在PCR 產物的3'末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3'T突出端的載體，在連接酶作用下，可以快速地、一步到位
1．質粒快速鑒定 試劑：Protoplasting buffer:30mM Tris-HCl, pH8.0 &
實驗方法原理 dNTP ，PCR 緩沖液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨芐液體培養基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 產物微量滴定板，尼龍膜，紫外交聯裝置，96 孔
C)Nanopore sequencing (納米孔測序方法) 采用完全不同的方法來鑒別DNA分子上的單個堿基，被稱為納米測序。以4種堿基間的物理性質差別為基礎，將這種差別轉變成為可以檢測的信號，從而進行測序。此方法測序的是單個DNA分子，并不需要DNA的擴增。此方法目前還處于理論階
2.蛋白質組學技術與儀器 (1)以高準確度質譜技術為核心的規模化蛋白質鑒定技術與儀器 為了適應蛋白質組研究的需要，從高分辨率、高靈敏度的蛋白質分離與鑒定的線性離子阱-質譜儀(LTQ)到2005年剛推出的LTQ-Orbitrap質譜儀，以及具有小于2ppm的準確度的傅里葉變換離子回