桿狀病毒表達系統的應用
用桿狀病毒做載體，可高效表達外源基因，到目前為止已有幾百個包括動植物、病毒、細菌、真菌的基因在昆蟲細胞或幼蟲體內得到高效表達。這個表達體系的主要特點是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點優于細菌、酵母和哺乳動物細胞表達體系。重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，可以對外源蛋白進行許多真核細胞的轉錄后加工作用，包括糖基化、磷酸化、酰基化、正確的信號肽切割、蛋白水解以及適當的折疊作用，而且還可將重組蛋白聚集定位于天然蛋白的同一細胞器上，還能進行適當的寡聚化裝配。因此是表達有生物活性的蛋白質的理想載體。由于這個載體系統獨特的性質，使其被廣泛地應用于藥物開發、疫苗、促生長因子、癌基因、抑癌基因蛋白產物、某些致瘤病毒蛋白、免疫活性分子、基因表達調控等多個領域的研究中。重組桿狀病毒的高效表達為獲得大量的類原型蛋白及其功能研究提供了可能。對于某些寡聚蛋白而言，若只表達其中某一成分并不能獲得非常好的抗原性和免疫......閱讀全文
桿狀病毒表達系統的應用
桿狀病毒是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統，本文就桿狀病毒表達系統的生物學特性、轉染載體、重組病毒的篩選、基因表達調控及其發展應用等方面作一概述。
桿狀病毒表達系統的應用
用桿狀病毒做載體，可高效表達外源基因，到目前為止已有幾百個包括動植物、病毒、細菌、真菌的基因在昆蟲細胞或幼蟲體內得到高效表達。這個表達體系的主要特點是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點優于細菌、酵母和哺乳動物細胞表達體系。重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，可以
概述桿狀病毒表達系統的應用
用桿狀病毒做載體，可高效表達外源基因，到目前為止已有幾百個包括動植物、病毒、細菌、真菌的基因在昆蟲細胞或幼蟲體內得到高效表達。這個表達體系的主要特點是可以獲得大量抗原性、免疫原性較好的，與天然蛋白功能相似的可溶性重組蛋白。這一特點優于細菌、酵母和哺乳動物細胞表達體系。重組桿狀病毒感染昆蟲細胞后，
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟一、桿狀病毒表達載體最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成，其位于病毒基因組多角體座位，替代了非必需的野生型多角體基因。在實驗室中
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
關于桿狀病毒表達系統的簡介
桿狀病毒是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統，本文就桿狀病毒表達系統的生物學特性、轉染載體、重組病毒的篩選、基因表達調控及其發展應用等方面作一概述。 體外基因表達系統包括原核細胞系統和真核細胞系統。原核細胞系統主要是大腸桿菌細胞系統，它操作簡便，周期短，收益大，表達產物穩定，但是表達基
影響桿狀病毒表達系統的表達因素介紹
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素： ①該目的基因應不含內含子； ②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列； ③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如K
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統3
七、桿狀病毒表達載體的新一代昆蟲細胞宿主最早的鱗翅類昆蟲細胞的遺傳轉化技術出現在1990年（Jarvisetal.，1990)。那時，研發該技術的初衷在于構建一個穩定轉化的昆蟲細胞系，它旨在能夠持續生產目標重組蛋白而無需使用桿狀病毒進行感染。然而, 構建這個生產用細胞系所用的載體及方法也為構建具有新
桿狀病毒昆蟲細胞表達系統2
五、親代桿狀病毒基因組的改進就像轉移質粒的改進，對親代桿狀病毒基因組的改進也是為了滿足各種不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重組桿狀病毒載體構建和分離低效率的方法，這也是最初的桿狀病毒-昆蟲細胞系統存在的主要問題。現在已經知道這個問題的根源在于, 在共轉染的昆蟲細胞系中，轉移質粒和親代桿狀病毒
概述桿狀病毒表達系統的生物特性
桿狀病毒（又稱多角體病毒或顆粒體病毒）有兩類病毒體[1]，芽殖病毒體（buded virion，BV）和多角體源性病毒體（polyhedron derived virion,PDV）。在病毒復制過程中，首先產生BV，BV核殼產生后通過芽生方式從細胞中釋放出來，再感染其它細胞，復制后期產生PDV，
桿狀病毒表達系統的影響蛋白質表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——小規模表達
實驗方法原理分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉
桿狀病毒表達系統用于表達融合型蛋白的轉染質粒
是一類早期構建的轉染質粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每個載體中，多角體蛋白基因啟動子下游ATG啟始密碼后含有一個單一的BamHⅠ酶切位點，當外源基因和多角體基因的讀碼框架正確時，就可以獲得含1個或幾個多角體蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料 草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗
基本方案 小規模表達 輔助方案1 蛋白質生產高峰期的確定 輔助方案2重組蛋白的代謝標記 基本方案2 重組蛋白大規模生產 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
概述桿狀病毒表達系統的載體和發展
桿狀病毒基因組十分龐大，不能直接對其進行操作插入外源基因，因此需要通過中間轉染載體而獲得重組桿狀病毒。經過十多年來研究者們的不斷探索，已構建出用于表達不同基因產物的各種轉移載體。這些轉移載體的共同特征是[3]： ①在一個基礎質粒（如pUC系列）中插入一個多角體蛋白基因啟動子（或p10基因啟動子
桿狀病毒表達系統用于表達多個非融合蛋白的轉染載體
這種載體的主要特征是含有2個或2個以上相同的啟動子，可表達2條或2條以上多肽鏈的蛋白。 如Emery和Bishop[8]等構建的pAcVC2轉染質粒，含有兩個方向相反的多角體基因啟動子。重組病毒可同時表達多角體蛋白和淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒（LCMV） N蛋白。Takehara[9]等構
影響表達桿狀病毒表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
桿狀病毒表達系統的空斑純化法介紹
由于在重組病毒中多角體基因被外源基因所取代，因此形成的子代病毒不含有包含體，為包含體陰性病毒。包含體陰性病毒與包含體陽性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形態是不同的。因此，可在光學顯微鏡下，利用這一特征篩選出含外源基因的重組病毒并加以純化[12]。這正是目前使用最普遍的有效方法。 1
桿狀病毒表達系統用于表達單一非融合蛋白的轉染質粒
由于外加的多角體蛋白或其它的氨基酸可能對外源蛋白的生物活性或細胞定位產生影響，所以用于表達非融合型蛋白的轉移載體被廣泛應用。幾種不同的策略被用于設計高水平表達非融合蛋白的轉移載體： (1)如pAcRP[5]系列等，都在多角體基因啟動子啟始密碼ATG上游引入一個單一的限制性多克隆位點； (2)
關于桿狀病毒表達載體的介紹
BEV，即“桿狀病毒表達載體”。是“Baculovirus Expression Vector”的縮寫，譯為“桿狀病毒表達載體”，有真核表達載體、原核表達載體、酵母表達載體、植物表達載體、昆蟲表達載體等多重區分。目前應用較多的是昆蟲桿狀病毒表達系統，利用病毒攜帶目的基因在昆蟲細胞中表達。這類系統
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白的代謝標記
實驗方法原理由于重組蛋白表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白的敏感方法。所有的標記氨基酸都摻入到晚期病毒特異的蛋白質（包括目的蛋白）的合成。35S 標記的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射標記的氨基酸。為了獲得更好的結果，在標記之前細胞內的這兩種氨基酸應當被清除：將細胞在
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白大規模生產
實驗材料草地夜蛾細胞（Sf 9）高滴度重組病毒儀器、耗材無血清昆蟲細胞培養基1～10 L 旋轉培養瓶10.16 cm 管索張力器多旋轉瓶攬拌臺27℃ 培養箱供氣泵實驗步驟1. 在懸浮培養液中培養 Sf 9 細胞，并使之適應無血清培養液（基本方案 1）。2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增 Sf 9
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——蛋白質生產高峰期的確定
實驗方法原理因為重組蛋白的表達受多角體啟動子的調節，而多角體啟動子在病毒裂解循環的晚期才被激活，所以重組蛋白在感染后期才表達。重組蛋白通常在感染后 15～24 h之間即可檢測到，并可積累至感染后 40 h 左右，然后積累水平下降。由于不同的蛋白質在昆蟲細胞中有不同的穩定性，推薦用這個系統測定蛋白質積
無細胞表達系統——難度蛋白表達的福音
1964年有兩個人開創了體外蛋白表達的先河，這兩個人的名字大家必定不會陌生—馬太和尼倫伯格。因為他們的創新思維讓人類破譯了編碼氨基酸的64種翻譯密碼子。從此，體外蛋白表達開始為科學界所關注，不過彼時這個系統蛋白表達量低、持續時間短、穩定性差，使其未能得到進一步發展。 到80年代中期Sp
無細胞表達系統——難度蛋白表達的福音
1964年有兩個人開創了體外蛋白表達的先河，這兩個人的名字大家必定不會陌生—馬太和尼倫伯格。因為他們的創新思維讓人類破譯了編碼氨基酸的64種翻譯密碼子。從此，體外蛋白表達開始為科學界所關注，不過彼時這個系統蛋白表達量低、持續時間短、穩定性差，使其未能得到進一步發展。到80年代中期Spirin等對其進
CHO細胞表達系統與酵母細胞表達系統比較
?CHO細胞表達系統與畢赤酵母表達系統是當前發展前景看好的兩個表達系統，為了能夠更加直觀地對兩個表達系統有一定的認識，特意在此篇中對兩個表達系統作一定的比較，從而能夠更進一步的對兩個表達系統有更深的了解1．CHO細胞表達系統? ?? ??（1）優點? ?? ? CHO細胞屬于成纖維細胞，既可以貼壁生
重組蛋白真核表達系統與原核表達系統的區別
重組蛋白真核表達采用原核表達系統進行研究，主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體轉化到細菌中，通過IPTG誘導和終純化獲得所需的目的蛋白。其優點是可以在短時間內獲得基因表達產物，所需成本相對較低。? 目前的表達系統各有利弊，但一般理想的表達系統滿足以下幾點：一是特異性，不受其他內源性因素
關于酵母表達系統的概述
酵母表達系統作為一種后起的外源蛋白表達系統，由于兼具原核以及真核表達系統的優點，正在基因工程領域中得到日益廣泛的應用，應用此系統可高水平表達蛋白，且具有翻譯后修飾功能，故被認可為一種表達大規模蛋白的強有力的工具。
真核表達系統的特點
真核表達系統的特點是蛋白翻譯后加工機會多，甚至可被改造成人源型；真核細胞易被轉染，具有遺傳穩定性和可重復性；產物可被分泌，提純簡單，成本低。