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轉膜 將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如 NC 膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白轉移，所用緩沖液少。 轉移膜的選擇 雜交膜的選擇是決定 Western blot 成敗的重要環節。應根據雜交方案、被轉移蛋白的特性以及分子大小等因素，選擇合適材質、孔徑和規格的雜交膜。最常的轉移膜主要是硝酸纖維素（Nitrocellulose, NC）膜和聚偏二氟乙烯（Polyvinylidene Fluoride, PVDF）膜，此外也有用尼龍膜、DEAE 纖維素膜做蛋白印跡。尼龍膜和 NC 膜的特點相似,主要用于核酸雜交。 硝酸纖維素（NC）膜 NC 膜是蛋白印跡實驗的標準固相支持物，在低離子轉移緩沖液的環境下，大多數帶負電荷的蛋......閱讀全文
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們，實
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們，實
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southe
四、轉膜以下以使用半干轉膜為例。對于轉印90kd以下的蛋白，轉膜液都不用加SDS，如果是蛋白分子量大的話可以加入0.037%的SDS。在電泳結束前20min開始準備轉膜所需的東西。轉一張膜需準備6張的濾紙（長一般為8.1~8.3cm，寬度根據裁的膠大小實際測量，但膠一般會縮水，所以裁8cm就行）和1
實驗概要免疫印跡是利用聚丙烯酰胺凝膠電泳來檢測樣品或提取物中某種特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝膠緊貼著膜放置，在電流的作用下蛋白質從凝膠遷移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纖維素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝膠蛋白質的復制品，然后可以與抗體結合后進行染色。實驗步驟1.
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們，實驗做
實驗原理： WesternBlot印跡方法，又稱為免疫印記，是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離，并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非標記抗體（一抗）與轉印后膜上的靶蛋白進行特異性結合，再與
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
9. 條件的摸索DDD. 用的是Santa Cruz的抗體，也實驗過一抗和二抗肯定能結合，二抗加DAB肯定能顯色。電泳的膠用考馬斯亮藍染色沒問題，但是不知道與Marker對應的條帶是否是我要的（我目的蛋白的分子量分別是55KD、29KD）。半干法2小時轉膜后，麗春紅染色發現大分子量蛋白轉過去的較少。
蛋白質免疫印跡雜交實驗（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單，但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差，導致剛進實驗室的小伙伴們
3.抗體T.做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好，所以沒做預試，怕費時間，用什么樣的稀釋度比較好呢？我用的ELL+plus試劑盒顯色。轉膜過夜，
開始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。 細胞與試劑方面： 1、細胞(單層細胞，鏡檢適合) 2、培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等適合細胞有要求的培養液) 3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1 萬單位） 4、7.5％NaHC03 溶液 5、0.25％胰
一、原理 一個基因表達的最終產物是產生相應的蛋白，因此檢測蛋白是測定基因表達的主要標志。 原理：Western Blotting 是將獲得的蛋白質樣品通過SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳，對不同分子量的蛋白質進行分離；并通過轉移電泳將凝膠上分離到的蛋白質轉印至固相支持
Western轉膜步驟 下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。 I. 所需材料： • Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell
Ecl 顯色原理：魯米諾在免疫測定中既可用作標記物，也可用作過氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和魯米諾，在HRP（辣根過氧化物酶）的作用下，發出熒光來。試驗步驟：1）將兩種顯色底物1：1等體積混合（一般各1ml/membrane）。2）將混合物覆蓋在膜表面，1-2分鐘，搖晃使均勻。3）用
蛋白提取：１． 總蛋白提取（胞膜，胞漿，胞核）： 組織勻漿后,15000g, 4度, 20分鐘后,取上清.Buffer:NP40 750ul, 脫氧膽酸鈉0.5克, SDS 0.1克, 加1*PBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (
Western blot（WB）是檢測蛋白質及蛋白質翻譯后修飾的經典方法，可在簡單或復雜的生物樣品中提供有關靶蛋白的半定量或定量數據。WB 步驟復雜，通常包括：蛋白樣本制備→電泳→轉膜→封閉→孵育一抗→孵育二抗→顯影→分析。WB 任何過程出現 Bug 均可影響結果的重復性與靈敏度，因此必須注意將 W
P. 有什么方法可以提高上樣量？ 解答：可以濃縮樣品；增大上樣體積來增大上樣量。 Q. 我要檢測的目的蛋白是分子量大概為42kd的膜蛋白，膜蛋白提取可不可以不用到超速離心機，有沒有直接用低溫高速離心機就可以的提到膜蛋白的方法，42kd的蛋白分子量算不算大？ 解答：如是需要提取膜蛋白
實驗常見的問題指南根據問題的類型主要分成以下幾類（以下資料權作參考，請勿盲目模仿！）：1. 參考書推薦A. 對初學者看什么資料比較好？解答：《抗體技術實驗指南》和Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，d
TTT.目的蛋白是一種6KD的分泌性蛋白，RT－PCR就顯示細胞中mRNA表達不高，估計將培養上清凍干濃縮后采用Western Blot還可能檢測不出，但如果用western，是否一定要用0.2μm的膜？用Tris-tricine SDS－PAGE電泳，電泳時分別管制三層凝膠，分離膠用40％
實驗概要免疫印跡是一個用于蛋白質分析的常規技術，在電場的作用下將電泳分離的蛋白從凝膠轉移至一種固相支持物，然后利用抗原—抗體的特異性反應，從蛋白混合物中檢測出目標蛋白，從而定量或定性地確定正常或實驗條件下細胞或組織中目標蛋白的表達情況。Western blot還可用于蛋白—蛋白、蛋白—DNA
【實驗原理】Western Blot（蛋白質印跡或免疫印跡）技術，以蛋白質為檢測對象，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。實驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將樣品蛋白質分離，再轉移到固相載體（PVDF尼龍膜或NC膜）上；固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且保持電泳分離的多肽類型及其生物學活
[實驗原理]Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠
1.二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。原因： 一抗和二抗不匹配。2.參照說明書，設置陽性對照。原因：一抗不識別檢測物種蛋白。3.每泳道蛋白上樣量不低于20~30μg，設置陽性對照。原因：抗原量不足。4.使用可逆染色劑如麗春紅S檢測轉膜效果，檢測轉膜操作是否正確。PVDF膜預
1. 跑page膠的時候 小電壓跑會避免高電壓產生的熱量爾導致的膠層變形。低電壓泳道會比大電壓泳道跑的直一些，且分離效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分離。 2. 提取質粒的時候 最后一步的酒精揮發很關鍵，基本上是其后續的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發長一點時間，最好是空調吹熱