非標記抗體酶法PAP法
PAP復合物是離體制備的HRP抗HRP復合物，它的制備方法較多，現簡介其中之一。（1）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射滅活的卡介苗（共lOmg），2周后重復1次，刺激機體免疫系統功能，1周后于背部脊柱兩旁皮內多點注射1．Oral乳劑[福氏完全佐劑，含HRP3。3mg（RZ＝3．0）L間隔2周第2次注射，背部注入含3．3mg HRP的不完全福氏佐劑1．0ml；再間隔2周，第3次注射，2mgHRP（溶于2ml生理鹽水中），分別于前后小腿皮下和背部肌肉內多點注射，1周后采靜脈血，檢查效價。再隔1周第4次加強注射（條件同第3次），1周后檢查抗體效價，瓊脂糖擴散法（HRP 0．1mg／m1）為1：128以上時，頸動脈取血，制備血清低溫保存備用。（2）制備PAP復合物：離體條件下，使兔抗HRP抗體與HRP形成可溶性復合物。在制備抗HRP血清時，HRP的純度要高（RZ≥3），而制備PAP復合物時......閱讀全文
非標記抗體酶法PAP法
PAP復合物是離體制備的HRP抗HRP復合物，它的制備方法較多，現簡介其中之一。（1）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射滅活的卡介苗（共lOmg），2周后重復1次，刺激機體免疫系統功能，1周后于背部脊柱兩旁皮內多點注射1．Oral乳劑[福氏完全佐劑，含HRP3。3m
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——PAP－法
實驗方法原理與酶橋法相似，不同的是酶橋法分四步，而 PAP 法分三步。PAP 法將酶橋法的步驟（3）、步驟（4）合二并為一，用 PAP 復合物替代，故稱 PAP 法（圖 4-9）。PAP 復合物中的抗 HRP 抗體和第一抗體必須為同一種屬動物的 IgG，這樣橋抗體才能作為「橋」將 PAP 復合物連接
免疫酶標方法(直接法、間接法、PAP法和雙PAP法)
一、直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1:10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色結
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——雙－PAP－法
實驗方法原理在 PAP 法的基礎上重復第二抗體和 PAP 復合物，重復的連接抗體和 PAP 復合物可能有以下兩種連接方式（圖 4-10）。第一種（A）重復連接抗體可與一個 PAP 中的抗 HRP 抗體上未飽和的 Fc 段結合，再與后加的 PAP 復合物相結合；第二種（B）重復連接抗體與特異性一抗分子
免疫酶標技術——雙PAP法
實驗方法原理這種方法可在復合物體系中連接更多的PAP復合物，對抗原可進一步放大，因此靈敏度更為增強，適用于微量抗原的檢測。實驗材料抗體試劑、試劑盒PBSH2O2血清DAB蘇木精儀器、耗材顯微鏡實驗步驟1. ?標本固定后，PBS洗滌；2. ?1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻斷內源性過氧化物，室
關于抗過氧化物復合物制備技術的簡介
Stemberger(1970)等，首先報道了過氧化物酶-抗過氧化物酶復合物（peroxidase-antiperoxidase,PAP）法，此法也稱為非標記抗體酶法（unlabelled antibody enzymemethod）。PAP法不需用任何化學交聯劑處理酶和抗體，二者活性不受化學反
免疫細胞化學技術的某些新進展
免疫細胞化學技術在繼續改進和完善中，新的技術方法不斷出現。除目前國內已開始應用的免疫金技術和免疫金銀技術外，80年代，新的免疫細胞化學技術還有半抗原交聯抗體法和令人矚目的分子雜交免疫細胞化學技術。免疫金銀技術和分子雜交免疫細胞化學技術將分別以專章 敘述，本節 僅就半抗原交聯抗體法作一簡要介紹。 【
隨機引物法標記－DNA
實驗方法原理 利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互補物將以同樣的頻率摻入產物。實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ Kl
隨機引物法標記－DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互補物將以同樣
隨機引物法標記－DNA
利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸（5' 端的核苷酸除外）的互補物將以同樣的頻率摻入產物。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法
隨機引物法標記探針
實驗概要本實驗探針標記采用TAKARA公司的隨機引物標記試劑盒Ver.2。實驗步驟1．于1.5ml離心管中加入5μl H2O，2μl引物(N6)，5μl DNA(0.1μg-1μg)。2．充分混勻，98°C 3分鐘。3．離心1秒鐘，將離心管蓋上的汽化水甩下。4．加入2.5μl dNTPs(各2.5m
SPA－在免疫組化中的應用——PAP－法
SPA 可為多種示蹤物（如熒光素、酶、膠體金、鐵蛋白）所標記，應用較廣泛的為酶標記 SPA 和金標記 SPA 技術。標記 SPA 常用的酶為 HRP，可應用于間接法染色，SPA 在 PAP 法中可代替橋抗體。實驗方法原理SPA 除與標記物結合后用于代替第二抗體外，其本身可作為橋抗體用于 PAP 染色
FITC標記抗體Marsshall氏法
材料：抗體球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液、無菌生理鹽水、異硫氰酸熒光素、1%硫柳汞水溶液、三角燒瓶（25—50ml）、冰及冰槽（或1000ml燒杯）、電磁攪拌器、滅菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等； 方法
FITC標記抗體Chadwick氏法
試劑：抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞；?材料：離心機及離心管、三角燒瓶（25ml）、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）等；?方法與步驟：1.?????? 抗體的準備。用0—4℃ pH8.0的PBS
FITC標記抗體Chadwick氏法
FITC標記抗體-Chadwick氏法試劑：抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L 、1%硫柳汞；材料：離心機及離心管、三角燒瓶（25ml）、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）等；方法與步驟：抗體的準備。用0—4℃ pH8.
FITC標記抗體改良法
FITC標記抗體-改良法 試劑： 1.0.01mol/L pH7.2 配方。將NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g， 溶于2000ml三蒸水中，調整pH至7.2； 2.0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液配法。量取0.5mol/L Na2CO3（5
FITC標記抗體Marsshall氏法
材料：抗體球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液、無菌生理鹽水、異硫氰酸熒光素、1%硫柳汞水溶液、三角燒瓶（25—50ml）、冰及冰槽（或1000ml燒杯）、電磁攪拌器、滅菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）、pH7.2或8.0的0.01mol/L 等；方法與步驟：
抗體酶的雜交瘤技術制備法介紹
經體內免疫后再進行細胞融合是制備抗體酶的一種傳統方法。雜交瘤技術的基本原理是用不能在培養液中生長的但能產生抗體的脾臟細胞，與能在培養液中生長的骨髓瘤細胞進行融合，融合得到的雜交細胞既能產生抗體又能在體外培養，通過選擇培養，以獲取能產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。再把這些細胞單克隆化，即繁殖成母體的同
非標記抗體免疫電鏡實驗——快速法(瓊脂擴散法)
實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
免疫酶細胞化學實驗技術2
（四）染色原理及步驟 1．基本原理 酶標抗體與熒光色素標記抗體的染色相同，亦分直接法和間接法。直接法是將酶直接標記在每一抗體上，間接法是將酶標記在第二抗體上，檢測組織細胞內的特定抗原物質。間接法所用的第一抗體是對組織細胞內某種抗原的特異性抗體（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而絕大數單克隆
免疫酶細胞化學技術中的雙PAP法檢測微量抗原
在復合物體系中連接更多的PAP復合物，來進一步放大抗原，從而使靈敏度更為增強，適用于檢測微量抗原。實驗方法：?將固定后的標本用PBS漂洗；2.?于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內源性過氧化物酶；3.?PBS漂洗2次，每次3min；4.?在室溫下用二抗的正常血
免疫分析法標記技術
基本原理：采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質 標記抗體（或抗原）進行抗原 -抗體反應，通過對免疫復合物中的標記物的測定，達到對免疫反應進行監測的目的。 標記免疫技術主要類型：放射免疫技術、酶免疫技術、熒光免疫技術、化學發光免疫技術 放射免疫標記技術（RIA） 基本原理:根據抗原抗體特異性結合
切口平移法標記探針的步驟
(1)模板 DNA 的制備用限制性內切酶將載體上的外源 DNA 酶切并進行瓊脂糖凝膠電泳回收純化,瓊脂糖殘留可抑制切口平移反應,因此徹底清除瓊脂糖至關重要。也可以用帶有外源 DNA 克隆片段的重組載體為模板來切口平移制備探針。(2)切口平移標記將模板 DNA 水溶液、DNase Ⅰ、未標記的三磷酸單
光譜法和非光譜法的異同
光譜法:當物質與輻射能作用時，物質內部發生能級之間的躍遷;記錄由能級躍遷所產生的輻射能強度隨波長(或相應單位)的變化，所得的圖譜稱為光譜。利用物質的光譜進行定性、定量和結構分析的方法稱為光譜分析法，簡稱光譜法。非光譜法:非光譜法是基于物質與輻射相互作用時，測量輻射的某些性質，如折射、散射、干涉、衍射
免疫分析法的標記技術
基本原理：采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質 標記抗體（或抗原）進行抗原 -抗體反應，通過對免疫復合物中的標記物的測定，達到對免疫反應進行監測的目的。標記免疫技術主要類型：放射免疫技術、酶免疫技術、熒光免疫技術、化學發光免疫技術 基本原理：利用化學或生物發光系統作為抗原抗體反應的指示系統，借以定量檢測
免疫分析法的標記技術
基本原理：采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質 標記抗體（或抗原）進行抗原 -抗體反應，通過對免疫復合物中的標記物的測定，達到對免疫反應進行監測的目的。標記免疫技術主要類型：放射免疫技術、酶免疫技術、熒光免疫技術、化學發光免疫技術 基本原理：利用化學或生物發光系統作為抗原抗體反應的指示系統，借以定量檢測
HRP標記抗體簡易過碘酸鈉法
實驗概要本實驗用簡易過碘酸鈉法進行HRP標記抗體。本法是以NaIO4先將HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再與Ig上的氨基相結合，所獲酶標記抗體的產率高，將近70%的HRP和Ig結合，99%的Ig與酶結合，酶與Ig的活性無重大損失，是目前最常用的方法。實驗原理經典的過碘酸鈉法中需采用二硝基氟苯封閉H
非標記抗體免疫電鏡實驗——經典法
不標記抗體法通過系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。用于（1）抗體觀察（2）免疫學研究。實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有
標記抗原捕捉ELISA法的主要程序
① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干③ 加酶標抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。
免疫分析法的標記技術
基本原理：采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質 標記抗體（或抗原）進行抗原 -抗體反應，通過對免疫復合物中的標記物的測定，達到對免疫反應進行監測的目的。 標記免疫技術主要類型：放射免疫技術、酶免疫技術、熒光免疫技術、化學發光免疫技術 放射免疫標記技術(RIA) 基本原理:根據抗原抗體特異性結合