翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗4
五、質 譜 分 析質譜儀器的多種設計和配置都支持蛋白質組的動態性質及其相關 P T M 的研究工作 。對 鑒 定 PTM 而言，質譜儀的最重要的兩個特征（feature) 就是其質量準確度和分辨率 。與蛋白質鑒定不同 (其通常是基于鑒定同一蛋白質中的多個獨立肽段)P T M 必須通過單獨的 MS/M S 譜圖來鑒定。 J ohn Y ates 及其研究團隊發展了一些方法，利用不同酶獨立消化產生的重疊肽段增加序列覆蓋度，以減少繪制修飾圖譜時的不確定性 (MacCosset al., 2002; W u et al.， 2003)。盡管大量重復的肽段序列減少了不確定性, 但是這一方法仍需要足夠的起始材料以用于多次質譜分析。由 于 P T M 的鑒定及其在肽段上的定位通常依賴于單一的 M S /M S 譜 ，因此具備高質量準確度和分辨率的質譜儀有著明顯的優勢 (Clauser etal. ， 1999; H a a s e t a L......閱讀全文
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗4
五、質 譜 分 析質譜儀器的多種設計和配置都支持蛋白質組的動態性質及其相關 P T M 的研究工作 。對 鑒 定 PTM 而言，質譜儀的最重要的兩個特征（feature) 就是其質量準確度和分辨率 。與蛋白質鑒定不同 (其通常是基于鑒定同一蛋白質中的多個獨立肽段)P T M 必須通過單獨的 MS/M
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 一、引言 蛋 白 質 翻 譯 后 修 飾 (P T
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗
蛋白質翻譯后修飾 (PTM) 在細胞生物調節中發揮著基本作用。PTM 是 mRNA 翻譯后蛋白質的酶促共價化學修飾。蛋白質化學修飾非常重要，因為它們會潛在地改變蛋白質的物理或化學性質、組成、活性、細胞定位或穩定性。實際上，在氨基酸或蛋白質的 N 端或 C 端加入或移除化學基團會導致大部分蛋白質發生變
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗3
三、蛋白質的硝化修飾 酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸側鏈的硝化與亞硝化作用構成了蛋白質硝化PT M 的主要部分。這些加成反應由發育、氧化應激及衰老過程中產生的活性氮介導。活性氮的增加是由一氧化氮和活性氧的過度反應或調控紊亂造成的（Yeo et al.，2008)。活性氮和活性氧能夠靶向于DN
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（三）
2.2 糖基化糖 基 化 是 一 種 常 見 的 P T M , 并 且 已 經 證 明 能 夠 影 響 酶 的 活 性 、蛋 白 質 定 位 、穩 定 性 、信 號 轉 導 、細 胞 黏 附 和 蛋 白 質 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 經 發 現 在 腫 瘤 惡
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗5
六、CID、ECD和 ETD的對比基于質譜的蛋白質組學分析依賴于氣相中肽段在低碰撞能量下斷裂, 在質量譜圖中形成峰。進而通過峰圖確定肽段序列，再推斷出相關蛋白質。完成肽段斷裂最主要的方法就是碰撞誘導解離（collision induced dissociation，C I D ) ( S w a n
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗6
七、P T M 的定量分析 當研究 P T M 的生物學意義時，如能了解一個特定修飾或一組P T M 的相對或絕對豐度通常會有幫助。這樣可以將不同的生物樣品間的目的修飾進行直接比較。例如, 將正常與疾病狀態下細胞或組織內某一 P T M 的豐度進行比較。定量分析這些變化能夠幫助
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（四）
三、蛋白質的硝化修飾酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸側鏈的硝化與亞硝化作用構成了蛋白質硝化PT M 的主要部分。這些加成反應由發育、氧化應激及衰老過程中產生的活性氮介導。活性氮的增加是由一氧化氮和活性氧的過度反應或調控紊亂造成的（Yeo et al.，2008)。活性氮和活性氧能夠靶向于D
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗6
七、P T M 的定量分析當研究 P T M 的生物學意義時，如能了解一個特定修飾或一組P T M 的相對或絕對豐度通常會有幫助。這樣可以將不同的生物樣品間的目的修飾進行直接比較。例如, 將正常與疾病狀態下細胞或組織內某一 P T M 的豐度進行比較。定量分析這些變化能夠幫助深人了解 P T M 在
翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（二）
二、用 于 鑒 定 P T M 的富 集 技 術2.1 磷酸化絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基的可逆磷酸化也許是研究最為深人的 PT M 。蛋白質磷酸化信號網絡介導細胞對與不同的應激因子、生長因子、細胞因子以及細胞間相互作用作出響應。憐酸化還影響多種細胞進程，如增殖、凋亡 、遷移 、轉錄和蛋白