以硅膜為基礎分離基因組DNA實驗
硅化學法已成為從小鼠尾剪取物、動物組織和組織培養細胞等樣品中純化高質量基因組 DNA 的方法之一。Wizard SV 基因組 DNA 純化體系是利用一個充有固相硅的濾膜來純化 基因組 DNA 的。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒PBSNa2 HP04KH2PO4NaClKC1消化液 MasterMix蛋白酶 K儀器、耗材自動定位器P250 盒裝吸頭平板密封條Vac-Man96 真空裝置真空泵實驗步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑1XPBS(用于組織培養細胞）將下列試劑溶解于1L消毒的去離子水中，高壓滅菌。1XPBS的pH應為7.4。Na2HP04 1.......閱讀全文
DNA轉化實驗指導5
2C.??Notes on Transformation?1.?????Bacto tryptone and yeast extract can cause allergic reactions.?2.?????All containers used to handle the bacteria (
痘苗病毒DNA提取實驗
如果提取的痘苗病毒DNA用于轉染，則應在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分離。具體方法見本實驗。實驗材料純化的痘苗病毒試劑、試劑盒Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材分光光度計Sorval
DNA轉化實驗指導1
CONTENT?Transformation-Competent?E. coli?preparation???Inoue "ultra-competent" methodRubidium chloride methodCosmid packaging protocol?DNA Ligation an
DNA疫苗實驗方法
For direct gene transfer of tibialis anterior (TA) muscle in mice: It is optimal to use 6-8 week old mice (weight 19-21 gm). Females give better immun
電穿孔轉染－DNA－實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒 Giemsa 染液甲醇磷酸鹽緩沖液丁酸鈉載體 DNA細胞生長培養基儀器、耗材 組織培養皿基因脈沖器 II電穿孔設備與電轉化池Sorvall H1000B 轉子或類似設備實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需
痘苗病毒DNA提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒試劑、試劑盒 Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材 分光光度計Sorvall 離心機實驗步驟 1. 在 260 nm 處確定純化的疸苗病毒的光密
DNA轉化實驗指導3
6.?????Simultaneous digestion of the pUC vector with both enzymes in the presence of 3 units of Shrimp Alkaline Phosphatase (Amersham BioSciences)?in
痘苗病毒DNA提取實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒
電穿孔轉染－DNA－實驗
電穿孔可以有效地轉染磷酸鈣-DNA 沉淀物等其他方法轉染效果不好的細胞系。但是，與其他轉染方法一樣，未使用過的細胞系進行電穿孔轉染的實驗條件要經過優化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒Giem
DNA結合蛋白測定實驗
本實驗主要用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白。實驗方法原理本分析方法是一種簡單、快速和極為靈敏的用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白的方法。在電泳時，與末端標記的DNA片段特異結合的蛋白質阻滯了片段的遷移，因而產生對應于蛋白-DNA復合物的清晰電泳條帶。實驗材料質粒DNA試劑、
質粒DNA大量制備實驗
堿裂解法 平衡離心法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受體細胞一般
質粒DNA大量制備實驗
實驗方法原理?這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒?葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS異丙醇乙醇乙酸甲儀器、耗材?離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟?1.? 往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的L
耐藥質粒－DNA轉化實驗
耐藥質粒 DNA轉化實驗 本實驗學習將質粒DNA分子轉入大腸桿菌的方法及如何篩選帶有質粒DNA的細胞克隆，即轉化子。 【原理】 受體菌Ecoli RRI 在低溫條件下經Ca++ 處理，可改變細胞膜的通透性，利于受體菌對DNA的攝取，這種經Ca++ 處理的細菌稱感受態菌。pBR322 質粒
DNA轉化實驗指導2
1B.??Cloning?1.?????A caveat on dephosphorylation: the most common reason for failure to obtain colonies is a result of adding too much BAP or CIP to
DNA結合蛋白測定實驗
實驗材料 質粒DNA試劑、試劑盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙錠TEMED過硫酸銨BSA儀器、耗材 培養箱離心管實驗步驟 1. ?用一種或多種限制性內切酶在100 μl 體積中消化10 μg 質粒人，產生25~100 bp ?的含有結合位點的DNA片段，并至少有一端是5’突出的
DNA結合蛋白測定實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本分析方法是一種簡單、快速和極為靈敏的用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白的方法。在電泳時，與末端標記的DNA片段特異結合的蛋白質阻滯了片段的遷移，因而產生對應于蛋白-DNA復合物的清晰電泳條帶。
DNA轉化實驗指導4
2B.??Transformation?1.?????Preparation of electrocompetent DH5a?cells:??autoclave 4 baffled 1 liter flasks containing 500 mL LB.??Remove a 1 mL aliquo
電穿孔轉染－DNA－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液 試劑、試劑盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸鹽緩沖液
DNA純化去雜質實驗
這周我們來討論一項常用的技術，即使常用但仍引起部分人核酸分離焦慮癥。那就是基因組DNA的純化去雜質。場景是這樣的：你有一份采自南太平洋中部一個偏僻小島上首次發現的古老蘭花品種根際土壤樣品。你使用了非PowerSoil Kit法提取其中的微生物DNA。最終DNA含有太多雜質，無法PCR擴增。因此需要去
DNA片段的回收實驗
樹脂回收法 微量柱法 液氮凍融法 常規方法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法
DNA重組實驗方法
[實驗原理]DNA重組是將外源DNA與載體分子連接，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法。 重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中，將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。常用的DNA連接酶是T4噬
DNA雜交實驗方法
雜交過程是高度特異性的，可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。其基本原理就是應用核酸分子的變性和復性的性質，使來源不同的DNA（或RNA）片段，按堿基互補關系形成雜交雙鏈分子（heteroduplex）。雜交雙鏈可以在DNA與DNA鏈之間，也可在RNA與DNA鏈之間形成。使雙螺旋解開成
病毒－DNA－的提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 全血試劑、試劑盒 裂解緩沖液 A裂解緩沖液 B蛋白酶 K儀器、耗材 離心機水浴鍋實驗步驟 1. 在 750μl 全血中加入等量裂解緩沖液 A,混勻， 12000 r/min 離心 30 s, 棄上清液。2. 用 1.5mL 裂解緩沖液 A 懸起沉淀，再重復離心 1次，棄上清液
DNA印跡（Southern－Blot)實驗
【實驗原理】DNA印跡是1975年由英國Southern創建的。其基本原理是：DNA分子經限制性核酸內切酶酶切后，由瓊脂糖凝膠電泳將所得 DNA片段按分子質量大小分離，然后將DNA片段變性，并使凝膠中的單鏈DNA片段轉移到尼龍膜、硝酸纖維素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA 片段
DNA的酶切實驗
采用粘末端連接必須對目的DNA分子和載體分子進行酶切以獲得相應的粘末端進行連接。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。單酶切操作比較簡單，但雙酶切如果兩種酶所用緩沖液成分不同（主要是鹽離子濃度不同）或反應溫度不同，這時可以采用如下措施解決：1）先用一種酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一種酶切；2
DNA片段的回收實驗
實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離出來，成為高度無鹽的、不含其他大分子成分的純化片斷。在較寬的分子量范圍內有較高的回收
質粒DNA提取實驗步驟
質粒DNA提取可以：(1)快速純化質粒;(2)用于測序、體外轉錄與翻譯、限制性內切酶消化、細菌轉化等分子生物學實驗。實驗方法原理質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理 轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受
DNA酶切實驗（圖）
采用粘末端連接必須對目的DNA分子和載體分子進行酶切以獲得相應的粘末端進行連接。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。單酶切操作比較簡單，但雙酶切如果兩種酶所用緩沖液成分不同（主要是鹽離子濃度不同）或反應溫度不同，這時可以采用如下措施解決： 1）先用一種酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一種酶切