反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗——培養細胞的Xgal染色
實驗材料轉染細胞試劑、試劑盒PBS戊二醛低聚甲醛Xgal溶液儀器、耗材培養箱離心機實驗步驟1. 棄培蕎上清并加固定液,室溫下,在通風櫥中與2%低聚甲醛共育60 min,或與0.05%戊二醛共育5~15 min。2. 根據實驗室化學物棄置規程棄去固定液,室溫下用PBS充分洗滌細胞3次,第1次和第3次是快速洗滌,第2次洗滌時,可保留PBS于細胞上10 min。 3. 加入能覆蓋細胞的最小量Xgal溶液,37℃溫育1 h 或過夜,陽性細胞被染藍。......閱讀全文
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗——培養細胞的Xgal染色
實驗材料轉染細胞試劑、試劑盒PBS戊二醛低聚甲醛Xgal溶液儀器、耗材培養箱離心機實驗步驟1. ?棄培蕎上清并加固定液,室溫下,在通風櫥中與2%低聚甲醛共育60 min,或與0.05%戊二醛共育5~15 min。2. ?根據實驗室化學物棄置規程棄去固定液,室溫下用PBS充分洗滌細胞3次,第1次和第3
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗
建立一個能產生高水平的反轉錄病毒構建體的細胞系是一個長期的過程。首先,必須將反轉錄病毒構建體穩定地導入一種適當的包裝細胞系中。當產生了穩定的細胞系后,必須對之進行鑒定,從中選出能產生具有正確結構的高滴度的病毒的細胞系。實驗材料包裝細胞系試劑、試劑盒HEPESCaCl2甘油DMSO儀器、耗材培養皿培養
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗
反轉錄病毒載體導入包裝細胞系 測定病毒滴度 培養細胞的Xgal染色 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 包裝細胞系
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗
實驗材料 包裝細胞系試劑、試劑盒 HEPESCaCl2甘油DMSO儀器、耗材 培養皿培養板離心機實驗步驟 1. ?在轉染前1天,在10 cm 培養皿中接種包裝細胞,接種密度大約相當于10%~20%片的細胞數。2. ?將10 μg 含有藥物抗性基因的反轉錄病毒質粒DNA加入0.5 ml HeBS。再加
反轉錄病毒產毒細胞系建立實驗——測定病毒滴度
實驗材料病毒原液試劑、試劑盒G418儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1. ?感染的前1天按1:10至1:20將靶細胞NIH 3T3分傳于6 cm 培養皿中。?2. ?進行感染的當天,移去靶細胞的培養液,加入含有病毒原液的培養液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培養液感染6
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗—人胚胎干細胞系的建立
實驗步驟方 案 2. 6 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立試劑與材料無菌或無菌制備□ 5?6 天的人胚泡,經 H F E A 允許,并且像先前討論的完全經病人同意。 HFEA所要求的全部細節能夠在 H E F A 的網站找到(http//:www.hfea.g0v.uk)。□鏈霉蛋白酶, 0
培養細胞的染色實驗
Giemsa染色法 蘇木精伊紅染色法 Feulgen染色法 吖啶橙染色熒光觀察法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Giemsa 染色是最常用的方法
實驗中建立細胞系的具體要求
實驗中建立細胞系的具體要求? ? 什么樣的體外培養群可被認可為己鑒定的細胞,視具體情況而定,無統一規定。對于用作原代培養的細胞只要供體均一,取材部位及組織種類等條件穩定即可,如用做長期培養,特別是反復傳代的細胞,常需做如下說明:? ? 1、組織來源:細胞供體所屬物種,來自人體或者動物;? ? ? ?
腸毒素產毒培養基
成分 蛋白胨 20g 胰消化酪蛋白 200mg(氨基酸) 氯化鈉 5g 磷酸氫二鉀 1g 磷酸二氫鉀 1g 氯化鈣 0.1g 硫酸鎂 0.2g
體外培養細胞的種類命名以及建立細胞系或細胞株要求...
二、建立細胞系(或株)的要求關于什么樣的體外培養細胞群,可被確認為是已被鑒定的細胞(Certified Cells),國際上也尚無統一的規定,一般依具體情況而定。在只用作初代培養細胞,只要供體性別、年齡等均一,取材部位及組織種類等條件穩定,做鑒定的項目無需很多,有幾項能說明細胞的相關性狀的即可。
建立細胞系或細胞株
各種已被命名和經過細胞生物學鑒定的細胞系或細胞株,都是一些形態比較均一、生長增殖比較穩定的和生物性狀清楚的細胞群。因此凡符合上述情況的細胞群也可給以相應的名稱,即文獻中常稱之為已鑒定的細胞(Certified Cells)。已鑒定的細胞可用于各種實驗研究和生產生物制品。當前世界上已建的各種細胞系(株
細胞系或細胞株的建立
一、概念1、細胞系(Cell Line):原代培養舞經首次傳代成功即成細胞系,由原先存在于原代培養物中的細胞世系(Lineage of Cells)所組成。2、細胞株(Cell Strain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須
細胞系或細胞株的建立
一、概念1、細胞系(Cell Line):原代培養舞經首次傳代成功即成細胞系,由原先存在于原代培養物中的細胞世系(Lineage of Cells)所組成。2、細胞株(Cell Strain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須
干細胞有限細胞系的建立目的
目的:建立腦源性神經營養因子基因修飾的人骨髓間充質干細胞系。
細胞系或細胞株的建立
?1、細胞系(Cell Line):原代培養舞經*傳代成功即成細胞系,由原先存在于原代培養物中的細胞世系(Lineage of Cells)所組成。??? 2、細胞株(Cell Strain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須
腸毒素產毒培養基的制備
成分: 蛋白胨 20g 胰消化酪蛋白 200mg(氨基酸) 氯化鈉 5g 磷酸氫二鉀 1g 磷酸二氫鉀 1g 氯化鈣 0.1g
培養細胞的染色實驗——Feulgen染色法
實驗方法原理此染色法為Feulgen早在1924年提出的一種鑒別細胞中DNA的組織化學方法。細胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解離脫氧核糖核酸,使嘌呤堿基與糖苷犍破壞,嘌呤堿脫掉,脫氧核糖的中的醛基游離;醛基能與Schiff試劑相結合,形成一種紫色的復合物。本方法中酸的離解根重要,若溫度過低
培養細胞的染色實驗——Giemsa染色法
實驗方法原理Giemsa 染色是最常用的方法之一,它簡便、快速,適用于多種細胞和染色體染色。試劑、試劑盒Giemse甘油甲醇Sorensen儀器、耗材滴管玻璃片實驗步驟1. ?染液制備(1)稱Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研缽內先用少量甘油與Giemsa充分混合,研磨至無顆粒;(2)再
細胞培養實驗室的建立
與其他一般實驗技術的主要區別在于,細胞培養是一種無菌操作技術,要求工作環境和條件必須保證無菌和不受其他有害因素的影響。因此,必須建立一個為細胞體外培養提供無菌環境的細胞培養實驗室。一、實驗室設計原則與要求細胞培養實驗室的工作環境必須清潔、空氣清新,干燥,無煙塵,無微生物污染,不受其他有害因素影響,便
細胞系的建立要求是什么?
什么樣的體外培養群可被認可為己鑒定的細胞,視具體情況而定,無統一規定。對于用作原代培養的細胞只要供體均一,取材部位及組織種類等條件穩定即可,如用做長期培養,特別是反復傳代的細胞,常需做如下說明: 組織來源:細胞供體所屬物種,來自人體或者動物;個體性別、年齡;取材的器官或組織。如系腫瘤組織,應說
干細胞有限細胞系的建立方法介紹
方法:常規分離培養人骨髓間充質干細胞,流式細胞術檢測骨髓間充質干細胞表面分子CD34、CD44、CD45,采用重組逆轉錄病毒載體將腦源性神經營養因子基因轉入人骨髓間充質干細胞。檢測腦源性神經營養因子基因修飾的骨髓間充質干細胞的增殖特性,細胞內腦源性神經營養因子的蛋白表達,細胞培養液中腦源性神經營養因
日本首次建立癌癥干細胞穩定細胞系
近年來,干細胞治療應用研發成熱點■李勤 近日,日本中外制藥株式會社(Chugai)在世界上首次成功建立具有結腸癌干細胞性質的穩定細胞系。 該研究由新加坡Pharma Logicals Research公司、日本Forerunner Pharma Research公司與中外制藥株式
細胞系培養的培養條件和方法
應說明細胞系(或株)適應的生存環境,即指明使用的培養基、血清種類、用量以及適宜PH值。
細胞培養實驗室的建立簡介
與其他一般實驗技術的主要區別在于,細胞培養是一種無菌操作技術,要求工作環境和條件必須保證無菌和不受其他有害因素的影響。因此,必須建立一個為細胞體外培養提供無菌環境的細胞培養實驗室。 一、實驗室設計原則與要求 細胞培養實驗室的工作環境必須清潔、空氣清新,干燥,無煙塵,無微生物污染,不受
懸浮細胞系培養指南
在5月30日尚恩生物直播課程中,劉老師通過專業的講解,讓大家詳細了解了懸浮細胞系通用培養指南相關內容。直播課件請點擊尚恩公眾號—回復關鍵詞“直播課件”領取。直播過程中不僅收獲了大家的滿滿熱情~也收到大家不少的提問,對于大家的疑問小尚這邊都有認真整理,讓劉老師做了詳細解答,如果大家還有其他疑問的也可以
細胞系培養的組織來源
組織來源:細胞供體所屬物種,來自人體或者動物;個體性別、年齡;取材的器官或組織。如系腫瘤組織,應說明臨床和病理診斷,以及病歷號等。
斑馬魚胚胎細胞的培養——細胞系
實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTAZEM-2細胞(或等同物)試劑、試劑盒LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培養液D培養液Holtfreter緩沖液實驗步驟鱒魚胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鱒魚種系
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗
細 胞 培 養 基 成 分 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞(MEF) 的 制 備 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代 采 用 玻 璃 化 方 法 凍 存 h E S 細胞 通 過 焚 光
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗
細 胞 培 養 基 成 分 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞(MEF) 的 制 備 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代 采 用 玻 璃 化 方 法 凍 存 h E S 細胞 通 過 焚 光
培養細胞的染色實驗——蘇木精伊紅染色法
培養細胞可用各種方法染色,有一般和特殊之分;一般染色為觀察細胞一般形態之用,特殊染色為用于觀察細胞的特殊成分和結構的染色方法。內容來源:組織培養和分子細胞學技術。實驗材料蘇木精試劑、試劑盒甘油冰醋酸伊紅銨礬儀器、耗材載玻片蓋玻片實驗步驟1. ?37 ℃溫BSS漂洗3 次,每次20 秒~1 分鐘;中性