斑馬魚胚胎細胞的培養——細胞系
實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTAZEM-2細胞(或等同物)試劑、試劑盒LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培養液D培養液Holtfreter緩沖液實驗步驟鱒魚胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鱒魚種系,在 10°C 條件下飼養,或者受精后 3 天的斑馬魚,在 28°C 條件下飼養),在 -80°C 條件下凍存(b)為了制備提取物,將約 150 g 胚胎融化后,采用 Tissuemizer 勻漿器(Tekmar ) 用 10 ml LDF 在冰上勻漿 2 min(c)將勻漿通過數層紗布過濾后去除絨毛膜,然后在 4°C 條件下離心(20000 g,30 min )(d)離心后收集上清液,留下表面的亮橘色脂層(e)將上清液移入 1 只新離心管,按操作步驟(c ) 離心(f)收集上清液,留下剩余的脂質,然后在 4°C 條件下超速離心(10......閱讀全文
斑馬魚胚胎細胞的培養——細胞系
實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTAZEM-2細胞(或等同物)試劑、試劑盒LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培養液D培養液Holtfreter緩沖液實驗步驟鱒魚胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鱒魚種系
斑馬魚胚胎細胞的培養
成纖維細胞飼養層 原代培養 細胞系 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過用鏈酶蛋白酶除去絨毛膜、用添加成分的 FGF 培養液培養細胞和采用不同的胰蛋白酶消化
斑馬魚胚胎細胞的培養——原代培養
實驗方法原理收集胚胎,除去絨毛膜,用胰蛋白酶分散胚胎細胞,然后在胚胎成纖維細胞飼養層上培養從斑馬魚囊胚和原腸期胚獲得的原代細胞。實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纖維細胞飼養層人重組白血病抑制因子試劑、試劑盒LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培
方案27.6-斑馬魚胚胎細胞的培養
成纖維細胞飼養層 原代培養 細胞系 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過用鏈酶蛋白酶除去絨毛膜、用添加成分的 FGF 培養液培養細胞和采用不同的胰蛋白酶消化
斑馬魚胚胎細胞的培養——成纖維細胞飼養層
實驗方法原理通過用鏈酶蛋白酶除去絨毛膜、用添加成分的 FGF 培養液培養細胞和采用不同的胰蛋白酶消化篩選成纖維細胞,用原腸胚期斑馬龜的胚胎成纖維細胞制備飼養層 [ Sun et al., 1995a ]。實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA受精后8h的胚胎FB
斑馬魚胚胎DNA的制備
材料和試劑1.????????蛋白酶K(羅氏03115836001)2.??????? 1M的Tris,pH值8.33.??????? 氯化鉀4.??????? 吐溫20(10%,EMD4 biosciences,655207)5.??????? NP40(10%,Merck,492018)設備1.
斑馬魚的胚胎原位雜交試驗實錄
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養,到達所需要的發育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗,然后換成甲醇,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧水處理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養,可阻斷色素的形成)原位
組織靶向性胚胎嵌合體—斑馬魚囊胚細胞移植
真核生物的基因調控比原核生物復雜得多。這是因為這兩類生物在三個不同水平上存在著重大的差別:①在遺傳物質的分子水平上,真核細胞基因組的DNA含量和基因的總數都遠高于原核生物,而且 DNA不是染色體中的唯一成分,DNA和蛋白質以及少量的RNA構成以核小體為基本單位的染色質;②在細胞水平上,真核細胞的染色
斑馬魚
一、概述斑馬魚是生長在印度、巴基斯坦淡水河流中的一種硬骨魚(鯉魚),成年魚全身僅長4-5厘米,因全身橫向分布著一道一道褐色的斑馬線而得名。斑馬魚很容易在實驗室飼養,一般3個月就可以達到生殖成熟期,雌魚每次產卵200枚左右,一生可產卵數千枚,斑馬魚所產之卵經24小時即可胚胎發育成熟,仔魚期只有1個月。
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗—人胚胎干細胞系的建立
實驗步驟方 案 2. 6 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立試劑與材料無菌或無菌制備□ 5?6 天的人胚泡,經 H F E A 允許,并且像先前討論的完全經病人同意。 HFEA所要求的全部細節能夠在 H E F A 的網站找到(http//:www.hfea.g0v.uk)。□鏈霉蛋白酶, 0
通過流式細胞儀研究斑馬魚胚胎中細胞周期分析
[精華提要]結合綠色熒光蛋白表達的細胞周期分析廣泛的用于研究綠色熒光蛋白標記的細胞的細胞周期分布。這個方案是一種用綠色熒光蛋白標記的斑馬魚胚胎來分析細胞周期的方法。材料與試劑1.??????? PBS(Invitrogen公司14040)2.??????? 胎牛血清3.??????? 乙醇4.???
人胚胎干細胞系:衍生與培養—小鼠胚胎飼養細胞的制備
實驗步驟2.3 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞(MEF) 的 制 備最廣泛地用于支持 h E S 的伺養層細胞來自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,, 1998;Reu-binoffetal. , 2000],如小鼠胚胎飼養細胞(MEFs) ,盡管它們可能是最原始的間葉細胞的前體細胞
以斑馬魚胚胎為模型-研究胚胎發育早期的自我保護機制
當生物體遇到藥物或化學污染物入侵時,它會應激性地提高自身轉化及外排能力,從而盡快將外源物降解或排出體外,從而實現自我保護,這一作用也被稱作生物體的外源物抵御作用。由于該作用決定了藥物或污染物在體內的停留時間,從而影響了藥物藥效或化學污染物毒性的發生,因而受到藥物學及環境毒理學研究的廣泛關注。
胚胎和成年斑馬魚眼情的組織學準備
INTRODUCTIONThis protocol describes the histological preparation of embryonic and adult zebrafish eyes. The methods described here can be easily adapt
純化和培養能多系分化的斑馬魚神經脊細胞
由廖博士所領導隸屬于哈佛醫學院麻省總醫院的研究者貝斯提?奇尼科魯博士及王亞偉博士第一次培養及描繪由斑馬魚胚胎分離出的神經脊細胞具有多能性的特性。這項重要的研究被報導在2014年二月的實驗生物醫學的期刊上。神經脊細胞是一群獨特的細胞族群,由神經板的橫向邊界所誘導,在胚胎發育及脊椎發育的過程中則須仰
斑馬魚色素細胞如何形成條帶
一項研究發現,斑馬魚的特征條帶反映了這種動物的皮膚上的色素細胞的運動和它們之間的相互作用。盡管科研人員長久以來就注意到了數學模型可以準確地重現動物界的許多特征條帶和斑點,動物圖案背后的生物過程在很大程度上尚未得到解釋。為了更好地理解這些過程,Hiroaki Yamanaka 和Shigeru
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗
細 胞 培 養 基 成 分 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞(MEF) 的 制 備 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代 采 用 玻 璃 化 方 法 凍 存 h E S 細胞 通 過 焚 光
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗
細 胞 培 養 基 成 分 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞(MEF) 的 制 備 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代 采 用 玻 璃 化 方 法 凍 存 h E S 細胞 通 過 焚 光
斑馬魚造血干細胞生成機理
法國家日前通過對斑馬魚胚胎進行即時監控,發現了其造血的生成機理。這一成果為醫學界研究白血病療法提供了新思路。該研究由法國國家中心和巴斯德研究所共同完成。研究人員在最新一期英國雜志上報告說,他們采用即時成像對斑馬魚的胚胎進行了觀察。結果發現,斑馬魚胚胎主動脈的部分內皮細胞先是發生卷曲,隨后蜷縮成一團,
毛冠鹿胚胎有限細胞系的原代培養方法
毛冠鹿細胞原代培養參見施立明等的方法,在無菌條件下取出毛冠鹿胚胎的肺和腎組織,用含雙抗(青霉素、鏈霉素各0.1U/mL)的磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次,去血污,再用GIBCO199培養液洗1次。在無菌培養皿中剪成1mm×1mm×1mm大小的組織塊,置培養瓶中貼壁,翻轉180°,CO2培養箱內靜置3
斑馬魚之后,CRISPR再探哺乳動物胚胎發育史
Researchers have used gene-editing to track the cell-by-cell development of a mouse embryo.Credit: Agnieszka Jedrusik and Magdalena Zernicka-Goetz
《干細胞》:斑馬魚細胞可修復人視網膜
在最新一期的《干細胞》(Stem Cells)雜志上,來自英國的研究人員發現,斑馬魚眼睛中的一類叫做Muller膠質細胞的特殊細胞對對視網膜的再生至關重要,該細胞還有助于視力的恢復。研究人員預言,這種Muller膠質細胞可能用于恢復人類受損視網膜。 已經知道,視網膜損傷是造成失明的主要原因,引起視
斑馬魚出生就識數!
意大利科學家發現,斑馬魚幼魚在孵化后96小時里可以識別不同數量的黑條,研究者表示這一發現表明數字能力可能在新生斑馬魚中是與生俱來的。相關研究3月24日發表于《通訊—生物學》。 過去的研究表明,人類新生兒和新孵化的孔雀魚、小雞(孵化時腦已經高度發育的物種)具有數學能力。但在此之前,人們對新生時處
斑馬魚顯微CT實驗
斑馬魚作為傳統的脊椎動物模型已經廣泛應用于人類疾病和胚胎發育過程的研究,斑馬魚全基因已經完全清楚,與人類基因組有85%同源性,這意味著在斑馬魚身上進行的實驗,其結果很多都適用于人類。斑馬魚與其他實驗常用動物相比,具有較高的繁殖率和生長速率,并且其胚胎發育過程是在體外進行的,科研人員通過顯微鏡直接觀察
斑馬魚基礎研究
近期,我們收到了很多小伙伴提交的文獻獎勵申請,其中,有2篇成功吸引了小編的注意,這2篇文章的內容都是斑馬魚研究相關的。我們都知道,斑馬魚是一種常見的模式生物,但是市面上針對斑馬魚的抗體卻非常少,我們不僅有一百多種斑馬魚抗體,而且還可以根據客戶需求來進行定制生產。下面來看看這2篇文章吧。01標題:Sa
國際首例-他們用光指揮斑馬魚的白細胞
未來,如果你生病了,除了吃藥外,還有更多簡單高效的治療方式可選擇,比如用光照一照身體就能遠程遙控白細胞,從而主動調動身體的免疫能力。這并非科幻。我國科學家已實現了在活體上用光將白細胞變成“醫學微機器人”,可自主控制白細胞的激活和運動,這在國際上是第一例。7月13日,暨南大學李寶軍教授和鄭先創教授
國際首例-他們用光指揮斑馬魚的白細胞
未來,如果你生病了,除了吃藥外,還有更多簡單高效的治療方式可選擇,比如用光照一照身體就能遠程遙控白細胞,從而主動調動身體的免疫能力。這并非科幻。我國科學家已實現了在活體上用光將白細胞變成“醫學微機器人”,可自主控制白細胞的激活和運動,這在國際上是第一例。7月13日,暨南大學李寶軍教授和鄭先創教授研究
毛冠鹿胚胎有限細胞系的傳代培養細胞方法介紹
長成致密單層后,棄去培養液,加入0.25%胰酶2~3mL,37℃消化約1min,棄去胰酶,加入培養液,用吸管反復吹吸至細胞脫落,以1∶2(按原代培養的細胞數)傳代。將胚肺細胞按5.1萬個/mL,胚腎細胞按2.1萬個/mL的濃度分別接種在同一規格的20只培養瓶中,每天取3只培養瓶,胰酶處理,使細胞脫落
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗——hES-細胞的手工傳代
實驗步驟方 案 2.7 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代試劑與材料無菌或無菌制備□ 生 長 于 M E F 之上的未分化的 h E S 細胞集落□ 新 鮮 的 M E F 板(最好是在失活處理后 1?3 天內)□ h E S 培 養 基(見 2. 2. 1 節)□ 50 ul加樣器槍頭□玻璃巴
轉基因斑馬魚的構建
實驗概要本實驗對斑馬魚導入含 EGFP的質粒,觀察其在動物體內的表達情況,在斑馬魚體內,綠色熒光蛋白從原腸胚到出苗期均能在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光。主要試劑EGFP、綠色熒光蛋白基因、pEGFP-N2載體、E.coli主要設備試管、試管架、可調式微量加樣器、電泳儀、電泳槽、染色缸、42℃恒溫水浴箱