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    RealtimePCR實驗注意事項(防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...3

    DEPC處理方法如下:1.DEPC處理(1)DEPC水:100ml超純水加入0.2ml DEPC,充分混勻,高壓滅菌。(2)Tip頭(槍頭)、EP管等在提RNA過程中及做RT時接觸RNA的器材(包括1ml、200μl、20μl Tip頭;EP管和PCR反應管等):用0.1%的DEPC水(1000 ml超純水加入1ml DEPC)37℃浸泡過夜,高壓滅菌。2.提取RNA,用DEPC水溶解3.RT我是用PCR儀來控制溫度和時間的,所以RT是在PCR反應管中作的。4.操作過程中要戴一次性手套,并經常換手套。最好把要直接接觸樣品的東西都用DEPC水處理一下,槍頭盒插好槍頭后,加入1-2ml的0.1轕C水,在滅菌就行了;現在有進口的RNASE FREE的槍頭買,直接用不用處理的如何消除污染機器運行完后,取出PCR產物時不能隨便丟棄,應該用塑料手套或其他打結包好后丟入垃圾桶。(1) 試劑:mixer盡量分裝,不要原瓶多次取用。(2)加樣:原......閱讀全文

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    shRNA干擾載體構建

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    RNA干擾載體主要用來研究基因表達調控,RNA干擾技術已已被廣泛用于基因結構功能研究和傳染性疾病及基因治療領域,進行RNA干擾實驗首先是構建RNA干擾載體,本文以pRI系列載體為例論述了干擾載體的構建的實驗流程。產品技術背景pRI系列載體是基于III類rna聚合酶啟動子:人類H1啟動子的專用于哺乳動

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    One Step RT- PCR PreMix(染料法)使用說明

    One Step RT- PCR PreMix(染料法) 使 用 說 明 書 【前言】 本產品提供了一個靈敏、高效、快速地擴增并檢測 RNA 的完整系統。One Step RT- PCR preMix 包含所有 RT-PCR 所需的、并經優化的 Reaction Buffer、RT 酶混合物等,使用

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      標簽: 實時 熒光定量 PCR realtime PCR 本生生物   所謂實時熒光定量 PCR 技術,是指在 PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個 PCR 進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。   原理及材料:   實驗材料:細胞樣品   試劑、

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    實驗步驟一、 樣品RNA的抽提 1.  取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。2.  兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分

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