一、檢測原理細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性也增加,但其程度介于正常細胞和壞死細胞之間。利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,利用流式細胞儀測量細胞懸液中熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞和凋亡細胞。流式細胞儀檢測有下列特點1、檢測的細胞數量大,因此其反映群體細胞的凋亡狀態比較準確2、可用許多相關分析3、結合被測細胞DNA含量分析,可確定凋亡的細胞所處的細胞周期。但該法周樣也具有標本制作復雜。非原位檢測,不易與變性細胞鑒別等因素的限制。二、檢測方法1、檢測形態學及細胞膜完整性的Hoechs-PI雙染色法細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性也增加,但其程度介于正常細胞和壞死細胞之間,利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,采用流式細胞儀測量細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞和凋亡細胞。常用Hoechs-PI染色法,正常細胞對染料有拒染性,熒光著色很淺,凋亡細胞主要攝取hoechs-PI染料,呈現強藍色熒光,而壞死細胞主......閱讀全文
◆ TUNEL 與 ELISA 檢測凋亡的方法比較TUNEL法 細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3
二、細胞凋亡的細胞化學測定細胞凋亡的細胞化學測定包括細胞表面(細胞膜)的結構和通透性改變的測定和細胞核DNA改變的測定。根據應用的范圍,又可分為細胞群休和單個細胞測定兩種,以下僅介紹其中幾種較為常用的方法。碘化丙啶(propidium iodide,PI)檢測早期死亡細胞膜通透性狀態的不同是區分細胞
細胞凋亡的圖片5細胞凋亡的圖片6細胞凋亡的研究方法一、定性和定量研究只定性的研究方法:常規瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉瓊脂糖凝膠電泳、形態學觀察(普通光學顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡)進行定量或半定量的研究方法:各種流式細胞儀方法、原位末端標記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。二、區分凋亡和壞死可將二
細胞凋亡(Apoptosis),又稱細胞程序性死亡(PCD: Programmed Cell Death),是指細胞在一定的生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結束其生命的過程。它是一個主動的,高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過程。細胞凋亡概念提出至今還不到30年的時間,但由于它在保證多細胞
細胞凋亡(Apoptosis),又稱細胞程序性死亡(PCD: Programmed Cell Death),是指細胞在一定的生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結束其生命的過程。它是一個主動的,高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過程。細胞凋亡概念提出至今還不到30年的時間,但由于它在保證多
細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式,根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別,可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多,下面介紹幾種常用的測定方法。一、細胞凋亡的形態學檢測 根據凋亡細胞固有的形態特征,人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。 1 光學顯微鏡和倒
不同細胞不同狀態是有不同死法的,具體是細胞凋亡、壞死、還是程序性壞死,需要進一步排查分析來確定。而細胞凋亡是個復雜的過程,針對凋亡時期不同,檢測的方法有所不同。那如何去確定哪條途徑被觸發,在哪個步驟被阻斷,以及抑制劑是否能夠抑制呢?下面介紹幾種常用的測定方法。 一:細胞凋亡的形態學檢測 發生
細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀 檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。下面是一幅凋亡過程圖。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體
細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體,線粒體的功能發生衰退;后是cas
細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體,線粒體的功能發生衰
細胞凋亡的檢測方法眾多,流式細胞儀檢測凋亡,是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數。因此,具有其它方法無可比擬的優越性。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。在凋亡誘導劑的作用下,首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體,線粒體的功能發生衰退;后是cas
活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進
一、細胞凋亡的形態學檢測1、光學顯微鏡和倒置顯微鏡(1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。(2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋
作者:楊連君,司曉輝,王文亮,王文勇,趙一嶺,方正清[摘 要] 目的:探討簡便易行的在光鏡下通過形態學觀察檢測細胞凋亡的方法,并對其進行比較。方法:首先用6%的乙醇作用6 h誘導人肝細胞癌細胞系HCC9204細胞凋亡,然后進行未固定細胞的臺盼藍染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)雙染色,
細胞凋亡(apoptosis)又稱細胞凋謝或稱程序性細胞死亡(Programmed cell death,PCD),是有別于細胞壞死而受基因控制的一種主動性細胞自殺過程。對細胞凋亡的研究已成為當今生物學領域的熱點之一。開展對細胞凋亡的研究,首先要解決的是方法學問題。根據凋亡細胞的生化特征檢測組織或培
◆ 細胞壞死與細胞凋亡細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式,根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別,可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多,下面介紹幾種常用的測定方法。 一、細胞凋亡的形態學檢測 根據凋亡細胞固有的形態特征,人們已經設計了許多不同的細胞
細胞凋亡的定性檢測依賴于形態學觀察及DNA電泳,其定量檢測則需借助于流式細胞檢查。使用碘化丙啶(PI)染色檢測DNA含量是最早出現的凋亡定量檢測方法[1]。進入90年代,檢測DNA斷裂點的TUNEL(Terminal deoxylnucleotidyl transferase mediated-dU
細胞凋亡的定性檢測依賴于形態學觀察及DNA電泳,其定量檢測則需借助于流式細胞檢查。使用碘化丙啶(PI)染色檢測DNA含量是最早出現的凋亡定量檢測方法[1]。進入90年代,檢測DNA斷裂點的TUNEL(Terminal deoxylnucleotidyl transferase mediated-dU
三、線粒體膜勢能的檢測 線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用,多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡,而線粒體跨膜電位DYmt的下降,被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件,它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體DYmt崩潰,則細胞凋亡不可逆
作者:左錢飛,張海獻,魯鵬飛 摘 要:線粒體是細胞活動的“能源工廠”,在各種致病因素作用下線粒體極易出現各種結構和功能損傷,這在疾病的發展中起著十分重要的影響,文章就線粒體結構和功能損傷及其檢測方法作一綜述。 關鍵詞:線粒體損傷;mtDNA;凋亡 Abstract:Mi
實驗步驟 一、材料 1. 胞質分裂阻滯微核試驗 2. 微核的著絲點檢測 (1)從硬皮病 C R E S T 亞型的患者中取得的血清樣本。 (2) F I T C 標記的兔抗人 I g G 二抗。 (3) 過氧化物酶
實驗步驟一、材料1. 胞質分裂阻滯微核試驗2. 微核的著絲點檢測(1)從硬皮病 C R E S T 亞型的患者中取得的血清樣本。(2) F I T C 標記的兔抗人 I g G 二抗。(3) 過氧化物酶標記的兔抗人 I g G 。(4) 二胺基聯苯溶液(D A B ): I m g /m L 溶于
前言:細胞凋亡是細胞程序性死亡中最具特征性的一種。它在生物發展,體內平衡,甚至在不同的疾病,例如:癌癥,的發病機制都扮演著重要的角色。在過去的幾十年里,科學家們對細胞凋亡進行了廣泛的研究。細胞凋亡的過程中,細胞會有不同的形態變化。同時,細胞膜(plasma membrane),線粒體(mitocho
六、Caspase-3活性的檢測 Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中caspase-3為關鍵的執行分子,它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中,在凋亡的早期階段,它被激活,活化的Caspase-3由兩個
細胞凋亡(apoptosis)的命名主要是根據某些單個細胞死亡時細胞碎裂如花瓣或樹葉散落般的形態學特征。目前對細胞凋亡的認識正不斷得到深化,檢測凋亡細胞的方法也逐漸增多,但形態改變仍是確定細胞凋亡的最可靠的方法。一、光學顯微鏡觀察凋亡細胞的主要特征為核染色質致密深染,形成致密質塊,有時可碎裂。在HE
流式細胞儀是檢測懸浮的單細胞或微粒的信號分析技術,被譽為實驗室的“CT”,可用于細胞凋亡檢測 、細胞分選、單細胞內細胞因子表達分析等。這里簡單介紹下流式細胞儀檢測細胞凋亡的兩種方法。第一部分 流式細胞儀 檢測細胞凋亡:Heochst 33342/PI雙染色法一、基本原理
22流式細胞儀在腫瘤學中的應用 FCM對DNA、RNA含量及細胞周期的分析具有獨到之處。人體正常的體細胞均有較恒定的DNA二倍體含量,細胞癌變過程中伴隨細胞DNA含量的改變,DNA非整倍體細胞是惡性腫瘤的特異性標志。根據DNA分布直方圖,可對細胞周期的分布狀態進行分析,計算出G0/G1比率,S相
細胞凋亡是指為維持內環境穩定, 生物體內細胞在特定的內源或外源信號誘導下,其死亡途徑被激活,并在有關基因的調控下發生的程序性死亡過程。細胞凋亡是程序性死亡過程的一種主要形式,它涉及染色質凝聚和外周化、細胞質減少、核片段化、細胞質致密化、與周圍細胞聯系中斷、內質網與細胞膜融合,最
細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點,一是研究對象是活的細胞,可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等;二是可以人為地嚴格控制研究條件,便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響,有利于單因子分析;三是研究的樣本可以達到比較均一性。
第三種 線粒體膜勢能的檢測 線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用,多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡,而線粒體跨膜電位DYmt的下降,被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件,它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體DYmt崩潰,則細胞凋亡不可逆