斑馬魚胚胎DNA的制備
材料和試劑1. 蛋白酶K(羅氏03115836001)2. 1M的Tris,pH值8.33. 氯化鉀4. 吐溫20(10%,EMD4 biosciences,655207)5. NP40(10%,Merck,492018)設備1. PCR儀2. ......閱讀全文
斑馬魚胚胎DNA的制備
材料和試劑1.????????蛋白酶K(羅氏03115836001)2.??????? 1M的Tris,pH值8.33.??????? 氯化鉀4.??????? 吐溫20(10%,EMD4 biosciences,655207)5.??????? NP40(10%,Merck,492018)設備1.
斑馬魚胚胎細胞的培養
成纖維細胞飼養層 原代培養 細胞系 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過用鏈酶蛋白酶除去絨毛膜、用添加成分的 FGF 培養液培養細胞和采用不同的胰蛋白酶消化
方案27.6-斑馬魚胚胎細胞的培養
成纖維細胞飼養層 原代培養 細胞系 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過用鏈酶蛋白酶除去絨毛膜、用添加成分的 FGF 培養液培養細胞和采用不同的胰蛋白酶消化
斑馬魚的胚胎原位雜交試驗實錄
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養,到達所需要的發育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗,然后換成甲醇,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧水處理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養,可阻斷色素的形成)原位
斑馬魚胚胎細胞的培養——細胞系
實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTAZEM-2細胞(或等同物)試劑、試劑盒LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培養液D培養液Holtfreter緩沖液實驗步驟鱒魚胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鱒魚種系
斑馬魚胚胎細胞的培養——原代培養
實驗方法原理收集胚胎,除去絨毛膜,用胰蛋白酶分散胚胎細胞,然后在胚胎成纖維細胞飼養層上培養從斑馬魚囊胚和原腸期胚獲得的原代細胞。實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纖維細胞飼養層人重組白血病抑制因子試劑、試劑盒LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培
定向基因編輯改寫斑馬魚的DNA
斑馬魚是基因研究中一種常用的模式生物。現在科學家可以對它們的基因組進行定向的編輯。 據Nature近日報導,在對脊椎動物和人類疾病的研究中,斑馬魚是一種重要的模式生物。它的卵是透明的,在體外孵化,它的繁殖周期很短,生長速度快,這些都意味著,很適合在生物生存的條件下對它的胚胎進行密切研究。而
斑馬魚
一、概述斑馬魚是生長在印度、巴基斯坦淡水河流中的一種硬骨魚(鯉魚),成年魚全身僅長4-5厘米,因全身橫向分布著一道一道褐色的斑馬線而得名。斑馬魚很容易在實驗室飼養,一般3個月就可以達到生殖成熟期,雌魚每次產卵200枚左右,一生可產卵數千枚,斑馬魚所產之卵經24小時即可胚胎發育成熟,仔魚期只有1個月。
以斑馬魚胚胎為模型-研究胚胎發育早期的自我保護機制
當生物體遇到藥物或化學污染物入侵時,它會應激性地提高自身轉化及外排能力,從而盡快將外源物降解或排出體外,從而實現自我保護,這一作用也被稱作生物體的外源物抵御作用。由于該作用決定了藥物或污染物在體內的停留時間,從而影響了藥物藥效或化學污染物毒性的發生,因而受到藥物學及環境毒理學研究的廣泛關注。
胚胎和成年斑馬魚眼情的組織學準備
INTRODUCTIONThis protocol describes the histological preparation of embryonic and adult zebrafish eyes. The methods described here can be easily adapt
斑馬魚胚胎細胞的培養——成纖維細胞飼養層
實驗方法原理通過用鏈酶蛋白酶除去絨毛膜、用添加成分的 FGF 培養液培養細胞和采用不同的胰蛋白酶消化篩選成纖維細胞,用原腸胚期斑馬龜的胚胎成纖維細胞制備飼養層 [ Sun et al., 1995a ]。實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA受精后8h的胚胎FB
組織靶向性胚胎嵌合體—斑馬魚囊胚細胞移植
真核生物的基因調控比原核生物復雜得多。這是因為這兩類生物在三個不同水平上存在著重大的差別:①在遺傳物質的分子水平上,真核細胞基因組的DNA含量和基因的總數都遠高于原核生物,而且 DNA不是染色體中的唯一成分,DNA和蛋白質以及少量的RNA構成以核小體為基本單位的染色質;②在細胞水平上,真核細胞的染色
斑馬魚之后,CRISPR再探哺乳動物胚胎發育史
Researchers have used gene-editing to track the cell-by-cell development of a mouse embryo.Credit: Agnieszka Jedrusik and Magdalena Zernicka-Goetz
斑馬魚出生就識數!
意大利科學家發現,斑馬魚幼魚在孵化后96小時里可以識別不同數量的黑條,研究者表示這一發現表明數字能力可能在新生斑馬魚中是與生俱來的。相關研究3月24日發表于《通訊—生物學》。 過去的研究表明,人類新生兒和新孵化的孔雀魚、小雞(孵化時腦已經高度發育的物種)具有數學能力。但在此之前,人們對新生時處
斑馬魚顯微CT實驗
斑馬魚作為傳統的脊椎動物模型已經廣泛應用于人類疾病和胚胎發育過程的研究,斑馬魚全基因已經完全清楚,與人類基因組有85%同源性,這意味著在斑馬魚身上進行的實驗,其結果很多都適用于人類。斑馬魚與其他實驗常用動物相比,具有較高的繁殖率和生長速率,并且其胚胎發育過程是在體外進行的,科研人員通過顯微鏡直接觀察
斑馬魚基礎研究
近期,我們收到了很多小伙伴提交的文獻獎勵申請,其中,有2篇成功吸引了小編的注意,這2篇文章的內容都是斑馬魚研究相關的。我們都知道,斑馬魚是一種常見的模式生物,但是市面上針對斑馬魚的抗體卻非常少,我們不僅有一百多種斑馬魚抗體,而且還可以根據客戶需求來進行定制生產。下面來看看這2篇文章吧。01標題:Sa
轉基因斑馬魚的構建
實驗概要本實驗對斑馬魚導入含 EGFP的質粒,觀察其在動物體內的表達情況,在斑馬魚體內,綠色熒光蛋白從原腸胚到出苗期均能在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光。主要試劑EGFP、綠色熒光蛋白基因、pEGFP-N2載體、E.coli主要設備試管、試管架、可調式微量加樣器、電泳儀、電泳槽、染色缸、42℃恒溫水浴箱
chiron在斑馬魚胚胎發育和適應性演化中的作用
自達爾文時代以來,生物學家一直關注一個重要問題——生物是如何從共同的祖先演化成為豐富多樣的物種的?新基因的產生是生物演化和物種多樣性形成的重要源泉。研究新基因的起源機制實質上是在探究生命演化的根源,但在分子水平上,新基因是如何被保留下來的、又是如何整合到已有的網絡通路中的、對生物的適應性演化做出
蠕蟲/胚胎流式分選系統斑馬魚體內藥物自動化高通量...
蠕蟲/胚胎流式分選系統-斑馬魚體內藥物自動化高通量篩選儀器的發展和驗證得益于基因組學、組合化學和高通量篩選技術的發展,利用小分子靶位進行藥物篩選研究,取得了長足的進步。但這種藥物篩選的方法,成功率只有不足3%,而且可以研究的已知靶位點十分有限。因此,尋找更好的藥物模型進行藥物的檢測和篩選是迫切需要解
通過流式細胞儀研究斑馬魚胚胎中細胞周期分析
[精華提要]結合綠色熒光蛋白表達的細胞周期分析廣泛的用于研究綠色熒光蛋白標記的細胞的細胞周期分布。這個方案是一種用綠色熒光蛋白標記的斑馬魚胚胎來分析細胞周期的方法。材料與試劑1.??????? PBS(Invitrogen公司14040)2.??????? 胎牛血清3.??????? 乙醇4.???
斑馬魚基因編輯技術介紹
斑馬魚又叫藍條魚,因為其體表有暗藍色和銀色的類似于斑馬一樣的條紋而命名。斑馬魚屬于鯉科魚類,同屬鯉科的還有我們十分熟悉的鯉魚、鯽魚等。斑馬魚的體型較小,成魚體長約4-6厘米,而且成魚常年產卵且產卵量大,可達300-1000粒,還是體外受精并發育,因此十分適合進行實驗室的大規模養殖與篩選。斑馬魚這種原
斑馬魚人類疾病模型的構建
斑馬魚是唯一的經過大規模遺傳篩選的脊椎動物物種。許多斑馬魚的哺乳動物同源基因已經被克隆,并且發現有相似的功能,證實了斑馬魚作為人類疾病模型的可行性。通過Tol2轉座子技術、基因突變(插入誘變、ENU化學誘變)、基因敲除(TALEN,CRISPER)等技術,構建在特點靶點標記熒光蛋白的轉基因品系及
SDS法提取斑馬魚DNA詳細操作步驟及各步原理
原理:SDS:使細胞裂解,使與DNA雙鏈緊密相連的組蛋白分開和變性。EDTA:可以與鎂離子螯合,從而有助于阻止核酸分子間的聚集,及核酸與蛋白質分子的聚集,與SDS一樣,還可抑制核酸酶的活性。蛋白酶K:水解蛋白質,在SDS存在下活性增強,不受EDTA的抑制,在較高溫度下仍有活性。苯酚/氯仿:去除變性的
斑馬魚色素細胞如何形成條帶
一項研究發現,斑馬魚的特征條帶反映了這種動物的皮膚上的色素細胞的運動和它們之間的相互作用。盡管科研人員長久以來就注意到了數學模型可以準確地重現動物界的許多特征條帶和斑點,動物圖案背后的生物過程在很大程度上尚未得到解釋。為了更好地理解這些過程,Hiroaki Yamanaka 和Shigeru
關于肝損傷修復及其分子調控機制
利用 CRISPR/Cas9 技術,針對靶基因序列設計 sgRNA, 指導 Cas9 蛋白在特定基因位點引起 DNA 雙鏈斷裂,在非同源性末端接合修復斷裂 DNA 的過程中,靶基因堿基突變或缺失被引入到斑馬魚基因組中,最終導致靶基因無法正常轉錄翻譯,達到基因敲除的目的。目前我們利用 CRISPR
斑馬魚的基因敲除定制(Cas9KO)法介紹
利用 CRISPR/Cas9 技術,針對靶基因序列設計 sgRNA, 指導 Cas9 蛋白在特定基因位點引起 DNA 雙鏈斷裂,在非同源性末端接合修復斷裂 DNA 的過程中,靶基因堿基突變或缺失被引入到斑馬魚基因組中,最終導致靶基因無法正常轉錄翻譯,達到基因敲除的目的。目前我們利用 CRISPR
斑馬魚的基因敲除定制(Cas9KO)法介紹
利用 CRISPR/Cas9 技術,針對靶基因序列設計 sgRNA,?指導 Cas9 蛋白在特定基因位點引起 DNA 雙鏈斷裂,在非同源性末端接合修復斷裂 DNA 的過程中,靶基因堿基突變或缺失被引入到斑馬魚基因組中,最終導致靶基因無法正常轉錄翻譯,達到基因敲除的目的。目前我們利用 CRIS
鳉魚胚胎“假死”求生
非洲藍綠鳉生活在津巴布韋和莫桑比克的小水洼里。為了度過每年的旱季,鳉魚胚胎會進入一種極端的假死狀態或大約8個月的滯育期。現在,研究人員發現了鳉魚進化出這種極端生存狀態的機制。相關研究近日發表于《細胞》。盡管鳉魚在不到1800萬年前就進化出了滯育,但它們是通過選擇起源于4.73億年前的古老基因來做到這
敲降斑馬魚基因的方法學比較
一、基因敲降的前期準備工作相同 1.1 生物信息學分析目標基因在斑馬魚早期胚胎發送過程中是否有表達。 1.2 收集斑馬魚早期發育胚胎(通常為48 hpf前的胚胎),提取總RNA,然后進行體外轉錄(RT)。 1.3 設計檢測目標基因表達的PCR引物,以1.2獲得的cDNA為模板,
斑馬魚基因敲除是怎么做的
一、基因敲除的設計方案 1.1 基因的基本信息 確認斑馬魚基因的基本信息,包括名稱ID號等,一般會在NCBI等查詢。 1.2 分析基因結構、氨基酸序列等做生物學信息的分析 1.3分析蛋白質的保守結構功能域 通過綜合考慮,設計最佳的KO靶點。 1.4