酵母RNA的提取及含量測定(地衣酚顯色法)
一、實驗目的 (1)熟悉酵母RNA的提取方法(2)掌握地衣酚顯色法測定酵母RNA含量的原理和方法二、實驗原理 RNA與濃鹽酸共熱時,即發生降解,形成的核糖繼而轉變成糠醛,后者與3, 5-二羥甲苯反應呈鮮綠色,該反應需用三氯化鐵和氯化銅作催化劑,反應產物在670nm處有最大吸收。RNA在20-250微克范圍內,光吸收與RNA濃度 成正比。地衣酚反應特異性較差,凡是戊糖均有此反應。RNA和其他雜質也能給出類似的顏色。三、試劑與器材 分析天平、恒溫水浴、分光光度計、沸水浴等。0.2%氫氧化鈉、乙酸、95%乙醇、乙醚、地衣酚試劑四、操作方法 ① 酵母RNA的提取② RNA地衣酚法顯色測定③ 數據處理及計算。五、關鍵步驟與注意事項該法反應特異性較差,凡是戊糖均有此反應。因此,測RNA含量時可先測定DNA的含量,再計算出RNA的含量......閱讀全文
酵母RNA的提取及含量測定(地衣酚顯色法)
一、實驗目的??(1)熟悉酵母RNA的提取方法(2)掌握地衣酚顯色法測定酵母RNA含量的原理和方法二、實驗原理??RNA與濃鹽酸共熱時,即發生降解,形成的核糖繼而轉變成糠醛,后者與3, 5-二羥甲苯反應呈鮮綠色,該反應需用三氯化鐵和氯化銅作催化劑,反應產物在670nm處有最大吸收。RNA在20-25
地衣酚顯色法測定RNA含量
原理?核糖核酸與濃鹽酸共熱時,即發生降解,形成的核糖繼而轉變為糠醛,后者與3,5-二羥基甲苯(地衣酚)反應呈鮮綠色,該反應需用三氯化鐵或氯化銅作催化劑,反應產物在670nm處有最大吸收。RNA在20~250μ?g范圍內,光吸收與RNA的濃度成正比。地衣酚反應特異性較差,凡戊糖均有此反應,DNA和其他
地衣酚顯色法測定RNA含量實驗原理和操作步驟
【實驗原理】 RNA與濃鹽酸共熱時發生降解,產生的戊糖又可轉變為糠醛,在FeCl3或CuCl2催化下,糠醛與地衣酚(3,5—二羥基甲苯)反應形成綠色復合物,該產物在670nm處有最大吸收。當RNA濃度為20μg/m1~250μg/m1時,吸光度與 RNA濃度成正比。 【實驗材料】
核酸的定量測定實驗——地衣酚顯色法
實驗方法原理RNA 與濃鹽酸共熱時發生降解, 產生的核糖又可轉變為糖醛, 在FaCl3?或CuCl2催化下, 糖醛與3 , 5-二羥基甲苯( 地衣酚、苔黑酚)反應形成綠色復合物, 該產物在670 nm 處有最大吸收。當RNA 濃度為20~250 μg/ ml 時光密度與RNA 濃度成正比。實驗材料蛋
動物總RNA的提取及含量測定
一、實驗目的(1)了解制備RNA幾種方法的原理及優缺點(2)掌握稀堿法提取兔肝RNA的原理和操作技術二、實驗原理?細胞內大部份RNA均與蛋白質結合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分離制備RNA時,首先遇到的是必須使RNA與蛋白解離,并除去蛋白質。由于RNA的種類來源和存在形式不同,所用的制備
動物肝臟RNA的制備(苯酚法)和純度測定2
試劑和器材試劑1.DNA標準溶液(須經定磷確定其純度):取小牛胸腺DNA鈉鹽以0.01mol/L氫氯化鈉溶液配成200 μg/mL的溶液。2.樣品待測液:準確稱取DNA干燥制品以0.01mol/L氫氯化鈉溶液配成100 μg/mL左右的溶液。在測定RNA制品中的DNA含量時,要求RNA制品的每mL待
酵母RNA提取與分離
一、目的:學習稀堿法提RNA的原理與技術。二、原理:由于RNA的來源和種類很多,因而提取制備方法也各異,一般有苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法。其中苯酚法又是實驗室最常用的。組織勻漿用苯酚處理并離心后,RNA即溶于上層被酚飽和的水相中,DNA和蛋白質則留在酚層中,向水層加入乙醇后,RNA即以白色絮狀沉淀析
動物肝臟RNA的制備(苯酚法)和純度測定(二苯胺顯色法和...
動物肝臟RNA的制備(苯酚法)和純度測定(二苯胺顯色法和紫外吸收法[附2]二苯胺顯色法測定DNA含量原理脫氧核糖核酸中的2-脫氧核糖在酸性環境中與二苯胺試劑一起加熱產生藍色反應,在595nm處有最大光吸收。 DNA在40-400 g范圍內,光吸收與DNA的濃度成正比。在反應液中加入少量乙醛,可以
兔肝RNA的制備及測定實驗原理和操作步驟
實驗原理細胞內大部份RNA均與蛋白質結合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分離制備RNA 時,首先遇到的是必須使RNA與蛋白解離,并除去蛋白質。由于RNA的種類來源和存在形式不同,所用的制備方法各異,一般常用的方法有,鹽酸胍法,去污劑法和苯酚法。其中,以苯酚法使用較為廣泛。產品純度高,適合
酵母RNA的提取及組份鑒定(稀堿法)
實驗原理由于RNA的來源和種類很多,因而提取制備方法也很各異。一般有苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法。其中苯酚法又是實驗是最常用的。組織勻漿用苯酚處理并離心后,RNA即溶于上層被酚飽和的水相中,DNA和蛋白質則留在酚層中。向水層加入乙醇后,RNA即以白色絮狀沉淀析出,此法能較好的除去DNA和蛋白質。上述方
酵母核糖核酸的提取、水解及組成成分的鑒定
目的和要求?了解核糖核酸(RNA)的提取方法及其組成成分的定性測定。?原理?核酸在機體生命活動中具有重要意義,核酸可分為核糖核酸和脫氧核糖核酸兩類。酵母中富含的核糖核酸在堿處理下成為可溶性的鈉鹽與蛋白質等其它成分分開,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鑒定其組成成分。?用硫酸水解RNA時,可以生成磷酸
兔肝RNA的制備及測定
實驗原理: 細胞內大部份RNA均與蛋白質結合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分離制備RNA ?時,首先遇到的是必須使RNA與蛋白解離,并除去蛋白質。由于RNA的種類來源和存在形式不同,所用的制備方法各異,一般常用的方法有,鹽酸胍法,去污劑法和苯酚法。其中,以苯酚法使用較為廣泛。產品純度高,適
多糖多酚植物RNA提取的利器
眾多文獻報道,許多植物由于未能有效地分離純化出其組織中的RNA, 而阻礙了其分子生物學方面的研究進展。比如Northern雜交分析,體外翻譯分析或建cDNA文庫,RT-PCR及差異顯示分析等研究,都需要高質量的RNA。因此,提取純度高、完整性好的RNA是順利進行上述研究的關鍵所在。RNA提取的常見難
酵母核糖核酸(RNA)的提取、水解及組成成分的鑒定
原理 核酸在機體生命活動中具有重要意義,核酸可分為核糖核酸和脫氧核糖核酸兩類。酵母中富含的核糖核酸在堿處理下成為可溶性的鈉鹽與蛋白質等其它成分分開,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鑒定其組成成分。 用硫酸水解RNA時,可以生成磷酸、戊糖和堿基。各種成分以下列反應鑒定: (1) 磷酸與鉬酸
多糖多酚植物RNA快速提取的方法
操作步驟:提示:(1) 第一次使用前請先在漂洗液RW瓶加入指定量無水乙醇!(2) 操作前在裂解液RLT中加入β-巰基乙醇至終濃度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現用現配。配好的RLT 4℃可放置一個月。1. 直接研磨法(推薦):a.? 新鮮植物組織稱重后取100m
多糖多酚植物總RNA快速提取試劑提取水稻胚乳總RNA
實驗概要采用TAKARA的試劑提取水稻胚乳,主要是后期的胚乳RNA量偏少,不易提取!實驗步驟1. 稱量100mg的新鮮或者超低溫凍結的植物RNA提取樣品,迅速轉移至用液氮預冷的研缽中,用研杵研磨組織,其間不斷加入液氮,直至研磨成粉末狀。2. 向研缽中加入1000μL RNAiso-mate for
苯酚法提取酵母RNA實驗原理和操作步驟
(一)原理細胞內大部分RNA 均與蛋白質結合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA時要把RNA與蛋白質分離并除去。將細胞置于含有十二烷基磺酸鈉(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的緩沖液中,加等體積水飽和酚,通過劇裂振蕩,然后離心形成上層水相和下層酚相。核酸溶于
酵母菌RNA制備實驗—熱酸性酚抽提法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒TES酸性酚氯仿乙酸鈉乙醇儀器、耗材離心管離心機搖床實驗步驟1. ?酵母細胞在10 ml 培養基中生長至指數中期(OD600=1.0)。?2. ?將培養液轉移到50 ml,離心管,于4℃,1 500 g 離心3 min。?3. ?棄上清,菌體沉淀用1 ml 冰冷的水重懸,轉
植物水溶性總糖的提取和含量測定——蒽酮比色法
一、目的: 1.掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法。 2.學習植物可溶性糖的一種提取方法。 3.學習分光光度計的使用。 二、原理: 糖類在較高溫度下可被濃硫酸作用而脫水生成糠醛或羥甲基糖醛后,與蒽酮(C14H10O)脫水縮合,形成糠醛
RNA的提取與核酸的顏色反應
一. 目的學習用濃鹽法從酵母中提取RNA掌握用等電點法沉淀RNA觀察核酸的顏色反應,了解核酸定性與定量測定的原理熟練掌握普通離心機的使用方法二. 原理酵母繁殖快,生長周期短;其細胞質中的核酸大部分是RNA,而DNA很少;RNA提取液與菌體分離比較容易。因此,酵母是提取RNA的好材料。將RNA從細胞中
福林酚法檢測提取物的總酚含量的原理
多酚類化合物在堿性溶液中,鎢鉬酸可以將多酚化合物定量氧化,自身被還原(使W6+變為W5+)生成藍色的化合物,藍色的深淺程度與含酚基團的數目成正比。如果試樣中含有其它分類化合物或其他還原物質,也會被同時測定。
地蒽酚的含量測定
照紫外可見分光光度法(通則0401)測定供試品溶液取本品,精密稱定,加三氯甲烷溶解并定量稀釋制成每1ml中約含10g的溶液測定法取供試品溶液,在356nm的波長處測定吸光度,按C14H10O3的吸收系數(E%)為463計算。
酚磺乙胺的含量測定
含量測定照高效液相色譜法(通則0512)測定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液對照品溶液取酚磺乙胺對照品適量,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液。系統適用性溶液與色譜條件見有關物質項下。系統適用性要求除靈敏度要求外,其他
核糖核酸的測定
【實驗原理】RNA分子中的核糖在濃酸中加熱,脫水轉變成糖醛,后者在氯化鐵存在下,與地衣酚試劑(3,5-二羥基甲苯)反應,縮合成綠色化合物,在670nm處有最大吸收峰,從而可進行定量測定。待測樣品中的RNA濃度在20~200μg/mL之間時,其吸光度與濃度成正比。反應式如下:核 糖 糖 醛 綠色化合物
RNA提取心得(組織RNA提取和培養細胞的RNA提取)
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織,這樣RNA提取的效果比較好,這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的(最好在半年之內,-80℃或者液氮中凍存的)組織,注意不要反復凍融,從冰凍狀態拿到0-4℃,注意不要拿到常溫,待組織解凍后,用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織,稱重后,放到預冷的勻漿器中,然后
比色法測定磷含量
鉬精礦中鉬的1刪定,部頒標準[ 推薦用氧化性酸溶解樣品,氨水分離鐵的氧化物沉淀,濾液中鉬用鉬酸鉛重量法測定.然后,堿熔酸不溶殘渣.水浸熔塊,用比色法測濾液中鉬.兩次測定之和為鉬精礦中鉬的含量.如此操作,手續較繁鎖.本工作所改進的方法是用碳酸鈉-硼酸鈉于高溫熔解,酸化熔塊,加氨水除雜,用鉬酸鉛重量j擊
地衣提取物的藥理作用
地衣中的 松蘿酸、地衣硬酸以及地衣二酚的多種縮合物,在抗革蘭氏陽性細菌、尤其是在抗結核桿菌方面具有極高的活性;同時發現大多數地衣多糖具有高度的抗癌活性,能通過增強健康細胞的免疫功能抑制癌細胞的增殖,并且還具有降血壓、消炎、清熱解毒等功能
天麻提取物的活性成分及含量測定
活性成分 化學成分含天麻甙(天麻素,gastrodin)、天麻甙元、天麻醚甙(gastrodioside)、 派立辛(parishin)、香草醇、β2甾醇、對羥基苯甲醛、檸檬酸、琥珀酸等。 含量測定 照高效液相色譜法測定。 色譜條件與系統適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-
己烯雌酚的含量測定方法
照高效液相色譜法(通則0512)測定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加乙醇水(1:1)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液對照品溶液取己烯雌酚對照品適量,精密稱定,加乙醇水(1:1)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液。系統適用性溶液、色譜條件與系統適用性要求見有關物質項下
丙泊酚的含量測定方法
照高效液相色譜法(通則0512)測定。對照品溶液取丙泊酚對照品,精密稱定,加甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含3mg的溶液,搖勻供試品溶液、系統適用性溶液、色譜條件與系統適用性要求見有關物質項下。測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注人液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算。