PCR方法檢測病原微生物
多聚酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)是一種模擬天然DNA復制過程，在體外擴增特異性DNA（或RNA）片段的新技術。本實驗是將待檢雙鏈DNA經94℃高溫變性成單鏈作模板，然后加入一對人工合成的寡核苷酸引物，引物分別與待擴增DNA片段的兩端互補，經55℃低溫退火，引物與模板互補結合。在72℃條件下，結合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下，利用反應體系中的4種dNTP為原料，按堿基互補配對的方式延伸合成兩條新的DNA鏈。經過20-30個周期后，特異的目的DNA可擴增百萬倍以上。PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳后即可觀察到特異的擴增條帶。 PCR方法操作簡便，靈敏度高，可檢測出少至0.1pg的目的DNA。目前已廣泛應用于多種病原微生物及寄生蟲的檢測。 【材料】 1．無菌雙蒸水、石蠟油、溴化乙錠 2．10×PCR反應緩沖液 3．25mmol dNTP混合液 4．引物1，引物2各50pmol／u......閱讀全文
PCR方法檢測病原微生物
多聚酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)是一種模擬天然DNA復制過程，在體外擴增特異性DNA（或RNA）片段的新技術。本實驗是將待檢雙鏈DNA經94℃高溫變性成單鏈作模板，然后加入一對人工合成的寡核苷酸引物，引物分別與待擴增DNA片段的兩端互補，經55℃低溫退火，引
PCR方法檢測病原微生物
多聚酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)是一種模擬天然DNA復制過程，在體外擴增特異性DNA（或RNA）片段的新技術。本實驗是將待檢雙鏈DNA經94℃高溫變性成單鏈作模板，然后加入一對人工合成的寡核苷酸引物，引物分別與待擴增DNA片段的兩端互補，經55℃低溫退火，引
PCR方法檢測病原微生物
多聚酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)是一種模擬天然DNA復制過程，在體外擴增特異性DNA（或RNA）片段的新技術。本實驗是將待檢雙鏈DNA經94℃高溫變性成單鏈作模板，然后加入一對人工合成的寡核苷酸引物，引物分別與待擴增DNA片段的兩端互補，經55℃低溫退火，引
PCR檢測方法
PCR反應的zui大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。污染原因一、標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染
PCR檢測方法（一）
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。污染原因一、標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致
PCR檢測方法（二）
3.實驗操作注意事項：盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意：（1）戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套。（2）使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用，吸頭不
超多重PCR技術及其在臨床病原微生物檢測的應用（一）
一超多重PCR技術簡介1.1 PCR及多重PCR技術1.1.1 PCR技術聚合酶鏈式反應(PCR)是一種在體外是用已知寡核苷酸引物引導未知片段中微量待測基因片段進行擴增的技術。PCR反應體系主要包括待擴增樣品模版、特異性引物、DNA聚合酶(polymerase)、擴增底物dNTPs以及含有Mg2+的
超多重PCR技術及其在臨床病原微生物檢測的應用（二）
1.3 靶向-NGS（tNGS）技術的應用超多重PCR兼具PCR對于特定微量DNA模板的特異性擴增性能以及多個片段同步擴增的能力，配合NGS測序，會擁有比普通宏基因組，全外顯子組測序更為靈敏的特定基因檢出率，此外前期建庫流程更加簡便易行并具有相當大的成本優勢。目前tNGS技術的應用范圍至少包括遺傳疾
超多重PCR技術及其在臨床病原微生物檢測的應用（三）
2.2.2 基于分子的病原體檢測技術2.2.2.1蛋白檢測目前針對病原體蛋白的直接檢測使用質譜技術，基于已建立的微生物胞膜蛋白質、脂多糖、核酸等的數據庫對微生物進行精準鑒定和分析。質譜方法針對培養后濃度較高、品種較為單一的待測樣品，通過獲得其蛋白質圖譜，再與已知微生物構建的數據庫的參考圖譜進行比對，
病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些
1、快速測試片技術法快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。細菌總數檢測紙片的研制始于 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm