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    PCR技術(五):常見問題分析與對策

    PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內,有些最好于當日電泳檢測,大于48h后帶型不規則甚致消失。 假陰性,不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備,②引物的質量與特異性,③酶的質量及, ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板:①模板中含有雜蛋白質,②模板中含有Taq酶抑制劑,③模板中蛋白質沒有消 化除凈,特別是染色體中的組蛋白,④在提取制備模板時丟失過多,或吸入酚。⑤模 板核酸變性不徹底。在酶和引物質量好時,不出現擴增帶,極有可能是標本的消化處 理,模板核酸提取過程出了毛病,因而要配制有效而穩定的消化處理液,其程序亦應 固定不宜隨意更改。 酶失活:需更換新酶,或新舊兩種酶同時使用,以分析是否因酶的活性喪失或不夠而 導致假陰性。需注意的是有時忘加Taq酶或溴乙錠。 引物:引物質量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱,是PCR失敗或擴增條帶不 理想、容易彌散的常見原因。有......閱讀全文

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    多少同學能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR區分開?有多少同學還在犯暈?今兒這貼,師兄就帶你區分區分,撥開那扇 PCR 迷霧。什么是 RT-PCR?RT-PCR就是逆轉錄 PCR(reverse transcription PCR)或者稱反轉錄PCR(reverse tr

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      全球大爆發的新型冠狀病毒肺炎或新型冠狀病毒感染疾病的診斷有多種方法,其中針對其病毒核酸的實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測是病原學診斷的金標準。PCR 方法是所有核酸(RNA、DNA)定量檢測的重要方法,對于新冠病毒等RNA核酸首先需要逆轉錄為cDNA,而后PCR方法則基本一致,下面

    PCR原理及常見問題解答

    PCR (Polymerase Chain Reaction),中文翻譯為聚合酶鏈式反應,是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制。 由1983年美國Mullis首先提出設想,1985年由其發明了聚合酶鏈反應,即簡易DNA擴增法,意

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