DNA結合蛋白測定實驗
實驗材料 質粒DNA試劑、試劑盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙錠TEMED過硫酸銨BSA儀器、耗材 培養箱離心管實驗步驟 1. 用一種或多種限制性內切酶在100 μl 體積中消化10 μg 質粒人，產生25~100 bp 的含有結合位點的DNA片段，并至少有一端是5’突出的。2. 加100 μCi［α-32P］dNTP，4μl 5 mmol/l 3種NTP的混合液，2.5U Klenow酶。室溫溫育20 min。 3. 加4 μl 含有5 mmol/l 與被標記的相同的dNTP溶液，室溫溫育5 min。4. 沉淀DNA，溶解于TE中。 5. 加10×加樣緩沖液，用2%小型瓊脂凝膠（含溴化乙錠5 μg/ml）在TAE或TBE緩沖液中進行電泳。 6. 在長波透射紫外燈下觀察電泳帶。在帶的下游切一平行......閱讀全文
DNA結合蛋白測定實驗
本實驗主要用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白。實驗方法原理本分析方法是一種簡單、快速和極為靈敏的用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白的方法。在電泳時，與末端標記的DNA片段特異結合的蛋白質阻滯了片段的遷移，因而產生對應于蛋白-DNA復合物的清晰電泳條帶。實驗材料質粒DNA試劑、
DNA結合蛋白測定實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本分析方法是一種簡單、快速和極為靈敏的用于檢測粗制提取物中序列特異性的DNA結合蛋白的方法。在電泳時，與末端標記的DNA片段特異結合的蛋白質阻滯了片段的遷移，因而產生對應于蛋白-DNA復合物的清晰電泳條帶。
DNA結合蛋白測定實驗
實驗材料 質粒DNA試劑、試劑盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙錠TEMED過硫酸銨BSA儀器、耗材 培養箱離心管實驗步驟 1. ?用一種或多種限制性內切酶在100 μl 體積中消化10 μg 質粒人，產生25~100 bp ?的含有結合位點的DNA片段，并至少有一端是5’突出的
DNA－結合蛋白的凝膠阻滯分析實驗
凝膠阻滯試驗分析 DNA 結合蛋白的方法是 Fried 和 Crothers(1981) 發明的，它是第一次為大腸桿菌乳糖阻抑物與其 DNA 結合位點的相互作用提供了動態的分析方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料作為對照的核提取物
DNA－結合蛋白的凝膠阻滯分析實驗
實驗材料 作為對照的核提取物或蛋白組分核提取物或蛋白組分試劑、試劑盒 Ficoll 400聚乙烯醇蔗糖染色液10X Tris-氨基乙酸或Tris-硼酸-EDTA(TBE)緩沖液4%~7% 中性聚丙烯酰胺凝膠poly(dI-dC)32P標記的對照DNA32P標記的靶DNA儀器、耗材 雜交膜實驗步驟 材
DNA－結合蛋白的凝膠阻滯分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 作為對照的核提取物或蛋白組分 核提取物或蛋白組分 試劑、試劑盒 Ficoll 400 聚
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
可利用合成雙鏈寡核苷酸篩選構建于λ噬菌體的 cDNA 表達文庫，以鑒定與特異 DNA 結合蛋白質相對應的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒ATP結合緩沖液變性溶
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
試劑、試劑盒 ATP結合緩沖液變性溶液二硫蘇糖醇EDTA乙醇激酶 連接酶緩沖液酚氯仿篩選緩沖液SDS醋酸鈉TET4 噬菌體 DNA 連接酶T4 噬菌體多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非變性聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 烤盤結晶皿平頭鑷子裝有防水黑墨水注射器硝酸纖維素濾膜Sephadex G
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP 結合緩沖液 變性溶液 二硫蘇糖醇 EDTA 乙醇激酶 連接酶緩沖液 酚 氯
什么是DNA結合蛋白？
中文名DNA結合蛋白外文名DNA binding protein別????名螺旋失穩蛋白形????成解鏈酶類中的一種類型結合效應DBP與單鏈DNA的結合作????用該單鏈DNA結合和識別作用
DNA結合蛋白的形成
它是解鏈酶(unwinding enzyme)類中的一種類型，發現于原核生物的大腸桿菌細胞內，由相同亞基組成的四聚體，分子量8×104，與單鏈DNA親和力極大，與雙鏈DNA結合力較差。因此，當DNA發生暫時性熔化時，它與DNA單鏈區結合而促使反應偏向單鏈的形成，使DNA在大大低于Tm(解鏈溫度)的溫
結合DNA的蛋白質
結構蛋白可與DNA結合，是非專一性DNA-蛋白質交互作用的常見例子。染色體中的結構蛋白與DNA組合成復合物，使DNA組織成緊密結實的染色質構造。對真核生物來說，染色質是由脫DNA與一種稱為組織蛋白的小型堿性蛋白質所組合而成；而原核生物體內的此種結構，則摻雜了多種類型的蛋白質。DNA可在組織蛋白的表面
序列特異性DNA結合蛋白親和層析純化實驗DNA親和介質制備
實驗材料兩種帶有結合位點的合成寡核苷酸各440μg試劑、試劑盒TE緩沖液 pH 7.810×T4噬菌體多核苷酸激酶緩沖液20 mmol L ATP (鈉鹽） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌體多核苷酸激酶（New Eng
序列特異性DNA結合蛋白的親和層析純化實驗
實驗方法原理 實驗材料 兩種帶有結合位點的合成寡核苷酸各440μg試劑、試劑盒 TE緩沖液 pH 7.810×T4噬菌體多核苷酸激酶緩沖液20 mmol L ATP (鈉鹽） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌體多
編碼DNA結合蛋白的cDNA克隆的檢測、純化和鑒定實驗
實驗方法原理 實驗材料 含有多個串聯拷貝識別位點的、缺乏識別位點的（或含識別位點突變的）pUC重組質粒DNA試劑、試劑盒 限制性內切核酸酶EcoRI及HhdIII1 mol L Tris ? Cl pH 7. 55 mmol L dCTPdGTPdTTPdATP5000 Ci mmol [α32P]
編碼DNA結合蛋白的cDNA克隆的檢測、純化和鑒定實驗
用鹽酸胍進行干燥膜的變性/復性循環試劑、試劑盒HEPES結合緩沖液實驗步驟1) 按基本方案步驟1?15進行。2) 將平皿在4℃冷卻10 min。用針扎孔標記各膜的位置。小心地揭起膜，室溫下在空氣中瞭干15 min。3) 將膜浸于HEPES結合緩沖液/6 mol/L鹽酸狐中，4℃輕輕搖動溫育10 mi
編碼DNA結合蛋白的cDNA克隆的檢測、純化和鑒定實驗
從重組溶源菌中制備粗提物鑒定DNA結合蛋白的活性實驗材料大腸桿菌 Y1089試劑、試劑盒含有或不含10 mmol L MgCl2的LB培養液1010pfu mLλgtU重組噬菌體液1 mol L IPTG抽提緩沖液5 mg mL溶于抽提緩沖液中的溶菌酶（保存于-20℃)儀器、耗材4 mol L Na
編碼DNA結合蛋白的cDNA克隆的檢測、純化和鑒定實驗
用位點識別DNA篩選λgtll表達文庫 用鹽酸胍進行干燥膜的變性/復性循環 從重組溶源菌中制備粗提物鑒定DNA結合蛋白的活性 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
序列特異性DNA結合蛋白的親和層析純化實驗
DNA親和介質的制備 DNA偶聯于溴化氰活化的瓊脂糖上 用制備性凝膠電泳純化寡核苷酸 DNA親和層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
單鏈DNA結合蛋白的功能簡介
單鏈DNA結合蛋白（Single-stranded DNA-binding protein，縮寫SSB或SSBP）又稱單鏈結合蛋白，是專門負責與DNA單鏈區域結合的一種蛋白質，為DNA復制、重組和修復所必需的成分。 防止兩條互補單鏈再次結合為雙螺旋，維持單鏈狀態。防止單鏈區域形成鏈內二級結構。
DNA結合蛋白的磷酸化研究
磷酸化化學計量的確定及磷蛋白形成動力學的測定l??????磷酸化作用化學計量的確定1．在冰上建立下列反應混合液：Tris-HCl（50mmol/L；pH8.0）/MgCl2（10mmol/L）????????250μlATP（10mmol/L）????????????????????????????
DNA－酶－I－足跡法對－DNA－上的蛋白質結合位點作圖實驗
本方案介紹在放射性標記的 DNA 片段上確定蛋白質結合位點的作圖方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羥自由基斷裂 DNA。如果希望得到優化足跡法反應的建議，請參見本方案最后部分的疑難解析以及優化 DNA 酶 I 足跡法反應的欄目。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）
DNA－酶－I－足跡法對－DNA－上的蛋白質結合位點作圖實驗
實驗材料 新鮮組織、培養的細胞、來自細胞或組織的蛋白成分試劑、試劑盒 細胞勻漿緩沖液細胞重懸緩沖液細胞淋洗緩沖液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚：氯仿磷酸鹽緩沖液聚乙烯醇終止液組織勻漿液組織重懸緩沖液臺盼藍染料DNA 酶 I
序列特異性DNA結合蛋白親和層析純化實驗_DNA親和層析法
實驗材料制備性的DNA親和層析樹脂試劑、試劑盒緩沖液Z或其他柱緩沖液（如緩沖液Ze或TM)配制時含不同的KCl濃度（從緩沖液 Z 0.1 mol L KCl 至緩沖液 Z 1 mol L KCl對緩沖液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分純化的蛋白質組分非特異性的競爭DNA柱再生緩沖液柱儲存緩
DNA－酶－I－足跡法對－DNA－上的蛋白質結合位點作圖實驗
DNA 酶 I 足跡法對 DNA 上的蛋白質結合位點作圖實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 新鮮組織、培養的細胞、來自細胞或組織的蛋白成分
斑點濾膜結合法測定蛋白質濃度實驗
實驗方法原理 實驗材料 待測蛋白質樣品試劑、試劑盒 10％三氯醋酸（TCA）考馬斯亮藍凝膠染色液考馬斯亮藍凝膠脫色液儀器、耗材 Whatman 3 MM 濾紙實驗步驟 1. 用鉛筆在 3 mm 濾紙上畫出 1 cm x 1 cm 大小的方格；2. 在每一方格中心加入 3 ul 樣品；3. 將濾紙涼干
吲哚與牛血清白蛋白的結合測定實驗
實驗方法原理 平衡滲透的原理可以通過經典的實驗來驗證。牛血清白蛋白（BSA）是一種比較廉價的大分子物質，可以大量獲得。因此可以用不太靈敏的方法來測定，而無需化學轉化或放射性同位素標記。結合常數 Kd 和每個白蛋白分子上的結合位點數 n 都能有效精確地獲得。然而由于這種實驗方法的原因可能引起誤
吲哚與牛血清白蛋白的結合測定實驗
實驗方法原理平衡滲透的原理可以通過經典的實驗來驗證。牛血清白蛋白（BSA）是一種比較廉價的大分子物質，可以大量獲得。因此可以用不太靈敏的方法來測定，而無需化學轉化或放射性同位素標記。結合常數 Kd 和每個白蛋白分子上的結合位點數 n 都能有效精確地獲得。然而由于這種實驗方法的原因可能引起誤差，實驗時
斑點濾膜結合法測定蛋白質濃度實驗
斑點濾膜結合法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 待測蛋白質樣品
吲哚與牛血清白蛋白的結合測定實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 平衡滲透的原理可以通過經典的實驗來驗證。牛血清白蛋白（BSA）是一種比較廉價的大分子物質，可以大量獲得。因此可以用不太靈敏的方法來測定