常用酶的配制
實驗概要常用酶的配制實驗步驟1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經使用后便予丟棄。2．蛋白水解酶類 a：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，經自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml濃度，于37℃溫育1h。經消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20℃。 c：蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中純化得到。該酶有兩個Ca2 結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關系。然而，如果從該酶中除去......閱讀全文
常用酶的配制
實驗概要常用酶的配制實驗步驟1．溶菌酶 ?? 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經使用后便予丟棄。2．蛋白水解酶類 a：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b：自消化可消除DN
常用酶的配制
1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經使用后便予丟棄。 2．蛋白水解酶類 貯存液 貯存溫度 反應濃度 反應緩沖液 溫度 預處理 0.01mol/L Tris(pH7.8)
常用酶標記法介紹
酶與抗體交聯，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行，標記效果好，特別適用于實驗室的小批量制備。其標記程序為：將5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配制的0.06 mol/L的過碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鐘 ， 取出
常用的酶有哪些？
常用的酶有：1.辣根過氧化物酶（HRP）： 目前酶聯免疫吸附試驗中應用最廣泛的標記用酶。由無色的糖蛋白(主酶)和亞鐵血紅蛋白(輔基)結合而成的復合物。輔基是酶活性基團，而主酶則與酶活性無關，HRP的純度用RZ(HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值)表示，RZ值應大于3.0 。RZ值僅說明
常用的酶和常用的底物有哪些？
常用的酶1.辣根過氧化物酶（HRP）：目前酶聯免疫吸附試驗中應用最廣泛的標記用酶。由無色的糖蛋白（主酶）和亞鐵血紅蛋白（輔基）結合而成的復合物。輔基是酶活性基團，而主酶則與酶活性無關，HRP的純度用RZ（HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值）表示，RZ值應大于3.0。RZ值僅說明血紅素基
免疫酶技術中常用的酶底物系統
各種免疫酶技術,最終都是以某種顯色反應而揭示待測物質來進行定性和定量分析。不同酶要選擇相應的底物,見下表。免疫酶技術中常用的酶-底物系統酶底物顯色反應測定波長/nm辣根過氧化物酶二氨基聯苯胺深褐色沉淀5-氨基水楊酸棕色449鄰苯二胺橘紅色492/460鄰聯甲苯胺藍色4254-硝基酚磷酸黃色400堿性
酶活力測定常用的方法
酶活力測定常用的方法有終點法和動力學方法兩類。終點法測定完成一定量反應所需的時間，如α-淀粉酶的活力測定。因為碘對淀粉呈現藍色反應，當淀粉溶液中加入淀粉酶后，碘的藍色反應消失而呈現紅棕色;碘對淀粉顏色反應消失的時間可表示淀粉酶活力的大小。碘對淀粉顏色反應消失花的時間越短，表示酶的活力越高。動力學方法
常用血清酶和同工酶測定有哪些？
1.連續監測法測定血清肌酸激酶（CK）2.連續監測法測定乳酸脫氫酶（LD）總活性3.連續監測法測定血清（天）門冬氨酸氨基轉移酶（AST）4.連續監測法測定血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）5.連續監測法測定血清堿性磷酸酶（ALP）6.連續監測法測定血清中谷氨酰基轉移酶（GGT）7.淀粉酶（AMY）測定8
臨床常用血清酶同工酶及其亞型分析
? ? 臨床上可根據酶濃度的變化用以輔助診斷。若酶濃度變化由細胞壞死或細胞膜通透性變化引起，表示臟器或組織損傷；若為細胞內酶合成增加所致，提示組織再生、修復、成骨或異位分泌，或提示有惡性腫瘤的可能；若為酶排泄障礙引起者說明有梗阻存在。同工酶的分析與鑒定則能反應疾病的部位、性質和程度。一、轉氨酶及其同
臨床常用血清酶同工酶及其亞型分析
??? 臨床上可根據酶濃度的變化用以輔助診斷。若酶濃度變化由細胞壞死或細胞膜通透性變化引起，表示臟器或組織損傷；若為細胞內酶合成增加所致，提示組織再生、修復、成骨或異位分泌，或提示有惡性腫瘤的可能；若為酶排泄障礙引起者說明有梗阻存在。同工酶的分析與鑒定則能反應疾病的部位、性質和程度。一、轉氨酶及其同
臨床常用血清酶同工酶及其亞型分析(3)
（三）測定方法目前根據LD催化反應方向的不同，有兩大類測LD方法，一大類為以丙酮酸為底物（反應方向P?L）的逆向反應（稱LD-P法）；另一大類以乳酸為底物（反應方向L?P）的順向反應（稱LD-L法）。臨床上測定LD及其同工酶常用于診斷和鑒別診斷心、肝和骨骼肌的疾病。LD同工酶測定常用電泳法、免疫沉淀
臨床常用血清酶同工酶及其亞型分析(2)
二、γ-谷氨酰轉移酶及其同工酶（一）生物化學特征g-谷氨酰轉移酶（γ-GT或GGT）又稱γ-谷氨酰轉肽酶（γ-GTP或GGTP），是一種含巰基的線粒體酶。組織分布以腎臟含量最多，其次為胰、肺、肝等。血清中的γ-GT則主要來自肝膽，紅細胞中幾乎無γ-GT，因此溶血對其測定影響不大。（二）測定方法目前國
基因工程常用的工具酶1
一、限制性核酸內切酶（restriction endonuclease）1．定義：凡能識別和切割雙鏈DNA分子內特定核苷酸序列的酶，也稱為限制酶（restriction enzyme，RE）。2．類型：來自原核生物，有三種類型。Ⅰ型：兼具甲基化修飾和ATP參與的核酸內切酶活性，隨機切割。Ⅱ型：大多能
基因工程常用的工具酶2
①增加限制酶的用量，平均每微克底物DNA可高達10單位甚至更多。②增加酶反應體系的體積，以使潛在的抑制物被相應的稀釋。③延長酶解反應的保溫時間。④向反應體系中添加亞精胺（spermidine）（終濃度為1~2.5mmol/L），亞精胺與負電性的雜質結合。注意，亞精胺在4℃時會沉淀DNA，因此最好在反
常用的轉換酶抑制劑有哪些
第一代轉換酶抑制劑為卡托普利，是最早應用于臨床的轉換酶抑制劑，現已廣泛應用于高血壓和心衰的治療。對輕、中度高血壓均適用。用于降壓時，開始劑量 12.5～25mg，每日 3 次口服，有效劑量為每日 50～ 150mg。加用利尿劑（如雙氫克尿噻）、 β受體阻滯劑（如普萘洛爾、美托洛爾等），療效更佳。本品
酶活性測定法的常用方法介紹
常用的測定方法有取樣法和連續法。 取樣法是在酶反應開始后不同的時間，從反應系統中取出一定量的反應液，并用適當方法停止其反應，再根據產物和底物在化學性質上的差別進行分析，求得單位時間內酶促反應的變化量。 連續法則是基于底物和產物在物理化學性質上的不同，在反應過程中對反應系統添加酶的變性劑以終止
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種： （1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種： （1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易
酶的生產中通常用什么方法去除雜質？
酶提取液中常含有雜蛋白、多糖、脂類及核酸等雜質，可用下述方法去除：調PH和加熱法：利用蛋白質對酸、堿和熱變性方面性質的差異，可去除非活性雜蛋白。如制備脂肪酶時，在pH 3-4時以400℃溫度加熱150 min，淀粉酶活力可喪失90%而被除去，而脂肪酶活力仍保持80％以上。蛋白質表面變性法：蛋白質表面
細胞組織消化常用的幾種酶的選擇
直接從生物體獲取的組織，一般需要將其消化成單個細胞才能進行體外培養。這種直接從離體組織獲得的細胞，更接近于生物體內的生活狀態，且生物性狀尚未發生很大改變，因此在藥物篩選、細胞移植、類器官培養、腫瘤研究等眾多領域備受歡迎。但組織消化過程中常遇到多種問題，例如消化不完全、細胞死亡率高等。如何克服這些問題
抗壞血酸氧化酶活性常用的測定方法
酶活性以酶活單位(酶活單位為lmin氧化1 g還原性抗壞血酸的酶量)表示,即酶活單位/g鮮重。常用的測定方法是碘量法,這是一種經典的方法,所用儀器簡單,準確性高；二是分光光度法,這種方法靈敏度和準確性高,重演性好,用途廣,選擇性好；三是氧電極分析法,該法靈敏度高,準確性好,但是氧電極對溫度變化非
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種：（1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易變色，需新
胰腺酶和胰外分泌功能檢測常用的實驗
（1）血清淀粉酶、尿淀粉酶、淀粉酶同工酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶等測定。（2）糞便中氮、脂肪、胰酶等檢測。（3）十二指腸內容物檢查。（4）促胰酶素－促胰液素試驗（P－Stest）。（5）對氨基苯甲酸試驗（Bz－Ty－PABA實驗）和熒光素試驗。實際應用最多的還是血清酶和尿酶的檢查。胰腺有很大的儲備、代償
胰腺酶和胰外分泌功能檢測常用的實驗
（1）血清淀粉酶、尿淀粉酶、淀粉酶同工酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶等測定。（2）糞便中氮、脂肪、胰酶等檢測。（3）十二指腸內容物檢查。（4）促胰酶素－促胰液素試驗（P－Stest）。（5）對氨基苯甲酸試驗（Bz－Ty－PABA實驗）和熒光素試驗。實際應用最多的還是血清酶和尿酶的檢查。胰腺有很大的儲備、代償
蛋白質提取過程中常用蛋白酶和磷酸酶抑制介紹
在與蛋白相關的檢測中，最關鍵的一步便是蛋白質的提取。在提取的過程中，我們要經常加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白質的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可少的。?本文詳細總結了常用的蛋白酶抑制劑PMSF、Leupeptin亮肽素、Aprotinin抑肽酶、Pepstatin胃蛋白酶抑制劑
蛋白質提取過程中常用蛋白酶和磷酸酶抑制介紹
?在與蛋白相關的檢測中，zui關鍵的一步便是蛋白質的提取。在提取的過程中，我們要經常加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白質的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可少的。?? ? ? ?本文詳細總結了常用的蛋白酶抑制劑PMSF、Leupeptin亮肽素、Aprotinin抑肽酶、Pepsta
免疫熒光技術的常用酶作用生物質有哪些？
酶 底物 產物 激發光 發射光Β-G MUG MU 360 450AP MUP MU 360 450HRP HPA?二聚體?317 414
Realtime－PCR實驗注意事項（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...1
實驗中的一些好習慣 加入試劑之前,把它混勻一下,以免放置時間長了濃度不均 移液槍用完之后要歸到最大計量的位置，防止久而久之彈簧失去彈性 一定要記著關水浴箱，切記切記 多和大家討論，同時多關注別人討論的經驗，這幾乎是最快提高的捷徑了 所有的試劑都自己配
Realtime－PCR實驗注意事項（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...2
[注意] 1、整個操作要帶口罩及一次性手套，并盡可能在低溫下操作。另外，提取上清這步一定要小心，靠近沉淀的部分一定要舍得不要，要不然會有蛋白質污染，影響比值2、加氯仿前的勻漿液可在-70℃保存一個月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。總mRNA的提取(自己的經驗)一、關
Realtime－PCR實驗注意事項（防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...3
DEPC處理方法如下：1.DEPC處理（1）DEPC水：100ml超純水加入0.2ml DEPC，充分混勻，高壓滅菌。（2）Tip頭(槍頭）、EP管等在提RNA過程中及做RT時接觸RNA的器材（包括1ml、200μl、20μl Tip頭；EP管和PCR反應管等）：用0.1%的DEPC水（1000 m