總細胞RNA的提取方法
實驗概要總細胞RNA的提取在建庫過程中，由于cDNA合成這一步將使用通用引物oligo dT，因此在總RNA提取這一步中，提取純化mRNA不是非常必要的。提取高純度的總細胞RNA足可以被用作cDNA合成的模板，目前提取RNA的方法很多，也有不少商業化的試劑盒。實驗步驟1. TRIZOL法 1) 在制備的帶有細胞沉淀的Eppendorf管中加入1ml TRIZOL溶液，用手反復搖勻至細胞碎塊完全被裂解，如不易完全裂解，可用移液器帶有1ml無菌吸頭反復吹打、研磨，至組織細胞完全裂解，液體基本澄清為止，必要情況下，可再次加入少許TRIZOL溶液。 2) 將上述Eppendorf管置室溫(25~27℃)靜置15~20min后(也可置4℃較長時間)，每管加入0.2ml氯仿(0.2ml/ml)，在手中反復振蕩搖勻，室溫靜置10min。 3) 將Eppendorf管置......閱讀全文
RNA干涉(RNA Interference，RNAi)（1）
基因沉默（gene silencing）是生物體內特定基因由于種種原因不表達的遺傳現象。一方面，基因沉默是生物遺傳操作創造新的遺傳修飾生物（genetically modified organisms）的障礙，另一方面，它又是植物抵抗外來核酸入侵（如病毒）的一種反應，為植物抗病毒的遺傳育
RNA干涉(RNA Interference，RNAi)（2）
早期的 RNAi 技術可用在研究與胚胎發育相關基因的功能上，但是由于細胞分裂造成 dsRNA 的稀釋，使得這種方法在研究成體的基因功能時有一定的局限性。為彌補早期 RNAi 技術的不足，Tavernarakis 等將 RNAi 技術做了一些改進及更動，將目的基因之標的序列以反向重復的方式，由
RNA干擾技術(RNA interference，RNAi)
1995年，康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲（C. elegans）中的par-1基因時，發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達，而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA（sense RNA）以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
RNA提取時RNA降解原因
1 ) 新鮮細胞： 裂解液的量不足，使得裂解不充分。 2 ) 新鮮組織： 某些含有內源性核酸酶的樣品，很難避免RNA酶的降解，建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎，并且，勻漿時采用更多的裂解液。 3 ) 冷凍樣品： 樣品取材后應該迅速置于液氮中冷凍存放，然后轉移到-70℃冰箱存
RNA提取心得（組織RNA提取和培養細胞的RNA提取）
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好，這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的（最好在半年之內，-80℃或者液氮中凍存的）組織，注意不要反復凍融，從冰凍狀態拿到0-4℃，注意不要拿到常溫，待組織解凍后，用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織，稱重后，放到預冷的勻漿器中，然后
RNA干擾相關知識--RNA-RITS）
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing（RITS）：是一種組織染色質變型的復合物。RITS復合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白質，通過結合到異染色質的基因池上來促使異染色質上基因的沉默。
RNA干擾相關知識--RNA-RISC
RNA-induced silencing complex（RISC）：一種RNA-蛋白質復合物，通過與目標mRNA完全或者部分的互補配對來實施切割或者翻譯抑制功能。SiRNA組裝siRISC，miRNA組裝miRISC。RISCs（無論siRISC還是miRISC）包括兩種類型：切割型和不切割型。
RNA分離與分析實驗_分離RNA
實驗材料標記細胞試劑、試劑盒乙酸緩沖液儀器、耗材漩渦器實驗步驟1. 收獲標記細胞。2. 小心處置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸緩沖液懸浮細胞沉淀，每 1 ml 壓積細胞用 10 ml 緩沖液。3. 于室溫用漩渦器振蕩裂解細胞。4. 加等體積的水飽和酚，充分混勻，于 60
反義技術——RNA干擾（RNA interference，RNAi）
最近由于RNA干擾（RNA interference，RNAi）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在RNAi領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA干擾是由長的雙鏈 RNA
RNA Electrophoresis
Electrophoresis through agarose or polyacrylamide gels is the standard way to separate, identify and purify nucleic acid fragments. The location