Northern blot 是一種通過檢測RNA的表達水平來檢測基因表達的方法,通過northernblot的方法可以檢測到細胞在生長發育特定階段或者脅迫或病理環境下特定基因表達情況。Northern blot 首先通過電泳的方法將不同的RNA分子依據其分子量大小加以區分,然后通過與特定基因互補配對的探針雜交來檢測目的片段。實驗方法Northern blot技術Northern Blot實驗方法原理Northern blot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離,再轉移至尼龍膜等固相膜載體上,用放射性或非放射性標記DNA或RNA特異性探針對固定于固相膜上的mRNA進行雜交,洗膜去除非特異性結合雜交信號,經放射自顯影或現色反應,對雜交信號進行分析。將雜交的mRNA分子在電泳中遷移位置與標準分子量分子進行比較,即可知道細胞中特定的基因轉錄產物的大小;對雜交信號的強弱比較,可以知曉該基因表達mRNA水平的強......閱讀全文
RNA一度被認為僅僅是DNA和蛋白質之間的“過渡”,但越來越多的證據清楚的表明,RNA在生命的進程中扮演的角色遠比我們早前設想的更為重要。RNA 干擾(RNA interference)的發現使得人們對RNA調控基因表達的功能有了全新的認識,更因為可以簡化/替代基因敲除而成為研究基因功能的有力工具,
寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物(RNP,核糖核蛋白顆粒)的方法,無論是對于粗提物還是提純后的樣品,對分析 RNP 的結構域的結構都非常有效。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法原理寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解,并且導致了免疫新策略的產生,免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶,GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
在論壇上看到不停地有人在問RT-PCR的問題,實際上在以前的帖子中各位香主和eeflying(我為什么總是提他們?因為還是很佩服的哦,生怕自己說錯了,被他們指出來哦)都談到了很多,鄙人也充大頭答了一些問題,但是還是有各種問題,由于的基因表達還有點實戰經驗(但也技止此而),所以想些點東西給大家參考,計
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
本文討論的范圍包括RNA酶保護分析,northernblot,原位雜交,半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol,是因為各種書籍和kit說明書上都有,主要說一些原則,而且大部分是失敗和成功的經驗,還有小組討論結果以及各種書里七零八落看的內容,希望對大家有用。 基因
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。 蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾
實驗方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解實驗是分析 RNA 蛋合復合物(RNP,核糖核蛋白顆粒)的方法,無論是對于粗提物還是提純后的樣品,對分析 RNP 的結構域的結構都非
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展,新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上,一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展,新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上,一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
動物總RNA的提取與電泳I.實驗目的與要求A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。II. 實驗原理和背景知識A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物大分子,如mRNA,它攜帶了DNA的全部編碼信息。
近日,MarketsandMarkets咨詢公司發布了全球western blotting市場的分析報告。據MarketsandMarkets預測,全球western blotting的市場規模將從2016年的5.75億美元增長到2021年的7.31億美元,復合年均增長率達4.9%。另一家Futur
一、酸雜交技術檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度,在復雜的物體中,使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性,核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年,目前研究實驗室用得多,臨床實驗室用得較少,除成本高外,關鍵是操作
Northern blot 可用于:(1)檢測不同組織、器官;(2)生物體不同發育階段以及脅迫環境或病理條件下特定基因的表達樣式。如northern blot被大量用于檢測癌細胞中原癌基因表達量的升高及抑癌基因表達量的下降,器官移植過程中由于免疫排斥反應造成某些基因表達量的上升,Northern b
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免疫研究的有較手段,同時在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細胞因子治療監測方面具有重要價值。但是,由于細胞因子
摘要:本文主要是針對Western bloting的原理及操作進行了簡單的闡述,Western印跡法是利用抗原抗體的免疫反應,先將蛋白通過SDS-PAGE電泳分離開來,然后再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉移到固相載體(NC膜)上,然后再加抗體形成抗原抗體復合物,利用發光或顯色原理將結果顯示到膜或底片
mRNA差異顯示技術(differential display,DD)是用于研究基因的差異表達的新方法。該技術自1992年被首次報道后,即以其不可替代的優勢被廣泛應用于生物醫學領域。在應用過程中不斷得到改進,并產生了諸多衍生技術如RPA(RNA finger printing by arbitrar
實驗概要本實驗詳細介紹了顯微注射法建立轉基因小鼠模型的操作流程。實驗原理轉基因小鼠制備的基本原理是將改建后的目的基因(或基因組片段)用顯微注射法注入供體小鼠的受精卵(或著床前胚胎細胞),然后將此受精卵(或著床前胚胎細胞)再植入受體動物的輸卵管(或子宮)中,使其發育成攜帶有外源基因的轉基因動物,通過分
提 要: 目的 建立一種快速鑒定RNA 完整性的方法。方法 在常規瓊脂糖凝膠電泳的基礎上,結合甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳加以改進而成。結果 提取的總RNA 用此方法電泳后可得到28S、18S、5. 8S(5S) 三條清晰的rRNA 條帶。結論 此方法可以達到對RNA 完整性進行快速鑒定的目的。
Northern blot技術 Northern Blot 實驗方法原理 將RNA樣品通
蛋白質免疫印跡(Western Blot )可以:(1)從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質;(2)定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況;(3)用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法底物化學發光ECL法Western印跡法圖解實驗方法原理Western免疫印跡(
隨著體外分子實驗技術的發展,近年來相繼發現了許多具有不同催化功能的 DNA 分子,這些被稱為脫氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反應、連接反應、卟啉環金屬化等許多化學反應,而且還具有 DNA 激酶活性。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法原理隨著體外分子實驗技術的發展,近年
實驗方法原理RNA與互補的 [ 32P ] 標記的探針在溶液中復件后形成的 RNA-RNA 雜合分子對單鏈專一的 RNase 具有抗性。此法可以對 RNA 分子末端進行定位或對含內含子的交界定位。與 Northern blot 相比,它是一種十分有效而且靈敏度很高的并可用于測定 mRNA
蛋白質免疫印跡(Western Blot )可以:(1)從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質;(2)定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況;(3)用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA 相互作用后續分析。實驗方法原理———底物化學發光 ECL 法Western 免疫印跡(Western B
實驗方法原理 隨著體外分子實驗技術的發展,近年來相繼發現了許多具有不同催化功能的 DNA 分子,這些被稱為脫氧核酶的催化型 DNA 分子可以催化切割反應、連接反應、卟啉環金屬化等許多
實驗方法原理熒光,又作“螢光”,是指一種光致發光的冷發光現象。當某種常溫物質經某種波長的入射光(通常是紫外線或X射線)照射,吸收光能后進入激發態,并且立即退激發并發出比入射光的的波長長的出射光(通常波長在可見光波段);而且一旦停止入射光,發光現象也隨之立即消失。具有這種性質的出射光就被稱之為熒光。在