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無細胞表達系統讓研究人員能夠快速生成蛋白質，從而受到人們的青睞。來自真核細胞的裂解物能夠對蛋白質進行翻譯后修飾，但不同翻譯系統的細微差別也會導致蛋白生產的變化。無細胞表達究竟哪家強？亞利桑那州立大學的研究人員近日在《BioTechniques》上發表了他們的比較結果。 在目前的無細胞蛋白合成而言，大腸桿菌仍然是首選。不過，由于對人類和哺乳動物蛋白及其翻譯后修飾的興趣日益增加，真核系統也逐漸受到人們的歡迎。此外，對于某些技術，如mRNA展示和核酸可編程的蛋白芯片（NAPPA），研究人員傾向于使用真核表達系統來研究蛋白質互作。 在這項研究中，研究人員比較了市場上三種常用的真核無細胞表達系統：麥胚提取物（WGE，Promega）、兔網織紅細胞裂解物（RRL，Promega）和HeLa細胞裂解物（HCL、賽默飛世爾）。 對于每個系統，研究人員定量了環狀質粒和線性DNA所產生的螢光素酶蛋白的量。這些DNA模板的5’非翻譯區（UT......閱讀全文
實驗步驟一、化學法和酶法細胞裂解微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些機械的方法經常會遇到過度的產熱和樣品被氧化等問題。微量細胞裂解的簡化方面的重大進
實驗步驟 一、化學法和酶法細胞裂解 微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況，而且應用這些
細胞凋亡是生物發育過程中或在正常生理狀態下清除衰老及受損細胞的一種普遍現象。細胞凋亡的發生受胞外或胞內的多種刺激源所誘導，其中熱休克蛋白（熱激蛋白）是細胞凋亡的調控因子之一。細胞是通過調節自身的防御系統來適應環境脅迫，并且根據脅迫程度的強弱，利用自身遺傳機制或調控自身狀態抵抗脅迫，或
細胞凋亡是生物發育過程中或在正常生理狀態下清除衰老及受損細胞的一種普遍現象。細胞凋亡的發生受胞外或胞內的多種刺激源所誘導，其中熱休克蛋白（熱激蛋白）是細胞凋亡的調控因子之一。細胞是通過調節自身的防御系統來適應環境脅迫，并且根據脅迫程度的強弱，利用自身遺傳機制或調控自身狀態抵抗脅迫，或主動誘發細胞
圖1. 與細胞內蛋白表達相比，無細胞蛋白表達系統能夠顯著地節約時間。 與基于細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。本文介紹了根據模板類型、期望產率以及下游實驗等因素來選擇無細胞蛋白表達系統的標
六、Caspase-3活性的檢測 Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關鍵的執行分子，它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個
二、細胞凋亡的細胞化學測定細胞凋亡的細胞化學測定包括細胞表面（細胞膜）的結構和通透性改變的測定和細胞核DNA改變的測定。根據應用的范圍，又可分為細胞群休和單個細胞測定兩種，以下僅介紹其中幾種較為常用的方法。碘化丙啶（propidium iodide,PI）檢測早期死亡細胞膜通透性狀態的不同是區分細胞
細胞凋亡是生物發育過程中或在正常生理狀態下清除衰老及受損細胞的一種普遍現象。細胞凋亡的發生受胞外或胞內的多種刺激源所誘導，其中熱休克蛋白（熱激蛋白）是細胞凋亡的調控因子之一。細胞是通過調節自身的防御系統來適應環境脅迫，并且根據脅迫程度的強弱，利用自身遺傳機制或調控自身狀態抵抗脅迫，或主動誘發細胞死亡
截止2020月7月27日，中國學者在Cell，Nature 及Science 發表了共計102項生命科學的研究成果，其中新冠肺炎領域占了近一半（共43篇）。iNature系統總結了這些研究成果： 按雜志來劃分：Cell 發表了30篇，Nature 發表了45篇，
實驗材料 用感興趣的 DNA 轉染的哺乳動物培養細胞試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液熒光素酶測定緩沖液熒光素溶液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液儀器、耗材 熒光光度計和光度計測置管橡膠棒實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液稀釋到適當濃度。細胞裂解緩沖液25 mmol/L 雙甘氨肽（pH7.8)15 mmol/L
信號通路研究工具促細胞分裂原活化蛋白激酶(MAP kinase)是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，由于不同的細胞外刺激或介導細胞表面至細胞核的信號轉導而被激活。 結合其它信號途徑，它們能夠改變轉錄因子的磷酸化狀態。受控的MAPK級聯反應系統參與細胞增殖和分化，但當其活力失控時會導致腫瘤。據報道，三種主要
哺乳動物細胞抽提物中熒光素酶的測定實驗 實驗方法原理 螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中
在細胞和基因的微觀世界中研究探索，遺傳報告基因是非常有用的"可視化和量化"工具，具有廣泛的應用。熒光素酶（螢光素酶）以出色的靈敏度、使用方便、可以定量檢測而成為理想的報告基因。熒光素酶不是特定的分子，是一類中能催化產生生物發光的酶的統稱，不同來源的熒光素酶各有特點，可催化底物發出
細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式，根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。 第一種 細胞凋亡的形態學檢測 根據凋亡細胞固有的形態特征，人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。
截至2019年12月23日，中國學者在Cell，Nature及Science在線發表了107篇文章（2019年的Cell ，Nature 及Science 已經全部更新），iNature團隊對于這些文章做了系統的總結： 按雜志來劃分：Cell 發表了31篇，Nature 發表了44篇，Scie
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
單細胞凝膠電泳實驗可應用于： （1）快速檢測單細胞DNA損傷； (2)遺傳毒性生物監測; (3)確定精子細胞中DNA片段化的程度。實驗方法原理螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內源性螢光素酶，一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶，同時在所有的化學發光反應中，它的光產物具有最高的量子效
細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式，根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。一、細胞凋亡的形態學檢測 根據凋亡細胞固有的形態特征，人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。 1 光學顯微鏡和倒
真核細胞高度區室化，生物過程被分隔在不同的區室進行。蛋白質功能與亞細胞定位密切相關，不同的區室提供不同的化學環境（例如pH和氧化還原條件）、不同的潛在作用配體或底物。因此，對蛋白質亞細胞定位的嚴格控制是細胞生理學的重要調控內容。大多數細胞生物學過程涉及蛋白質亞細胞定位的變化，例如轉錄因子在細胞核-胞
他們有個美麗的名字：“蝴蝶寶貝”，但美麗的背后是常人難以想像的病痛，因為他們所患的是人類罕見病中公認最痛苦的疾病之一：遺傳性大皰性表皮松解癥，皮膚像蝴蝶翅膀一樣脆弱，而且目前沒有安全有效的根治方法。 清華大學藥學院和醫學院傳染病中心譚旭課題組與北京大學第一醫院楊勇、林志淼課題組合作發現的是該疾
自噬是真核細胞降解長壽蛋白、錯誤折疊蛋白和受損細胞器的重要生物學過程。細胞自噬由多個步驟組成, 其中包括: ① 吞噬泡的形成； ② 自噬體的形成； ③ 自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體； ④ 自噬溶酶體的降解。自噬流是這些步驟在細胞內連續出現的動態過程, 自噬流中的任一環節出現障礙自噬將無法完成
不同細胞不同狀態是有不同死法的，具體是細胞凋亡、壞死、還是程序性壞死，需要進一步排查分析來確定。而細胞凋亡是個復雜的過程，針對凋亡時期不同，檢測的方法有所不同。那如何去確定哪條途徑被觸發，在哪個步驟被阻斷，以及抑制劑是否能夠抑制呢？下面介紹幾種常用的測定方法。 一：細胞凋亡的形態學檢測 發生
盡管用經過基因改造后表達嵌合抗原受體（CAR）的T細胞（CAR-T細胞）治療B細胞惡性腫瘤的臨床應用取得了成功，但是細胞因子釋放綜合征（CRS）卻阻礙了這種療法在患者中的有效性。眾所周知，CRS是由急性炎癥反應觸發的，其特征是發燒、低血壓和與血清細胞因子升高有關的呼吸功能不全。盡管人們已報道在經
CAR-T（T細胞嵌合抗原受體）作為一種免疫細胞治療方案，在全球范圍內吸引了包括學者、醫生、患者、投資人的大量關注。然而CAR-T具體是什么，它的背后有什么樣的故事、目前的研究狀況如何，未來又將走向何方呢？ CAR-T帶來的新曙光 自古以來，人們不斷地與癌癥進行斗爭。科學家們考古發現的木乃伊
無細胞表達系統讓研究人員能夠快速生成蛋白質，從而受到人們的青睞。來自真核細胞的裂解物能夠對蛋白質進行翻譯后修飾，但不同翻譯系統的細微差別也會導致蛋白生產的變化。無細胞表達究竟哪家強？亞利桑那州立大學的研究人員近日在《BioTechniques》上發表了他們的比較結果。 在目前的無細胞蛋白合成而
實驗材料 Sf細胞試劑、試劑盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材 培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟 1. 接種2.5×108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥ 2 h。從
動物細胞線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒產品說明書（中文版） 主要用途 動物細胞線粒體可溶性總蛋白制備試劑是一種旨在從動物細胞中分離出完整而純化的線粒體細胞器，并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下，使已純化的線粒體膜結構破裂而獲得線粒體內活性蛋白酶系統的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、
實驗材料Sf細胞試劑、試劑盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟1. 接種2.5x108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑
主要用途動物細胞線粒體可溶性總蛋白制備試劑是一種旨在從動物細胞中分離出完整而純化的線粒體細胞器，并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下，使已純化的線粒體膜結構破裂而獲得線粒體內活性蛋白酶系統的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物細胞（動物和人體的原代細胞、培養細胞等）中線
實驗方法原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如