染色質免疫共沉淀技術(ChIP)
真核生物的基因組DNA以染色質的形式存在。因此,研究蛋白質與DNA在染色質環境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。染色質免疫沉淀技術(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法。它的基本原理是在活細胞狀態下固定蛋白質-DNA復合物,并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段,然后通過免疫學方法沉淀此復合體,特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。CHIP不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。而且,CHIP與其他方法的結合,擴大了其應用范圍:CHIP與基因芯片相結合建立的CHIP-on-chip方法已廣泛用于特定反式因子靶基因的高通量篩選;CHIP與體內足跡法相結合,用于尋找反式因子的體內結合位點;RNA-C......閱讀全文
免疫共沉淀的技術優勢
(1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態;(2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;(3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。
植物染色質免疫沉淀試劑盒(CHIP)的使用說明
蛋白質和DNA的相互作用是調控細胞反應過程的要素之一。染色質免疫沉淀分析方法(chromatin immunoprecipitation, CHIP)是研究活體內DNA和蛋白質的相互作用的最新最有力的研究工具。CHIP技術通過三大步驟實現:第一,甲醛固定后染色質分離和斷片;第二,運用特異蛋白
免疫共沉淀
實驗概要本實驗以植物葉片為試材介紹了免疫共沉淀的基本方法。主要試劑50uM雌激素,液氮,提取緩沖液TBS(50mM Tris-Cl,0.15M NaCl,pH 7.4,1mM PMSF,5mM Benzamidine),glycine-HCl,TBS,洗脫緩沖液(TBS,0.5mg/mL 3
免疫沉淀法的主要類型
個別免疫沉淀法(IP):用來分離某個細胞萃取物中的已知特定蛋白質免疫共沉淀法(Co-IP):研究整個蛋白質復合體染色質免疫沉淀法(ChIP):用來研究DNA上的特定蛋白質RNA免疫沉淀法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉淀法是用來研究會與RNA結合的蛋白質RIP技術(RNA Binding
免疫共沉淀試劑配制及技術路線
實驗概要本實驗介紹了免疫共沉淀所需試劑配制及操作步驟。主要試劑1. RIPA Buffer配制基礎成分: Tris-HCl(緩沖液成分,防止蛋白變性) NaCl(鹽份,防止非特異蛋白聚集) NP-40(非離子去污劑,提取蛋白;用H2O配制成10%儲存液) 去氧膽酸鈉(離子去污劑,提取蛋白;用H2O配
免疫共沉淀試劑配制及技術路線
實驗概要本實驗介紹了免疫共沉淀所需試劑配制及操作步驟。主要試劑1. RIPA Buffer配制基礎成分: Tris-HCl(緩沖液成分,防止蛋白變性) NaCl(鹽份,防止非特異蛋白聚集) NP-40(非離子去污劑,提取蛋白;用H2O配制成10%儲存液) 去氧膽酸鈉(離子去污劑,提取蛋白;用H2O配
Cell特輯:免疫沉淀
“Cell Press Selections”是由Cell出版社推出的一份推薦文章集合手冊,主要介紹某個生命科學研究領域最新的進展及突出成果。相關特輯內容包括研究論文,評論性文章以及snapshots,涉及了同一領域的方方面面,更為重要的是這些文章由贊助商贊助,可以免費獲取。 蛋白與DNA之間
免疫沉淀法的類型
個別免疫沉淀法(IP):用來分離某個細胞萃取物中的已知特定蛋白質免疫沉淀法免疫共沉淀法(Co-IP):研究整個蛋白質復合體染色質免疫沉淀法(ChIP):用來研究DNA上的特定蛋白質RNA免疫沉淀法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉淀法是用來研究會與RNA結合的蛋白質RIP技術(RNA Bin
ChIPSeq分析常見問題集錦
染色質免疫共沉淀測序(ChIP-Seq)是指對染色質免疫共沉淀(ChIP)獲得的DNA片段進行大規模測序,并能把所研究蛋白的DNA結合位點精確定位到基因組上。Roche GS FLX Titanium 、Illumina Hiseq2000和AB SOLID 4 這3種測序技術均可以用于ChIP-
ChIPChip技術的介紹與應用
人類基因組計劃的完成開啟了一個新的紀元——功能基因組時代來臨,與基因信息相比較,人們更關注于基因的功能、調控網絡與信號通路等信息。表觀遺傳學研究與核內蛋白因子的功能分析成為基因表達調控研究的重要組成部分。結合了染色質免疫共沉淀與基因芯片技術的ChIP-chip技術的浮現使得全基因組范圍內DNA與蛋白
免疫共沉淀概述
實驗概要本實驗以植物葉片為試材介紹了免疫共沉淀的基本方法。主要試劑50uM雌激素,液氮,提取緩沖液TBS(50mM Tris-Cl,0.15M NaCl,pH 7.4,1mM PMSF,5mM Benzamidine),glycine-HCl,TBS,洗脫緩沖液(TBS,0.5mg/mL 3
免疫共沉淀-簡介
蛋白質間相互作用研究方法:免疫共沉淀1.用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。2.將每毫升細胞懸液轉移到微量離心管中,在微量離心機上4℃以最大速度離心15 min。3.收集上清(約30 ml)并加入30μg的適當抗體,4℃搖動免疫沉
用CRISPR-突破ChIPseq的局限
生物體內的所有細胞都攜帶著相同的遺傳物質——DNA。不同細胞在轉錄因子的控制下表達不同的基因,從而實現特異性的功能。比如說,神經細胞表達的基因有助于向其他神經細胞傳遞信息,而免疫細胞表達的基因有助于它們合成抗體。 將染色質免疫共沉淀技術與下一代高通量測序技術相結合的染色質免疫共沉淀測序(ChI
科學家發明少量細胞多層次圖譜繪制新方法
解析正常和病態生理過程的有力工具是全基因組分子遺傳和表觀遺傳圖譜。其中獲得細胞機能完整圖譜最主要的挑戰之一,就是開發出一種能夠描述少量細胞多層次圖譜特征的技術。最新一期《自然―方法學》(Nature Methods)發表的兩篇文章解決了這個問題。 在過去的15年里,出現了許多研
什么是免疫共沉淀?
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agaros
免疫共沉淀詳細步驟
實驗概要免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。本實驗詳細介紹了免疫共沉淀的詳細步驟及注意事項。實驗原理當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋
免疫共沉淀?試劑準備
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。試劑準備 ? 預
染色質免疫沉淀技術的應用
隨著人類基因組測序工作的基本完成,功能基因組學逐漸成為研究的熱點。而基因表達的調控又是功能基因組學的一個重要研究領域,要想提供蛋白因子直接調控的證據,需要直接檢測蛋白質-DNA的相互作用,而染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一種研
任兵教授Cell-Res:開發新的ChIPseq分析遠程染色質相互作用
生物通報道:近日,加州大學圣地亞哥分校任兵教授帶領的研究小組,在國際知名學術期刊《Cell Research》以Letter to the Editor的形式,在線發表了題為“Mapping of long-range chromatin interactions by proximity li
ChIP實驗的三大法寶
在基因調控領域,可以說沒有比表觀遺傳學更熱的話題了。而染色質免疫共沉淀ChIP是表觀遺傳學研究中最常用的方法。? ChIP通過針對染色質相關蛋白(組蛋白、轉錄因子等)的抗體,來鑒定與該蛋白(或蛋白修飾)相連的序列。這種方式能夠幫助人們定位基因組中發生的表觀遺傳學改變。舉例來說,針對H3K4me3(賴
免疫共沉淀和GST-pull-down技術各有何優勢
免疫共沉淀的話蛋白質是處于天然狀態,可以分離得到天然狀態下相互作用的蛋白復合體。GST pull-down是將GST融合蛋白作為探針固化到凝膠柱上,與溶液中的目的蛋白結合。可以用來確定融合(或探針)蛋白與未知(或靶)蛋白間的新的相互作用。一、免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋
ChIP實驗技術經驗分享
染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱ChIP)是研究活體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體反應的特異性,可以真實地反映體內蛋白因子與基因組DNA結合的狀況。隨著對基因功能研究的不斷深入,這項技術正越來越多的被應用于科研的各個領域
ChIP實驗技術經驗分享
染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱ChIP)是研究活體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體反應的特異性,可以真實地反映體內蛋白因子與基因組DNA結合的狀況。隨著對基因功能研究的不斷深入,這項技術正越來越多的被應用于科研的各個領域。
高通量測序技術應用發展現狀
根據發展歷史、影響力、測序原理和技術不同等,主要有以下幾種:大規模平行簽名測序(MassivelyParallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆(Polony Sequencing)、454焦磷酸測序(454 pyrosequencing)、Illumina
最新!北京大學何愛彬研究組Molecular-Cell發文
2019年8月27日,北京大學分子醫學研究所,北京大學-清華大學生命科學聯合中心研究員何愛彬研究組在Molecular Cell雜志在線發表題為“CoBATCH for high-throughput single-cell epigenomic profiling”的文章,報道了一種新的具有普
免疫共沉淀的實驗過程
(1)轉染后24-48 h 可收獲細胞,加入適量細胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C, 最大轉速離心30 min后取上清;(2)取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;(3)取10μl
關于免疫共沉淀的簡介
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法,是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經翻譯后修飾的,處于天然狀態的優點。 免疫共沉淀(Co -Immunoprecipitation
免疫共沉淀有哪些特點?
1、優點介紹 (1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態; (2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響; (3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。 2、缺點介紹 (1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用; (2)兩種蛋白質的結合可
免疫共沉淀的原理介紹
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation),簡稱 Co-IP,其原理是當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來, 如果用蛋白質 X 的抗體?anti-X(通常稱為 IP 抗體)將 X 特異地抓住并沉淀下來,那么與 X 在體內結合的蛋白質
免疫共沉淀實驗方法
免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質x