WIKI資訊
原理：變性梯度凝膠電泳（Denaturing Gradient Gel Electrophresis，DGGE）是一種實用價值較高研究DNA突變的分析方法。本質是一類電泳（電泳定義：帶電顆粒在電場作用下，向著與其電性相反的電極移動，稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達到分離的技術稱為電泳技術。）DGGE主要是利用梯度變性膠來分離DNA片段。當電泳開始時，DNA在膠中的遷移率僅與分子大小有關，一旦DNA移動到某一點，達到該DNA變性濃度位置時， DNA雙鏈開始分開，從而降低了DNA的遷移速率。由于不同的DNA片段具有的堿基組成不同，使得變性條件產生差異，在凝膠上形成不同的條帶，從而可以區分DNA突變型和野生型，可以進一步進行基因突變的分析。另外DGGE還可與PCR聯合使用，利用此項技術可以準確鑒定出單堿基替換、移框突變和少于10個堿基的缺失突變。通常先用病人的......閱讀全文
變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。（1）將凝膠設置在雙重變性條件下，可以檢測DNA分子中的任何一種單堿基的替代、移碼突變以及少于10個堿基的缺失突變，被廣泛應用于基因突變檢測及相關研究。（2） 用于癌癥和遺傳病的篩查及診斷,而且,在癌癥(殘存性病灶、突變
表2－1 室溫下由S1提高到S2時每升加固體硫酸銨的克數 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術可應用于：(1)蛋白質的分離提純；（2）蛋白質組學研究。實驗方法原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，
2．核酸的分離純化 從細胞中提取核酸后，仍混雜著蛋白質、多糖和各種大小分子核酸同類物。除去這些“雜質”的過程，也就是核酸提純過程。在核酸的分離純化時，為防止核酸大分子的變性降解，必須在0～4℃的低溫條件下操作。核酸酶的水解作用，是過去制備具有活性核酸大分子的嚴重障礙，現普遍采用加入去污劑或加入E
等電聚焦（Isoelectric focusing，簡稱 IEF）是六十年代中期出現的新技術。近年來等電聚焦技術有了新的進展，已迅速發展成為一門成熟的近代生化實驗技術。目前等電聚焦技術已可以分辨等電點（pI）只差 0.001pH 單位的生物分子。由于其分辨力高，重復性好，樣品容量大，操作簡便迅速，在
實驗概要蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心. 雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1000個E.coli蛋白，并表明蛋白質譜不是穩定的，而是隨環境而變化. 雙向電泳原理簡明，第一向進行等電聚焦，蛋白質沿pH梯度分離，至各自的等電點；隨后，再
8、載體兩性電解質pH值梯度不穩定的原因：陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過程。反之，如果其酸性端逐漸消失則稱為陽極漂移。為了闡明等電聚焦電泳中pH值梯度不穩定的機制，提出了各種假說：（1）載體兩性電解質向陰、陽極的等速電泳遷移。（2）在陰極因CO2的吸附而引起陰極液組分和濃度
實驗方法原理 定量PCR（即時聚合酶鏈鎖反應，Real-time Polymerase Chain Reaction，簡稱 Real-time PCR、即時PCR），又稱定量即時
定量PCR可以用于：（1）以外參或內參為標準，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量；（2）用外標法（熒光雜交探針保證特異性）通過監測PCR過程（監測擴增效率）達到精確定量起始模板數的目的，同時以內對照有效排除假陰性結果（擴增效率為零）。實驗方法原理定量PCR（即時聚
實驗方法原理 實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
實驗概要PCR擴增產物可以通過酶切分析、凝膠電泳（瓊脂糖電泳、聚丙烯酰胺電泳、毛細管電泳等）、Southern雜交、克隆、測序等方法分析，電泳前還可以應用紫外分光光度計定量DNA。當采用凝膠電泳時也有溴化乙錠顯色、銀染法、熒光顯色等不同的顯色方法。本實驗室采用的是非變性連續緩沖系統聚丙烯酰胺凝膠垂直
固相pH梯度等電聚焦電泳色譜儀比載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳色譜儀具有更高的分辨率，更大的上樣量，其分辨率可達0.001pH，是目前分辨率zui高的電泳儀之一。一、工作原理：蛋白質分子按照自己的pI位置在固相pH梯度中遷移，達到自己的等電點時停止遷移。二、固相pH梯度的介質：固相pH梯度（IP
聚丙烯酰胺凝膠電泳儀（PAGE）是以聚丙烯酰胺凝膠作為載體的電泳技術，于1959年建立，1964年進一步從理論和實驗技術上得到改進并推廣應用。由于分辨率高，目前已廣泛用于蛋白質等生物大分子的分析。一、PAGE工作原理：
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的、線性或非線性的pH梯度中進行分離。一、載體兩性電解質的概念：載體兩性電解質是兩性的，使它們在電泳柱中能達到一個平衡位置。載體兩性電解質可以作為載體。兩性電解質不能用于等電聚焦，只有載體兩性電解質，即
聚合酶鏈式反應（PCR）以其優越性極大地影響到了分子生物學的幾乎所有領域，并以其基本程序和DGGE，開發出多種檢測核苷酸變異的方法。RAPD（Random Amplifed Polymorphic DNA）是其中一種，可用于（1）遺傳圖譜的構建（2）系統學研究（3）目的基因的標記和定位（4）純度和外
（二）乳過氧化物酶法（LPO） 本法反應溫和，對抗原、抗體免疫活性影響小，已被廣泛應用。缺點是標記率較低，一般為20～40%。 1．原理此法是利用乳過氧化物酶（Lactoperoxidase）有促進微量過氧化氫對125I-的氧化作用，生成125I+，并標記在多肽、蛋白質酪氨酸分子上。 2．方法
降落PCR（touchdown PCR），一種PCR技術，主要用于PCR的條件的優化。實驗方法原理基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq
基本方案 實驗方法原理 基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing, IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離; 第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE ) , 按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后, 可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。本實驗目的是
抗血清的制備 【原理】：用抗原刺激機體可以產生抗體，抗原的性質、純度和活性影響其免疫動物后獲得的抗體的的特異性和效價。在體外有目的的制備抗原，經初次、再次免疫的過程可以獲得高質量的抗體。 【注意事項】 ①制備佐劑時，一定要順著同一方向用勁磨。 ②檢查油包水的方法：培養皿內加水，滴入混勻液
自從 Sanger等(1975)引人雙脫氧核苷三磷酸( ddNTP)作為鏈終止劑,DNA序列測定技術得到迅速發展。 ddNTP在DNA聚合酶作用下,通過其5三磷酸基團可以摻入到正在延伸的DNA鏈中,但由于其脫氧核糖3位置缺少一個羥基,因此不能同后續的dNTP形成磷酸二酯鍵,使得DNA鏈的延伸
實驗目的： 了解常規DNA序列分析技術（Sanger雙脫氧法）的原理及操作步驟。 實驗原理： 在分子生物學研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等（1977）發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam和Gilbert（1977）發明的化學
細菌質粒是一類雙鏈、閉環的DNA，大小范圍從1kb至200kb以上不等。各種質粒都是存在于細胞質中、獨立于細胞染色體之外的自主復制的遺傳成份，通常情況下可持續穩定地處于染色體外的游離狀態，但在一定條件下也會可逆地整合到寄主染色體上，隨著染色體的復制而復制，并通過細胞分裂傳遞到
SSCP原理及特點 日本Orita等研究發現，單鏈DNA片段呈復雜的空間折疊構象，這種立體結構主要是由其內部堿基配對等分子內相互作用力來維持的，當有一個堿基發生改變時，會或多或 少地影響其空間構象，使構象發生改變，空間構象有差異的單鏈DNA分子在聚丙烯酰 胺凝膠中受排阻大小不同.因此，通過
電泳儀于1937年研發，常用支持物體有濾紙、醋酸纖維薄膜等。電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。儀器原理區帶電泳則需用各種類型的物質作為支持物，常
一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合
在RIA中，標記抗原質量的優劣，直接影響測定結果，必須制備比放射性強、純度高的標記抗原，并保持免疫活性不受喪失。 一、同位素的選擇 同位素有穩定性和放射性兩種。放射性同位素可利用其衰變時放出的放射線進行測量，這種測量較靈敏而方便，故多用放射性同位素。標記抗原，常用的放射性同位素有3H、14C、1
實驗概要 在分子生物學研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger等（1977）發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam和 Gilbert（1977）發明的化學降解法。這二種方法在原理上差異很大，但都是根據核苷酸在某一固定的點開始
一、酸雜交技術檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度，在復雜的物體中，使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性，核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年，目前研究實驗室用得多，臨床實驗室用得較少，除成本高外，關鍵是操作
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的