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摘要： 碧云天生產的超級感受態細菌制備試劑盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一種用于快速制備高轉化效率大腸桿菌感受態細菌的試劑盒.超級感受態細菌制備試劑盒是在傳統超級感受態細胞制備方法的基礎上進行適當改良而成,操作便捷,轉化效率高. 碧云天生產的超級感受態 細菌 制備試劑盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一種用于快速制備高 轉化 效率 大腸桿菌 感受態細菌的試劑盒.超級感受態細菌制備試劑盒是在傳統超級 感受態細胞 制備方法的基礎上進行適當改良而成,操作便捷,轉化效率高.使用本試劑盒可以使感受態效率達到108-109 cfu/μg質粒.對于小的 質粒 ......閱讀全文
感受態細胞的制備(一)制備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的，所制備的大腸桿菌DHl、DH5和ＭＭ249感受態細胞培養物能使每微克超螺旋ＤＮＡ以≥5x108轉化菌落的頻率進行轉化，其他大多數大腸桿菌菌株的最高轉化率大約只有前述菌株的1/10
一、目的1.了解感受態細胞生理特性及制備條件，掌握大腸桿菌感受態細胞制備方法。2.掌握質粒DNA 轉化大腸桿菌的方法，了解轉化的條件和利用半乳糖苷酶基因插入失活選擇重組質粒DNA 的原理。二、原理（一）大腸桿菌感受態細胞制備的原理所謂感受態，是指細菌生長過程中的某一階段的培養物，只有某一生長階段中的
大腸桿菌的電擊轉化實驗可以用于：更為簡便快捷地進行轉化。實驗方法原理轉化（transformation）是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表型發生相應變化的現象。該現象首先發現于細菌。也是細菌間遺傳物質轉移的多種形式中最早發現的一種，它不同于通過噬菌體感染
實驗方法原理 轉化（transformation）是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表型發生相應變化的現象。該現象首先發現于細菌。也是細菌
主要試劑1、LB培養基（滅菌后使用）胰蛋白胨（bacto-tryptone） 10g/L酵母提取液（bacto-yeast extract） 5 g/LNaCl 10g/L用NaOH調pH至7.0。2、LB固體平板每升液體培養基中加入15g瓊脂粉，高壓滅菌后倒入滅過菌的培養皿中。3、SOC培養基20
制備和轉化感受態大腸桿菌的Hanahan方法實驗（高效的轉化策略）實驗方法原理 20 世紀 70 年代晚期和 80 年代早期，Dong Hanahan 在冷泉港實驗室和哈佛大學做研究生的時候，他做出了以前從未聽說過的轉化效率，并且在以后他的方法被標準化了。實驗材料 質粒 DNA大
實驗方法原理 20 世紀 70 年代晚期和 80 年代早期，Dong Hanahan 在冷泉港實驗室和哈佛大學做研究生的時候，他做出了以前從未聽說過的轉化效率，并且在以后他的方法被標
20 世紀 70 年代晚期和 80 年代早期，Dong Hanahan 在冷泉港實驗室和哈佛大學做研究生的時候，他做出了以前從未聽說過的轉化效率，并且在以后他的方法被標準化了。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理20 世紀 70 年代晚期和 80 年代早期，Dong Hana
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
摘要： 下文介紹大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化. 1、感受態細胞的概念重組 DNA 分子體外構建完成后,必須導入特定的宿主(受體)細胞,使之無性繁殖并高效表達外源基因或直接改變其遺傳性狀,這個導入過程及操作統稱為重組DNA分子的轉化.
常態的細胞不能攝入外部溶液中的DNA，所以要轉化質粒DNA進入大腸桿菌必須首先制備感受態的大腸桿菌細胞。受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化學試劑法）的處理后，細胞膜的通透性發生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態細胞(competent cell) 。轉化，是將
第一節 概 述 在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌,需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源DNA。轉化(Transfo
實驗概要 獲得感受態細胞；制備含有目的片段的克隆。實驗原理 在自然條件下，很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內，但在人工構建的質粒載體中，一般缺乏此種轉移所必需的mob基因，因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需
實驗概要大腸桿菌感受態細胞的CaCl2法制備及質粒轉化。實驗原理處于對數生長期的細菌經CaCl2 處理后接受外源DNA的能力顯著增加。細菌處于容易吸收外源DNA的狀態叫感受態。 在自然條件下，很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內，但在人工構建的質粒載體中，一般缺乏此種轉移所必需的m
重組質粒的連接、轉化及篩選主要用于獲得含有目的基因連接的重組子。實驗方法原理用特定的限制性內切酶切割載體DNA和外源DNA片段并進行純化，于體外使兩者相連接(若用T-載體，可直接用純化的PCR產物進行連接)，轉化宿主細菌后，利用藍白斑篩選原理對重組子進行挑選。由于載體上帶有Amp'和lacZ
重組質粒的連接、轉化及篩選主要用于獲得含有目的基因連接的重組子。實驗方法原理用特定的限制性內切酶切割載體DNA和外源DNA片段并進行純化，于體外使兩者相連接(若用T-載體，可直接用純化的PCR產物進行連接)，轉化宿主細菌后，利用藍白斑篩選原理對重組子進行挑選。由于載體上帶有Amp'和lacZ
制備和轉化感受態大腸桿菌的Inoue方法實驗（制備超級感受態細胞）實驗方法原理 采用 Inoue 的方法（1990）制備大腸桿菌感受態細胞很好時甚至能達到 Hanahan 方法（1980）的轉化效率。但在標準的實驗室條件下，達到 1X108~3X108 個轉化克隆/ μg 質粒 DNA 的轉
體外連接的重組DNA分子導入合適的受體細胞才能進行大量復制，增殖和表達，其首要目的是獲得大量的克隆基因。雖然PCR技術，體外轉錄及翻譯系統能部分達到大量擴增的目的，但畢竟受到體外操作的許多限制。重組質粒導入宿主細胞最常用的方法之一就是轉化（transformation）。轉化這一概念來源于遺傳學：細
摘要： 目前,感受態細胞的制備常用冰預冷的CaCl2處理細菌的方法制備,即用低滲CaCl2溶液在低溫（0℃）時處理快速生長的細菌,從而獲得感受態細菌.本方法的關鍵是選用的細菌必須處于對數生長期,實驗操作必須在低溫下進行. 原理：
一、革蘭氏陽性細菌，轉化過程的幾個階段： 1.細菌感受態的形成 由于分泌一種稱為感受態因子的小蛋白而導致細菌感受態的形成。 2.轉化因子的吸收雙鏈DNA片段與感受態受體菌的細胞表面特定位點結合，并激活臨近的核酸酶。DNA雙鏈中的一條單鏈逐步降解，同時另一條單鏈逐步進入細胞 3.整合復合物前體的形成
[ 基本原理 ] 將質粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉化（ Transformation ）。此感受態細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀（感受態細菌的制備，見前）。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面，經 42℃ 短時間熱沖
一、目的與原理當細菌處于容易吸收外源DNA的狀態時，即為感受態，而用理化手段使細菌處于感受態的操作為致敏過程。感受態細胞制備是重組基因能否實現轉化的一個重要的技術環節。本試驗是通過鈣離子來誘導使之成為感受態細胞。二、材料和方法1． 材料：大腸桿菌2． 儀器：離心機，恒溫搖床，恒溫水浴，超凈工作臺，冰
（一）外源ＤＮＡ和質粒載體的連接反應 外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間 形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的
采用 Inoue 的方法（1990）制備大腸桿菌感受態細胞很好時甚至能達到 Hanahan 方法（1980）的轉化效率。但在標準的實驗室條件下，達到 1X108~3X108 個轉化克隆/ μg 質粒 DNA 的轉化效率更為常見。與 Hanahan 方法相比，這一方法的優點在于并不過分地講究
第一節 轉化基因片段在體外只是一段核酸分子，是化學物質，無法表現出遺傳物質的生命活性。只有當其存在于活細胞后，生命的特征才能充分展示出來。在分子克隆實踐中，在體外操作的核酸分子只有進入細胞以后才能達到克隆的目的。一、重組DNA分子轉入原核生物細胞1. 重組質粒DNA分子轉化大腸桿菌轉化（transf
一、實驗原理 體外連接的重組DNA分子導入合適的宿主細胞中才能大量的進行復制、增殖和表達。研究發現，用含Ca2+ 的溶液處理大腸桿菌細胞會易于吸收外源DNA。大腸桿菌吸收外源DNA的過程被稱為轉化。細菌處于容易吸收外源DNA的狀態稱為感受態。用理化方法可以誘導細胞進入感受態，如電轉化法、Ca
實驗方法原理 雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至
雖然理論上 M13 重組噬菌體所能攜帶的外源 DNA 片段沒有限制，但實際上是有限的：長片段的外源 DNA 比短片段的更易發生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌體的 DNA 片段不要大于 1000 堿基。而且，當用“正向”或“反向”通用測序引物進行 DNA 測序時，大片段的中心區域可
一、革蘭氏陽性細菌，轉化過程的幾個階段： 1.細菌感受態的形成 由于分泌一種稱為感受態因子的小蛋白而導致細菌感受態的形成。 2.轉化因子的吸收 雙鏈DNA片段與感受態受體菌的細胞表面特定位點結合，并激活臨近的核酸酶。DNA雙鏈中的一條單鏈逐步降解，
實驗方法原理 采用 Inoue 的方法（1990）制備大腸桿菌感受態細胞很好時甚至能達到 Hanahan 方法（1980）的轉化效率。但在標準的實驗室條件下，達到 1X108~3X108 個轉化克隆/ μg 質粒 DNA 的轉化效率更為常見。與 Hanahan 方法相比，這一