基于PCR技術的染色質沉淀分析1
INTRODUCTIONAfter chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a locus of interest. Real-time PCR amplification is often the preferred technique. One can also use duplex PCR amplification, which is the coamplification of a fragment from the region of interest and a control fragment (e.g., the actin gene, or the tubulin gene). This approa......閱讀全文
基于PCR技術的染色質沉淀分析1
INTRODUCTIONAfter chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a locu
基于PCR技術的染色質沉淀分析
INTRODUCTIONAfter chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a locu
基于PCR技術的染色質沉淀分析
INTRODUCTION?After chromatin immunoprecipitation (ChIP), different?PCR-based approaches can be used to determine how much?DNA?is precipitated at a loc
基于PCR技術的染色質沉淀分析2
METHOD?Analysis of precipitated chromatin fractions (from?Chromatin Immunoprecipitation on Unfixed Chromatin from Cells and Tissues to Analyze Histone
染色質免疫沉淀（ChIP）技術的難點及應用1
序言隨著人類基因組測序工作的基本完成，功能基因組學的研究逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域。研究某個蛋白因子的調控功能，可以通過對蛋白活性（激活或抑制其活性），蛋白數量（過表達Overexpression或基因缺陷型Knockout）, 以及蛋白功能（功能缺陷
染色質免疫沉淀分析
真核生物細胞狀態是由內源和外源因素共同影響的，所有信號傳遞途徑的終點都是DNA 。DNA 通過核蛋白復合物組成染色質，染色質是基因調控的一個重要作用位點。轉錄激活因子和輔助抑制因子的研究顯示存在一種新的調節機制--" 組蛋白密碼" ，其信息存在于組蛋白的轉錄后修飾等過程中。該類修飾包括組蛋白磷酸
染色質免疫共沉淀技術（ChIP）
真核生物的基因組DNA以染色質的形式存在。因此，研究蛋白質與DNA在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。染色質免疫沉淀技術（chromatin immunoprecipitation assay, CHIP）是目前唯一研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法。它的基本原理是在活細
染色質免疫共沉淀技術（ChIP）
真核生物的基因組DNA以染色質的形式存在。因此，研究蛋白質與DNA在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。染色質免疫沉淀技術（chromatin immunoprecipitation assay, CHIP）是目前唯一研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法。它的基本原理是在活細
染色質免疫沉淀技術的應用
隨著人類基因組測序工作的基本完成，功能基因組學逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域，要想提供蛋白因子直接調控的證據，需要直接檢測蛋白質-DNA的相互作用，而染色質免疫沉淀技術（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）就是一種研
染色質免疫沉淀DNA分析
實驗概要染色質免疫共沉淀是一種強力的方法，來聯系蛋白質或其修飾的定位與基因組的關系。染色質分離并用特異性抗體判斷是否與特異性 ?DNA?序列相結合。染色質免疫沉淀法亦可用來檢測目的位點在基因組中的時空分布（用芯片或 DNA 測序）。本操作規程詳細闡述了交聯染色質免疫沉淀 ?(X-ChIP) 實驗的具
染色質免疫沉淀DNA分析
實驗概要染色質免疫共沉淀是一種強力的方法，來聯系蛋白質或其修飾的定位與基因組的關系。染色質分離并用特異性抗體判斷是否與特異性 ?DNA?序列相結合。染色質免疫沉淀法亦可用來檢測目的位點在基因組中的時空分布（用芯片或 DNA 測序）。本操作規程詳細闡述了交聯染色質免疫沉淀 ?(X-ChIP) 實驗的具
染色質免疫共沉淀技術（ChIP）－實驗
實驗概要染色體免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內分析發展起來的方法，也稱結合位點分析法，在過去十年已經成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內反
染色質免疫沉淀（ChIP）技術的難點
染色質免疫沉淀技術（Chromatin Immunoprecipitation，簡稱ChIP）是研究體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體的特異性反應，可以真實地反映體內蛋白分子與基因組DNA結合的狀況。下面我們就最基本的實驗步驟，實驗中的小技巧以及需要注意的問題簡單介紹一下。1.
什么是染色質免疫共沉淀技術（ChIP）
染色質免疫共沉淀技術是在保持組蛋白和DNA聯合的同時，通過運用對應于一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，并沉淀下來的技術。這項技術主要用來分析目標基因有沒有活性、或者分析一種已知蛋白（轉錄因子）的靶基因有哪些。該技術主要應用于以下幾方面：1.組蛋白修飾酶的抗體作為“生物標記”2.轉
快速了解染色質免疫共沉淀技術（ChIP）
ChIP技術的原理在生理狀態下把細胞內的DNA與蛋白質交聯在一起，通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識別反應，將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來，以富集存在組蛋白修飾或者轉錄調控的DNA片段，再通過多種下游檢測技術（定量PCR、基因芯片、測序等）來檢測此富集片段的DNA序
技術和方案18－染色質免疫沉淀
試劑、試劑盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液免疫共沉淀洗脫液TESTE儀器、耗材超聲波粉碎儀實驗步驟1.培養要分析的細胞。每一個樣品，需要在三角瓶中培養 50~100ml 細胞至 OD600 大約為 1。2.甲醛處理細胞交聯蛋白質和 DNA。加甲醛到細胞中至終濃度為 1%(37% 的甲醛按 1
快速了解染色質免疫共沉淀技術（ChIP）
ChIP技術的原理 在生理狀態下把細胞內的DNA與蛋白質交聯在一起，通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識別反應，將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來，以富集存在組蛋白修飾或者轉錄調控的DNA片段，再通過多種下游檢測技術（定量PCR、基因芯片、測序等）來檢測此富集片
染色質免疫沉淀（ChIP）技術的難點及應用2
3. 染色質免疫沉淀Input對照：在進行免疫沉淀前，需要取一部分斷裂后的染色質做Input對照。Input是斷裂后的基因組DNA，需要與沉淀后的樣品DNA一起經過逆轉交聯，DNA 純化，以及最后的PCR或其他方法檢測。Input對照不僅可以驗證染色質斷裂的效果，還可以根據Input中的靶序
染色質免疫共沉淀（ChIP）
染色質免疫共沉淀實驗方法原理在保持組蛋白和DNA聯合的同時，通過運用對應于一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，并沉淀下來。IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“prorein A”特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精制的prore
染色質免疫共沉淀（ChIP）
實驗方法原理在保持組蛋白和DNA聯合的同時，通過運用對應于一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，并沉淀下來。IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“prorein A”特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精制的prorein A預先結合
染色質免疫共沉淀（ChIP）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在保持組蛋白和DNA聯合的同時，通過運用對應于一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，并沉淀下來。IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“prorein A”特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象
染色質免疫共沉淀研究
真核生物的基因組DNA以染色質的形式存在，研究蛋白質與DNA在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。與傳統的EMSA技術相比，染色質免疫沉淀技術（ChIP）能真實完整地反映結合在DNA序列上的調控蛋白，是目前研究體內DNA與蛋白質相互作用的最佳方法。染色質免疫沉淀技術（chro
染色質免疫共沉淀（ChIP）
實驗方法原理?在保持組蛋白和DNA聯合的同時，通過運用對應于一個特定組蛋白標記的生物抗體，染色質被切成很小的片斷，并沉淀下來。IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“prorein A”特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精制的prorein A預先結
沉淀反應技術(Precipitation－reaction－technique)（1）
一、 概述可溶性抗原（如細菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他來源的蛋白質、多糖質、類脂體等）與其相應的抗體相遇后，在電解質參與下，抗原抗體結合形成白色絮狀沉淀，出現白色沉淀線，此種現象稱為沉淀反應。沉淀反應中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,與沉淀原發生反應的抗體稱為沉淀素（pre
數字PCR新應用：基于S1PFGEddPCR技術的質粒介導耐藥基...
病原細菌產生耐藥性，能夠降低細菌感染后的藥物治療效果，并增加細菌感染和傳播的風險，是造成食品安全問題和健康威脅的重要因素。細菌耐藥性可分為固有耐藥（intrinsic resistance）和獲得性耐藥（acquired resistance）兩種。在獲得性耐藥中，攜帶耐藥基因的質粒可導至耐
RTPCR技術1
目前已有多種方法用來研究有關細胞和組織中，基因表達產物方面的內容，這些方法主要有Northern印跡、RNase保護分析法、原位雜交、點印跡、Ｓ１核酸酶分析法及反轉錄與PCR擴增串聯的RT-PCR技術等。在這些方法中RT-PCR技術具敏感度高和應用范圍廣的特點，該技術提供給研究人員有效的進行測定轉錄
組織免疫沉淀中染色質的制備
實驗概要此步驟描述了從組織中制備染色質，以用于后續的染色質免疫沉淀反應。每個免疫沉淀/抗體反應推薦使用肝組織 30 mg，但組織使用量可根據實際進行調整。每種組織的用量依據組織蛋白豐度、抗體親和力和交聯效率而定。每個免疫沉淀反應最適染色質的量為 5-15 μg 。每次交聯免疫沉淀反應之前，需根據不同
組織免疫沉淀中染色質的制備
實驗概要此步驟描述了從組織中制備染色質，以用于后續的染色質免疫沉淀反應。每個免疫沉淀/抗體反應推薦使用肝組織 30 mg，但組織使用量可根據實際進行調整。每種組織的用量依據組織蛋白豐度、抗體親和力和交聯效率而定。每個免疫沉淀反應最適染色質的量為 5-15 μg 。每次交聯免疫沉淀反應之前，需根據不同
PCR技術的原理與方法（1）
PCR定義PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術，能快速特異地在體外擴增任何目的DNA
定量PCR實驗技術分享1
1. ?如果擴增曲線ct值比較靠后的話，32左右，一般有什么方法解決沒有?ct值比較靠后，對實驗有一定的影響，因為經過那么多次的循環，酶的活性有可能有所下降，這時候擴增效率會有所改變（而定量PCR的理論基礎就是每次循環的擴增效率我們認為是確定的一個值）。因此zui好能夠把ct值往前移。?解決辦法可以