反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗——測定病毒滴度
實驗材料病毒原液試劑、試劑盒G418儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1. 感染的前1天按1：10至1：20將靶細胞NIH 3T3分傳于6 cm 培養皿中。 2. 進行感染的當天，移去靶細胞的培養液，加入含有病毒原液的培養液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培養液感染6 cm 培養中的細胞，或3~5 ml 感染10 cm 培養皿中的細胞。對于鼠源性的或禽源性的E亞群，加800 μg/ml 的polybrene至終濃度8 μg/ml，在37℃溫育細胞1~3 h。 3. 用培養液稀釋polybrene至2 μg/ml，并培養至少2或3個細胞周期。 4. 如果病毒攜帶了一個組織化學標記基因如lacZ則感染的細胞可用Xgal染色，不需要進行藥物選擇。計數藍染的細胞，接著按步驟7計算滴度。5. 如果病毒......閱讀全文
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗——測定病毒滴度
實驗材料病毒原液試劑、試劑盒G418儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1. ?感染的前1天按1：10至1：20將靶細胞NIH 3T3分傳于6 cm 培養皿中。?2. ?進行感染的當天，移去靶細胞的培養液，加入含有病毒原液的培養液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培養液感染6
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗
建立一個能產生高水平的反轉錄病毒構建體的細胞系是一個長期的過程。首先，必須將反轉錄病毒構建體穩定地導入一種適當的包裝細胞系中。當產生了穩定的細胞系后，必須對之進行鑒定，從中選出能產生具有正確結構的高滴度的病毒的細胞系。實驗材料包裝細胞系試劑、試劑盒HEPESCaCl2甘油DMSO儀器、耗材培養皿培養
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗
實驗材料 包裝細胞系試劑、試劑盒 HEPESCaCl2甘油DMSO儀器、耗材 培養皿培養板離心機實驗步驟 1. ?在轉染前1天，在10 cm 培養皿中接種包裝細胞，接種密度大約相當于10%~20%片的細胞數。2. ?將10 μg 含有藥物抗性基因的反轉錄病毒質粒DNA加入0.5 ml HeBS。再加
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗
反轉錄病毒載體導入包裝細胞系 測定病毒滴度 培養細胞的Xgal染色 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 包裝細胞系
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗——培養細胞的Xgal染色
實驗材料轉染細胞試劑、試劑盒PBS戊二醛低聚甲醛Xgal溶液儀器、耗材培養箱離心機實驗步驟1. ?棄培蕎上清并加固定液，室溫下，在通風櫥中與2%低聚甲醛共育60 min，或與0.05%戊二醛共育5~15 min。2. ?根據實驗室化學物棄置規程棄去固定液，室溫下用PBS充分洗滌細胞3次，第1次和第3
病毒滴度的測定
稀釋計數法滴度單位：TU/ml，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒顆粒數。”TU”為”transducing units”的縮寫，中文為“轉導單位”，表示可以感染并進入到靶細胞中的病毒基因組數。第一天 細胞準備將生長狀態良好的293T細胞消化計數后稀釋至1×105/ml，加入96孔板，100μl/孔
50％終點法測定病毒滴度實驗
實驗方法原理50% 終點 (50% endpoint) 法是將病毒懸浮液經一系列稀釋后，接種至動物、雞胚或培養成單層的細胞，將每個稀釋度造成的動物、雞胚致死量或細胞病變做成曲線，找出造成 50% 動物、雞胚死亡或細胞病變的終點稀釋度。 LD50 (50 % Lethal dose) 為造成 50%動
50％終點法測定病毒滴度實驗
實驗方法原理 實驗材料?病毒試劑、試劑盒?含 2%小牛血清的 Eagle's 維持液儀器、耗材?細胞培養箱、細胞培養板實驗步驟 1. 制備細胞 先制備好單層細胞培養物，在低倍顯微鏡下觀察，挑選生長良好的細胞，按「傳代細胞培養」法進行，將細胞單層洗滌、消化、計數。配制所需濃度的細胞懸液
病毒滴度的概念
也即病毒的毒力，或毒價，衡量病毒滴度的單位有最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半數致死量（LD50），其中以LD50最常用。它是指在一定時間內能使半數實驗動物致死的病毒量。然而，病毒對實驗動物的致病作用不一定都以死亡為標志，例如以感染發病作指標，則可以半數感染量（ID50）測定；此外，當實
桿狀病毒儲液制備實驗——噬斑試驗測定滴度
實驗材料對數生長期單層培養的 Sf 9 細胞試劑、試劑盒桿狀病毒儲液昆蟲細胞培養液儀器、耗材瓊脂糖頂層覆蓋物臺盼藍頂層覆蓋物（選用）60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱1.5 ml 帶螺口蓋的凍存管實驗步驟1. 用含 10％ 胎牛血清的 TNM-FH 培養液稀釋處于對數生長期的 Sf 9 細胞至約
用蝕斑試驗測定病毒貯液的滴度實驗
實驗方法原理 空斑形成單位 (plaque forming units, PFUs)試驗，是將不同稀釋倍數的動物病毒與平鋪于平板表面的宿主細胞混合，當病毒顆粒在一大片宿主細胞上引發感染時，會造成細胞被溶解而形成空斑，每個空斑系由一個病毒顆粒所造成，計算空斑數目再乘以稀釋倍數，即可得知原來的病毒感
血凝試驗和干擾滴定測定病毒滴度
實驗材料待檢的病毒標本試劑、試劑盒0.85% 的無菌生理鹽水阿氏 (Alsever)液磷酸鹽緩沖液 (PBS)紅細胞懸液儀器、耗材96 孔微量血凝板滅菌注射器三角燒瓶離心管實驗步驟1. 選擇適當的 96 孔微量血凝板，如果使用雞或火雞紅細胞，應選用 V 型微量血凝板；如果使用豚鼠或人"O"型紅細胞，
血凝試驗和干擾滴定測定病毒滴度
實驗方法原理?實驗材料?待檢的病毒標本試劑、試劑盒?0.85% 的無菌生理鹽水阿氏 (Alsever)液磷酸鹽緩沖液 (PBS) 紅細胞懸液儀器、耗材?96 孔微量血凝板滅菌注射器三角燒瓶離心管實驗步驟?1. 選擇適當的 96 孔微量血凝板，如果使用雞或火雞紅細胞，應選用 V 型微量血凝板；如果使用
桿狀病毒滴度檢測
實驗概要本實驗介紹了檢測病毒滴度的方法。實驗原理根據噬菌斑數計算病毒滴度。主要試劑1. 4% agarose gel：2g agrose ? 50ml 水，高壓滅菌2. 2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，調PH6.
用蝕斑試驗測定病毒貯液的滴度實驗4
在細胞培養板內做病毒空斑形成單位試驗實驗材料病毒試劑、試劑盒95% 酒精胰酶含 5%小牛血清的 Eagle儀器、耗材細胞培養板實驗步驟(1) 用細胞培養板 (6孔)，若用舊板，洗凈后浸于 95% 酒精中5 min, 再用紫外線照射 2-4 h備用，新板可直接使用。(2) 將傳代細胞系經胰酶消化分散后
用蝕斑試驗測定病毒貯液的滴度實驗2
蟲媒病毒在雞胚成纖維細胞中的空斑形成單位試驗實驗方法原理病毒常殺死被病毒感染的細胞?即產生致細胞病變作用。用只染活細胞（如中性紅）或只染死細胞（如臺盼蘭）的染料對單層細胞染色以檢測空斑。也可以使用活性染料溴化二苯基四氮唑(MTT)?進行染色，使用?MTT?的優點是黃色的?MTT?能將活細胞染成深藍色
用蝕斑試驗測定病毒貯液的滴度實驗3
用傳代細胞系平皿法測量病毒空斑形成單位實驗材料病毒細胞系試劑、試劑盒含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培養液儀器、耗材培養皿實驗步驟(1) 將單層細胞 (2X 106/ml, 6 ml)培養在直徑 60 mm 的平皿上，生長液為含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培養液，加
慢病毒行業新標準——絕對定量滴度測定
絕對定量時代——引領慢病毒行業新標準 高大上的慢病毒是怎樣煉成的（一） 慢病毒活性滴度用什么單位？ 看TU！看TU！看TU！ TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒顆粒數。其他的VG/mL，VP/mL都是所有病毒顆粒數，死的活的都算上
痘苗病毒儲液制備——噬斑分析測定滴度
實驗方法原理經胰酶作用的系列稀釋病毒儲液常被用于感染適當的細胞系。經過幾天的培養后，吸出培養基，將細胞用結晶紫染色。由于感染細胞變縮、變圓和脫落，形成直徑 1～2 mm 顏色較淡的噬斑。實驗材料生長良好的貼壁培養的單層 BSC-1 細胞病毒儲液試劑、試劑盒0.1% 結晶紫（溶于 20% 乙醇）儀器、
MVA－病毒儲液制備實驗——免疫染色法滴度測定
實驗方法原理MVA 病毒滴度通常是用免疫染色法進行測定，因為 MVA 不能在 CEF 或 BHK-21 細胞中形成噬斑。實驗材料CEF 或 BHK-21 細胞MVA病毒儲液試劑、試劑盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培養基1:1 丙酮／甲醇PBS（含和不含3% FBS兩種）PBS／H2O2兔抗
反轉錄病毒原液檢測實驗
輔助病毒是一種有時存在于無復制能力病毒原液中的有復制能力的病毒，輔助病毒的存在在動物的感染及譜系分析中會成為問題。實驗材料病毒細胞試劑、試劑盒polybrene小牛血清DMEM儀器、耗材培養皿濾膜實驗步驟1. ?在開始分析的前1天，按1：50將NIH 3T3細胞分傳于3個6 cm 培養皿中。將1個培
反轉錄病毒原液檢測實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 病毒細胞 試劑、試劑盒 polybrene 小牛血清 DMEM
反轉錄病毒原液檢測實驗
實驗材料 病毒細胞試劑、試劑盒 polybrene小牛血清DMEM儀器、耗材 培養皿濾膜實驗步驟 1. ?在開始分析的前1天，按1：50將NIH 3T3細胞分傳于3個6 cm 培養皿中。將1個培養皿標記為陽性對照，1個為陰性對照，1個用于待測病毒原液。2. ?含有選擇標記的待測病毒的制備：加0.01
用蝕斑試驗測定病毒貯液的滴度實驗_蝕斑試驗法
實驗方法原理空斑形成單位 (plaque forming units, PFUs)試驗，是將不同稀釋倍數的動物病毒與平鋪于平板表面的宿主細胞混合，當病毒顆粒在一大片宿主細胞上引發感染時，會造成細胞被溶解而形成空斑，每個空斑系由一個病毒顆粒所造成，計算空斑數目再乘以稀釋倍數，即可得知原來的病毒感染單位
反轉錄病毒載體的制備實驗
實驗材料二個反轉錄病毒包裝細胞株反轉錄病毒載體包含選擇性標記試劑、試劑盒PBS細胞染色液組織培養皿儀器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培養基低蛋白質結合的纖維素乙酸鹽注射器式濾器克隆形成環實驗步驟展開
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗——懸滴標本法
實驗方法原理病毒等微小顆粒標本可取其培養物經稀釋或分離提純后直接滴于附有支持膜的載網上用電鏡觀察。實驗材料病毒試劑、試劑盒稀釋液儀器、耗材透射電鏡實驗步驟懸液應盡量除去雜質如培養基殘渣，細胞碎片、糖類及各種鹽類的結晶等，這些雜質的存在會干擾染色及電鏡觀察。用該法的缺點是由于電子穿透能力很弱，只能觀察
反轉錄病毒原液檢測實驗——反轉錄酶分析法
實驗材料病毒試劑、試劑盒SSC乙醇儀器、耗材滴定板濾紙離心機實驗步驟1. ?加50 μl RT反應混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每個待測或對照樣品占一孔。加10 μl 病毒上淸，蓋上平板，置于37℃培養箱中溫育1~2 h。2. ?將各反應液10 μl 點于一張2.5 cm 直徑的圓形DE52或
慢病毒包裝試劑盒包出病毒的滴度一般是多少
過表達慢病毒＞10^8 PFU/ml干擾慢病毒＞10^8 PFU/ml
養多細胞皿數會提高慢病毒滴度嗎
上清液滴度是一樣的，因為你養的皿數多了，培養基體積也相應的增加了，如果濃縮的話肯定對滴度提高是有幫助的。ps：慢病毒滴度主要與細胞狀態、質粒質量、轉染效率相關性比較大，在這三個因素都比較好的情況下提高皿數更有利于滴度的提高。如果本身出毒量比較低，只是提高皿數成本比較高。
進口胎牛血清對細胞及病毒滴度的影響
進口胎牛血清是妊娠后期未出生的剖腹取胎牛的血清。胎牛血清營養成分完全而豐富，代謝產物極少，微生物感染的可能性zui小，品質zui高，是組織細胞培養和病毒增殖培養的重要營養來源。 血清是一種成分復雜的混合物，不同批次血清對細胞生長的促進作用不同大規模細胞培養中由血清引起的細胞生長狀態不佳及病毒滴