放射性標記的探針與固定在膜上的核酸的Southern雜交
實驗方法原理 Southern 雜交獲得的信號強度取決于若干因素，包括固定的 DNA 與探針互補的比例、探針的大小及特異活性以及轉移到膜上的基因組 DNA 的數量。在最佳條件下，這種方法的敏感度足以檢測到與 32P 標記的高度特異（>109 cpm/μg）的探針互補的 <0.1 pg 的 DNA。 實驗材料 固定于膜上的 DNA 無菌水配的 poly (A) RNA DNA 或 RNA 探針 鮭魚精 DNA 試劑、試劑盒 磷酸-SDS 洗液 預雜交......閱讀全文
基本方案2－直接－Southern－雜交檢測異常擴增和甲基化實驗
實驗材料基因組DNA試劑、試劑盒5 X 限制性緩沖液10 X Ficoll載樣緩沖液1 X TAE 緩沖液變性緩沖液轉性緩沖液中性緩沖液雜交緩沖液儀器、耗材Whatman 3MM 濾紙Nytran SuPercharge Turboblotter Rapid Downward Transfer 系統
放射性標記的探針與固定在膜上的核酸Southern雜交
放射性標記的探針與固定在膜上的核酸Southern雜交1.?將含有靶DNA的膜漂浮在盛有6×SSC（或6×SSPE）的皿中直到膜自下面而上完全浸濕。將膜浸于溶液中2 min。2.?用下列方法之一進行預雜交在熱密封的袋中進行的雜交a.???????將膜塞入熱密封袋中（如Sears Seal-A-Mea
Genomic－Southern－Blot
SolutionsProtocol:Digest 5-10 μg genomic DNA overnight with restriction enzyme of choice.Run digested gDNA on 0.8% TAE gel with marker (with no ethidi
Southern－印跡實驗
實驗方法原理?本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙錠儀器、耗材?電泳儀紫外透射儀實驗步驟 一、向上毛細管轉移法的轉移疊層系統：：圖一、向上毛細管轉移法的轉移
Southern－Blots－技術
Southern Blot Flow一 基因組酶切和電泳在200 μl 微量離心管中加入：25 μl DNA樣品(約10μg)，3μl 限制性內切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相應的10×buffer，補水到50μl。然后加一滴礦物油覆蓋, 稍微離心后放于37℃水浴8-12小時。酶切完后，
Southern－blot實驗
實驗方法原理?互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的，可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA，也可以是細胞總DNA 或總RN
Southern－blot實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線
Southern印跡技術
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
Southern－印跡實驗
印跡法 堿性緩沖液法 向下毛細管轉移法 電轉印法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設
Southern－blot實驗
Southern blot可應用于：（1）檢測重組DNA；（2）分析DNA樣品中是否有與探針序列同源的DNA片段；（3）驗證檢測片段的分子量大小。實驗方法原理具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠
放射性標記的探針與固定在膜上的核酸的Southern雜交
實驗方法原理 Southern 雜交獲得的信號強度取決于若干因素，包括固定的 DNA 與探針互補的比例、探針的大小及特異活性以及轉移到膜上的基因組 DNA 的數量。在最佳條件下，這種方法的敏感度足以檢測到與 32P 標記的高度特異（>109 cpm/μg）的探針互補的
放射性標記的探針與固定在膜上的核酸的Southern雜交
Southern 雜交獲得的信號強度取決于若干因素，包括固定的 DNA 與探針互補的比例、探針的大小及特異活性以及轉移到膜上的基因組 DNA 的數量。在最佳條件下，這種方法的敏感度足以檢測到與?32P 標記的高度特異（>109?cpm/μg）的探針互補的109?cpm/μg）的探針互補的
放射性標記的探針與固定在膜上的核酸的Southern雜交
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Southern 雜交獲得的信號強度取決于若干因素，包括固定的 DNA 與探針互補的比例、探針的大小及特異活性以及轉移到膜上的基因組 DNA 的數量。在最佳條件下，這種方法的敏感度足以檢測到與 32P 標記的高度特異（>109
Genomic－Southern－Blot－Analysis
This chapter describes a detailed protocol for genomic Southern blot analysis which can be used to detect transgene or endogenous gene sequences
Southern－Blotting:－DNA－Transfer
Southern Blotting: DNA Transfer 1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels), 7' (large gels) 2. Denaturation: Wash gel
SOUTHERN－BLOT的步驟
1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a ruler adjacent
Southern－轉印分析
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
Southern轉膜方法
Southern轉膜方法（毛細管虹吸印跡法、電轉移法與真空轉移法）將凝膠中的DNA進行堿變性并將pH值恢復至中性后，即可將凝膠中的DNA片段轉移到固相支持物上。用于轉膜的固相支持物有多種，包括硝酸纖維素濾膜(NCM)、尼龍膜、化學活性膜和濾紙等，Southern轉膜時可根據需要選擇不同的固相支持物用
Screen－ES－cells－by－Southern－Blot
Digest DNA in 96-well plate To each well add: 4ul 10Xbuffer 4ul Enzyme 0.4ul Spermidine(0.4M) 31.6ul H2O 37?C 19h, then add 4ul loading dye to each w
DNA（基因）檢測－Southern－Blot
DNA（基因）檢測－Southern BlotDNA吸印轉移1．室溫下將電泳后的瓊脂糖凝膠浸入500ml溶液A中，搖動30分鐘后換500ml新鮮溶液A再搖30分鐘，使DNA雙鏈堿變性。溶液A：5M NaCl?????300.0ml10M NaOH????50.0mlH2O?????????650.0
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
DNA印跡（Southern－Blot)實驗
【實驗原理】DNA印跡是1975年由英國Southern創建的。其基本原理是：DNA分子經限制性核酸內切酶酶切后，由瓊脂糖凝膠電泳將所得 DNA片段按分子質量大小分離，然后將DNA片段變性，并使凝膠中的單鏈DNA片段轉移到尼龍膜、硝酸纖維素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA 片段
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Southern－轉印分析方法步驟
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
Southern－Blot實驗原理及方法
實驗原理：Southern Blot是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，
分子雜交箱五大分類及功能
一、分子雜交箱五大分類：根據實驗的需求，可以將分子雜交箱分為5大類。 1、是用于大容量的分子雜交箱; 2、用于Southern 或者 Northern技術點雜交的雜交箱; 3、用于小容量的核酸雜交箱; 4、微孔板原位雜交箱; 5、載玻片原位雜交和平板雜交箱;? ??6、Western 雜交
產品類型/分子雜交儀
分子雜交儀 Hybridization Oven ?根據實驗的需求，可以將分子雜交儀分為5大類。 1、是用于大容量的分子雜交儀; 2、用于Southern?或者?Northern技術點雜交的雜交儀; 3、用于小容量的核酸雜交儀; 4、微孔板原位雜交儀; 5、載玻片原位雜交和平板雜交儀;