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  • 雙重PCR毛細管電泳法快速檢測大豆中轉基因成分

    【摘要】 目的建立抗草甘膦轉基因大豆的快速檢測方法。方法:針對轉基因大豆基因組中被導入的35S啟動子、NOS終止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行設計了兩對引物,采用雙重PCR同時擴增上述基因,用8g/L羥丙基甲基纖維素為篩分介質,在50cm×100μm i.d.涂壁毛細管中,于一10kV電壓下用激光誘導熒光-毛細管電泳檢測轉基因大豆的PCR擴增產物。結果在優化的PCR反應和毛細管電泳條件下,本法可以同時檢測出轉基因大豆樣品中三種外源基因,雙重PCR擴增產物經測序證實與原基因序列完全一致,表明本研究設計的引物合理,擴增結果可靠。毛細管電泳進樣量僅需5nl,分析時間為24min,遷移時間的相對標準偏差≤3.2。結論本方法較常規瓊脂糖凝膠電泳特異性高,分析時間短,重現性好,檢測靈敏,適合于大豆中轉基因成分的快速檢測。【關鍵詞】雙重PCR;激光誘導熒光-毛細管電泳;轉基因大豆PCR產物檢測;羥丙基甲基纖維素隨著轉基因農......閱讀全文

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