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    蛋白質提取與純化技術

    選擇材料及預處理 以蛋白質和結構與功能為基礎,從分子水平上認識生命現象,已經成為現代生物學發展的主要方向,研究蛋白質,首先要得到高度純化并具有生物活性的目的物質。蛋白質的制備工作涉及物理、化學和生物等各方面知識,但基本原理不外乎兩方面。一是得用混合物中幾個組分分配率的差別,把它們分配到可用機械方法分離的兩個或幾個物相中,如鹽析,有機溶劑提取,層析和結晶等;二是將混合物置于單一物相中,通過物理力場的作用使各組分分配于來同區域而達到分離目的,如電泳,超速離心,超濾等。在所有這些方法的應用中必須注意保存生物大分子的完整性,防止酸、鹼、高溫,劇烈機械作用而導致所提物質生物活性的喪失。蛋白質的制備一般分為以下四個階段:選擇材料和預處理,細胞的破碎及細胞器的分離,提取和純化,濃細、干燥和保存。 微生物、植物和動物都可做為制備蛋白質的原材料,所選用的材料主要依據實驗目的來確定。對于微生物,應注意它的生長期,在微生物的對數生長期......閱讀全文

    蛋白質提取與制備

    1蛋白質提取與制備蛋白質提取與制備蛋白質種類很多,性質上的差異很大,既或是同類蛋白質,因選用材料不同,使用方法差別也很大,且又處于不同的體系中,因此不可能有一個固定的程序適用各類蛋白質的分離。但多數分離工作中的關鍵部分基本手段還是共同的,大部分蛋白質均可溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶液中,少數與脂類結合

    蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗

    實驗步驟一、化學法和酶法細胞裂解微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況,而且應用這些機械的方法經常會遇到過度的產熱和樣品被氧化等問題。微量細胞裂解的簡化方面的重大進

    蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗

    實驗步驟 一、化學法和酶法細胞裂解 微量的細胞裂解經常通過化學法或酶法或二者共同采用來完成。例如, 超聲和弗式細胞壓碎器 (Frenchpress 均質機) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培養液的情況,而且應用這些

    蛋白質濃縮和溶質的去除實驗

    預計在新奇的一級分子和生物仿制藥實體方面將會有突出的增長。一些進步的是改良的分析、開發和相互作用。現在已有許多用于去除關的方法,包括凍干、反向萃取、溶質析出,precipitation、透析(溶劑交換) 、超濾和層析技術。值得注意的是,在眾多微和設備發展的支持下,小型化和高通量的蛋白質分析取得了極大

    蛋白質濃縮和溶質的去除實驗

    蛋白質濃縮和溶質的去除實驗             實驗步驟 一、層

    蛋白質組學概念的起源和發展

      蛋白質組學的誕生和發展,離不開多學科和技術的逐漸交叉融合。這些學科技術包括(但不限于)基因組學、生物化學、分析化學、自動化、基于電磁場的精密質譜儀、信號處理、數理統計和計算機科學。近年來,分子醫學、大數據技術和人工智能的發展,進一步加速推動了蛋白質組學的成長,使之在精準醫療領域展示出越來越大的應

    蛋白質分離純化的新技術及技術要點

    淺述蛋白質分離純化的新技術摘 要: 本文主要介紹了濁點萃取法、置換色譜法、親和層析法、親和色譜法、凝膠電泳、雙水相萃取等蛋白質的最新分離純化技術,綜和近年來國內外的一些研究結果,結合實際應用的例子,分析了各種分離純化方法的優點,同時指出其不足之處。文章最后展望了蛋白質分離純化技術的發展趨勢。&nbs

    蛋白質的分離純化

    一,蛋白質(包括酶)的提取  大部分蛋白質都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液,少數與脂類結合的蛋白質則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中,因些,可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質及酶。(一)水溶液提取法  稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑,通常用量是原材料體積的1

    蛋白質純化所需的生物提取物制備的實驗(三)

    四、細胞裂解的流程、試劑和技巧下文所述的以細胞提取物的產品質量為出發點的各種策略和指導方針適用于大多數下游純化及分析過程。盡管介紹的重點是在小規模或較大的實驗室規模的大腸桿菌裂解上,但是一些技術還是可以用于其他來源的細胞裂解和細胞內蛋白質提取,并且是可以放大的。廣泛的蛋白質純化方面的文獻為這里列出的

    抗原的制備方法-2

    表2-1 室溫下由S1提高到S2時每升加固體硫酸銨的克數  0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242

    CBPT生物制藥分離純化技術論壇

      作為中國領先的生物制藥技術推廣平臺,由中國生物工程學會《生物產業技術》雜志社主辦,北京中航環宇國際文化交流中心承辦的“CBPT生物制藥分離純化技術論壇”在生物醫藥行業專家領導和朋友們的支持下,已連續成功舉辦了兩屆。是生物醫藥技術領域規模最大、學術水平最高、科研成果最新和專業性最強的年度行業盛會,

    廣東檢驗檢疫局在食用植物油檢測技術上取得突破

    日前,廣東檢驗檢疫局技術中心科研人員經過近三年的刻苦攻關,一舉攻克食品分子生物學檢測國際難題,圓滿完成食用植物油脂基因檢測ISO國際標準研 制的全部實驗研究工作,其主要科研成果食用植物油脂中核酸提取純化技術,已通過多家驗證單位的實驗驗證,在食用植物油脂中轉基因成分檢測和成分物種鑒別等 相關檢測業務中

    廣東檢驗檢疫局 攻克食品分子生物學國際檢測難題

    日前,廣東檢驗檢疫局技術中心科研人員經過近三年的刻苦攻關,一舉攻克食品分子生物學檢測國際難題,圓滿完成食用植物油脂基因檢測ISO國際標準研 制的全部實驗研究工作,其主要科研成果食用植物油脂中核酸提取純化技術,已通過多家驗證單位的實驗驗證,在食用植物油脂中轉基因成分檢測和成分物種鑒別等 相關檢測業務中

    China Lab 2014技術研討會主會場演講報告

      2014年3月12日,由廣東省對外科技交流中心、國藥勵展展覽有限責任公司、廣東國際科技貿易展覽公司主辦的廣州國際分析測試及實驗室設備展覽會暨技術研討會(China Lab 2014)在廣州保利世貿博覽館盛大開幕。12日上午召開的中國(廣州)分析測試論壇主會場共邀請到諸位專家學者就蛋白質的

    賽默飛世爾科技:為蛋白質組學提供深層次解決方案

      定量蛋白試劑盒  在蛋白分析相關的試劑消耗品方面,Thermo Fisher Scientific都是直接在儀器上開發的。由于試劑和儀器時配套的,從而能夠提高分析效率。例如細胞培養氨基酸穩定同位素標記技術(SILAC)和串聯質譜標簽(tandem mass tag)試劑盒。  細胞培養氨基酸穩定

    蛋白質純化的方法選擇

    隨著分子生物學的發展,越來越多的科研人員熟練掌握了分子生物學的各種試驗技術,并研制成套試劑盒,使基因克隆表達變得越來越容易。但分子生物學的上游工作往往并非是最終目的,分子克隆與表達的關鍵是要拿到純的表達產物,以研究其生物學作用,或者大量生產出可用于疾病治療的生物制品。相對與上游工作來說,分子克隆的下

    臨床檢驗科常見設備和主要供應商大全

    臨床檢驗常見設備包括:一、臨檢設備:血細胞分析儀、流式細胞儀、血凝分析儀、尿液干化學分析儀、尿液有形成分分析儀、糞便分析儀二、生化免疫設備:生化分析儀、化學發光免疫分析儀、酶免疫分析儀、熒光免疫分析儀三、分子診斷設備:核酸提取儀、實時熒光PCR儀、基因測序儀、質譜儀四、微生物檢驗設備:微生物鑒定藥敏

    【分享】蛋白純化的方法選擇

      隨著分子生物學的發展,越來越多的科研人員熟練掌握了分子生物學的各種試驗技術,并研制成套試劑盒,使基因克隆表達變得越來越容易。但分子生物學的上游工作往往并非是最終目的,分子克隆與表達的關鍵是要拿到純的表達產物,以研究其生物學作用,或者大量生產出可用于疾病治療的生物制品。相對與上游工作來說,分子克隆

    多項儀器研發項目列入863計劃和2014備選項目

      一、前沿生物技術主題  1.蛋白質測序新技術新裝備及配套試劑國產化  (1)陣列毛細管柱蛋白質分離-陣列點樣裝置  研制二維陣列毛細管分離新裝置,第一維分離柱可分離48個餾分,第二維維陣列毛細管分離柱可同時分離48個流份;開發陣列紫外檢測器; 研制多柱點樣頭并行點樣器和流份收集器;開發

    高通量組織gDNA提取實踐手冊

    Part 1 —— 前 言 | 組織gDNA提取和純化是分子生物學的基本實驗技術,其原理和操作絕大數生物學相關的研究人員都有接觸。困擾實驗人員的是當樣本量過大時,以1.5ml離心管為基本體系的組織核苷酸提取模式,同時操作20個以上的樣品有非常繁瑣的實驗過程和樣品間有錯亂

    用于蛋白質表達和純化的pET-32α(+)載體的構建

    表達載體的構建是生物技術和所需蛋白質產生的基本工具,本文總結了pET-32α(+)載體技術的構建,該技術通常用于研究實驗室。該方法包括獲得用于構建載體的外源DNA片段,將DNA片段亞克隆到pET-32α(+)表達載體中,在大腸桿菌 BL21(DE3)中進行蛋白質表達以及在大腸桿菌中在天然條件下進

    抗原的制備-2

     2.核酸的分離純化  從細胞中提取核酸后,仍混雜著蛋白質、多糖和各種大小分子核酸同類物。除去這些“雜質”的過程,也就是核酸提純過程。在核酸的分離純化時,為防止核酸大分子的變性降解,必須在0~4℃的低溫條件下操作。核酸酶的水解作用,是過去制備具有活性核酸大分子的嚴重障礙,現普遍采用加入去污劑或加入E

    自動化核酸提取、檢測和定量平臺

    在現今分子生物領域中,樣本的核酸提取、檢測和定量已是每個實驗室常用的實驗手段。近年,實時定量PCR和第二代測序技術的誕生更令核酸提取的需求大大增加。這些新的核酸檢測技術對核酸的純度要求比較高,所以核酸提取的質量也比以前更受注重。另一方面,準確的核酸定量對于這些新技術,如第二代測序,起了成敗的關鍵作用

    蛋白質譜分析方法特點及其在蛋白組學研究領域中的應用

    褚福亮,王福生, 中國人民解放軍第302醫院全軍艾滋病與病毒性肝炎重點實驗室 北京市 100039項目負責人 王福生, 100039 ,北京市豐臺路26號, 中國人民解放軍第302醫院全軍艾滋病與病毒性肝炎重點實驗室. fswang@public.b

    檢測自身免疫抗體的蛋白質芯片技術簡介

      檢測自身免疫抗體的蛋白質芯片技術   自身免疫性疾病是由異常免疫反應引起的慢性退行性或炎癥性疾病。不同的自身免疫性疾病對機體的影響各有不同。例如,在多發性硬化癥中,自身免疫反應的侵害對象是中樞神經系統,而在克羅恩病中則是腸道。此外,同種疾病對不同個體的組織和器官的影響程度不盡相同。   此類

    2009年北京色譜年會隆重召開

      2009年12月11日上午9時許,由北京理化分析測試技術學會色譜學會主辦的2009年北京色譜年會在京東賓館第一會議室隆重召開。來自全國色譜界專家、廠商技術專家、青年研究者和學生300余人參加了會議。 2009年北京色譜年會會場     中科院化學所 劉國詮教授  &

    現代生物分離技術在多肽蛋白質分離純化中的應用

    摘要:蛋白質是生物體的重要組成部分,在現代生物制藥領域有著重要的作用,本文介紹了現代生物分離技術反膠束萃取、雙水相萃取和電泳在多肽蛋白質分離中的應用和現狀。關鍵詞:蛋白質  反膠束萃取  雙水相萃取  電泳一、前言隨著基因工程和細胞工程的發

    親和層析實驗:常規方法

    實驗步驟一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標,既保證較弱的非特異性吸附,又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。

    親和層析實驗:常規方法

    實驗步驟 一、親和介質的選擇 親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標,既保證較弱的非特異性吸附,又可以在整個過

    蛋白質特性與分離純化技術的選擇

    摘要:蛋白質的一級、二級、三級和四級結構決定了它的物理、化學、生物化學、物理化學和生物學性質,綜述了不同蛋白質之間的性質存在差異或者改變條件是使之具有差異,利用一種同時多種性質差異,在兼顧收率和純度的情況下,選擇蛋白質提純的方法。關鍵詞:蛋白質 分離純化前言    蛋白

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