噬菌體展示技術與抗體藥物研發
2018年諾貝爾化學獎塵埃落定，授予Frances Arnold、George Smith、Gregory Winter三人。其中化學獎一半的獎金授予美國科學家Frances Arnold，獎勵她的工作實現了酶的定向進化；另一半的獎金授予英國科學家Gregory Winter以及美國科學家George Smith，以獎勵他們在肽類和抗體的噬菌體展示技術的巨大成就。 科學技術的發展是藥物研發的動力，Smith等人發展出噬菌體展示技術，使得抗體藥物的研發有了突破性進展。噬菌體展示技術已成為最重要的藥物篩選平臺之一，它不僅可以用于多肽、單抗的篩選，也可以用于其他蛋白質的篩選，其篩選的多樣性也是該技術的亮點之一。 那么，什么是噬菌體展示技術呢？該技術是由Smith于1985年開發，之后Winter繼續發展了該技術，他們所用的工具是基因工程改造過的噬菌體——一種可以感染細菌的病毒，作為宿主。 A.基因工程將編碼多肽或蛋白文庫的D......閱讀全文
噬菌體展示技術與抗體藥物研發
2018年諾貝爾化學獎塵埃落定，授予Frances Arnold、George Smith、Gregory Winter三人。其中化學獎一半的獎金授予美國科學家Frances Arnold，獎勵她的工作實現了酶的定向進化；另一半的獎金授予英國科學家Gregory Winter以及美國科學家Geo
噬菌體抗體ELISA
噬菌體抗體ELISA 噬菌體ELISA快速而便捷，尤其是因為pⅧ有多拷貝會導致信號的擴增。不過，后續的抗體檢測總是要以其可溶性形式進行。 [器材和試劑] ● 96孔ELISA板，例如Nunc maxisorb442404(可自VWR購得) ● 2％M ● /Tw
噬菌體抗體ELISA
實驗概要噬菌體ELISA是一種快速而便捷的方法，尤其是因為pⅧ有多拷貝會導致信號的擴增。主要試劑1. 2％MPBS2. PBS/Tween3. 辣根過氧化物酶(HRP)標記的小鼠抗噬菌體單克隆抗體(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)4. 3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)
噬菌體抗體ELISA
實驗概要噬菌體ELISA是一種快速而便捷的方法，尤其是因為pⅧ有多拷貝會導致信號的擴增。主要試劑1. 2％MPBS2. PBS/Tween3. 辣根過氧化物酶(HRP)標記的小鼠抗噬菌體單克隆抗體(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)4. 3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)
噬菌體抗體庫的富集篩選
實驗概要用于噬菌體抗體庫富集篩選的抗原至關重要，一般來說，純化后的可溶性蛋白純度高，含量大，可直接包被ELISA板，是篩選特異性抗體的最佳選擇。在某種情況下，需要獲得針對某一特殊蛋白的單克隆抗體，也可以用抗這種蛋白的單克隆抗體捕捉抗原的方法來進行篩選。實驗步驟1. 將用于篩選特異性抗體的抗原用0.1
噬菌體抗體庫的菌落篩選法
實驗概要本實驗介紹了噬菌體抗體庫的菌落篩選操作流程。實驗步驟1. 將每輪篩選洗脫的噬菌體用來感染新鮮的XLIBlu菌，以10μl、20μl等不同量菌液涂于LB氨芐青霉素平皿，37℃ 4~5h。2. 事先將硝酸纖維素膜在5mmol/L的IPTG溶液中浸泡10min，在超凈臺中晾干后，鋪在上述涂有細菌的
文庫甘油儲存料中噬菌體抗體的制備
實驗概要本實驗從文庫甘油儲存料中制備了噬菌體抗體。主要試劑1. 2×TY/amp/glu培養基2. TYE/amp/glu平板3. 含有25ug/ml卡那霉素和2％葡萄糖的TYE平板(TYE/kan/glu)4. 含100ug/ml氨芐青霉素和25ug/ml卡那霉素的2×TY培養基(2×TY/amp
文庫甘油儲存料中噬菌體抗體的制備
實驗概要本實驗從文庫甘油儲存料中制備了噬菌體抗體。主要試劑1. 2×TY/amp/glu培養基2. TYE/amp/glu平板3. 含有25ug/ml卡那霉素和2％葡萄糖的TYE平板(TYE/kan/glu)4. 含100ug/ml氨芐青霉素和25ug/ml卡那霉素的2×TY培養基(2×TY/amp
用PCR識別不同的噬菌體抗體克隆
。不過，也可以先用PCR篩選方法估計所出現的不同克隆的數目。使用位于scFv基因旁側的引物，直接從包含了噬菌粒的細菌克隆中擴增scFv。然后，用能多次切割V基因的限制性酶（如BstNI）消化PCR產物。盡管這對于來自非免疫文庫的scFv很有效，但對于多樣性受到更多限制的抗體文庫效果較差。這是因為這些
噬菌體抗體庫技術知識點
將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體，轉染工程細菌進行表達，然后用抗原篩選即可獲得特異的單克隆噬菌體抗體。利用這一技術可以得到完全人源性的抗體，在HIV等病毒感染和腫瘤的診斷與治療方面有其獨特的優越性。(一)基本原理和程序構建噬菌體抗體庫通常包括以下幾個過程：1.構建噬菌體載體；2.表達載體轉化細